SN/T 3684-2013.Detection and identification of Protomyces macros porus Unger.
1范围
SN/T 3684规定了香菜茎癭病菌(Protomyces macros porus Unger)检疫鉴定方法。
SN/T 3684适用于来自香菜茎瘿疫区的伞形花科芫荽属和菊科种子及其他主要寄主植物苗木携带的香菜茎癭病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程
3香菜茎瘿病 菌基本信息
学名:Protomyces macros porus Unger
分类地位:香菜茎癭病菌属真菌界(Fungi),子囊菌门( Ascomycota),半子囊菌亚纲(Taphrinomy-cetidae) ,外囊菌目(Taphrinales)，原子囊科( Protomycetaceae)原囊菌属(Protomyces)。
传播途径:病菌在土壤中能够长期存活，当年收获遗留田间的植物残渣中的厚垣孢子等成为次年初侵染源。远距离传播方式为厚垣孢子、休眠孢子随着种子、土壤和植物残渣传播。
香菜茎癭病菌的其他信息参见附录A。
4原理
病原菌的寄主范围(参见附录A)及其病菌在寄主植株上的症状特点、形态学特征(见附录B)作为香菜茎癭病菌的检疫鉴定依据。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3684—2013
香菜茎瘘病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Protomyces macrosporus Unger2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。SN/T3684—2013
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局本标准主要起草人：贺艳、刘伟、张裕君、崔颖、刘跃庭、刘鹏、I
1范围
香菜茎瘘病菌检疫鉴定方法
本标准规定了香菜茎瘦病菌（ProtomycesmacrosporusUnger）检疫鉴定方法。SN/T3684—2013
本标准适用于来自香菜茎瘦疫区的伞形花科芜要属和菊科种子及其他主要寄主植物苗木携带的香菜茎瘦病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3香菜茎瘦病菌基本信息
学名：Protonyces macrosporusUnger分类地位：香菜茎瘦病菌属真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），半子囊菌亚纲（Taphrinomycctidae），外囊菌月（Taphrinales），原了囊科（Protomycetaceae）原囊菌属（Protomyces）传播途径：病菌在土壤中能够长期存活，当年收获遗留田间的植物残渣中的厚垣孢子等成为次年初侵染源。远距离传播方式为厚垣孢子，休眠孢子随着种子，土壤和植物残渣传播。香菜茎瘦病菌的其他信息参见附录A。4原理
病原菌的寄主范围（参见附录A）及其病菌在寄主植株上的症状特点、形态学特征（见附录B）作为香菜茎病菌的检疫鉴定依据。
5设备和试验用具
仪器设备
体视显微镜、生物显微镜、超净T作台、生物培养箱、电子天平（感量0.01g）、高压灭菌锅。5.2
试验用具
放大镜、灭菌培养血、三角瓶、镀子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、解剖刀、酒精灯、标签、载玻片、盖玻片等。
6试剂和培养基
6.1试剂
马铃薯、葡萄糖、琼脂、链霉素、1.0%次氯酸钠（NaCIO)、无菌水、酒精1
SN/T3684—2013
6.2培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，PDA选择性培养基和燕麦汁培养基（参见附录C)。7检验方法
7.1种子检验
将可疑种子用纱布包好。放人1%次氯酸钠溶液消毒5min，灭菌水洗3至4次，灭菌滤纸吸干水分后，置于PDA选择性培养基平板上，每皿放置3～4粒，置25℃培养，3d后开始观察。解剖镜下发现有褐色菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转人PDA上纯化培养，7d后用显微镜观察，记录其形态特征，并测定菌丝生长速度、分生孢了梗着生和顶部分枝情况、分生孢子梗长度和宽度、子囊孢子大小等。7.2苗木检验
7.2.1直接镜检
在病症上加一滴50%乳酸后，观察自然侵染的叶片和蒸部里面菌丝和产囊丝以及瘘瘤的横向和纵向形态，用光学显微镜测量100个产囊丝的平均长度和平均宽度。7.2.2组织保湿法
在培养皿内铺上保湿滤纸，用灭菌水洗采集的病样组织样品3次，置于滤纸上，喷雾保持病样高度湿润，置于25℃培养箱内在自然光或弱光下培养，3d后取出叶片观察菌丝和产囊丝以及瘦瘤的横向和纵向形态，
7.2.3分离培养
挑选出的植株残体或可疑的病斑组织剪成0.5cm×0.5cm小段，用纱布包好放入1%次氯酸钠溶液消毒5min，灭菌水洗3~4次灭菌滤纸吸干水分后置于PDA选择性培养基平板上，每Ⅲ放置3~4片，置于25℃培养，3d后开
始观察。
解部镜下发现有褐色菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转人PDA上纯化培养。7d后用显微镜观察，记录其形态特征，并测定分生孢子梗着生和顶部分枝情况、分生孢子梗长度和宽度、子囊孢了人小等8鉴定特征
8.1症状
香菜茎瘦病菌侵染后，种子变形，肥大，变硬。香菜茎瘦病菌通常在叶片、叶脉、中脉和叶柄部形成瘦瘤。侵染叶片时在叶片上形成黄色凸起，凸出叶片表层。在叶脉和叶柄部上形成透明的黄白色肿大，延伸像水泡香菜茎瘦病菌侵染水芹属植物，使得植物的茎伞状排列，或者形成粗大的茎，采摘后变黑：侵染花序后，使得子房肿大，严重时子房萎缩。香菜茎瘦病菌侵染翅果属植物后在茎、叶和果上形成白绿色至褐色的大瘤或圆形肼抵，但是叶上的瘘瘤通常形成在叶柄、叶脉和细脉上。侵染兰芹属植物时会形成深褐色瘦瘤：
8.2病原菌特征
8.2.1培养性状
香菜茎瘦病菌可以在马铃薯葡葡糖琼脂培养基上培养。20℃～25℃培养7d10d后，产囊丝为2
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SN/T36842013
圆形或近似圆形，由淡色变成淡棕黄色。产囊丝萌发形成泡囊状或管状子囊，里面有许多子囊孢子。从子囊中释放出来的子囊孢子单细胞，透明，近椭圆形8.2.2形态特征
具隔菌丝在叶组织间延伸，最终大量集中在维管束组织附近。产囊丝形成在寄主细胞间的菌丝上。菌丝生于寄主细胞间，它的顶端或中间的一些细胞膨大，形成有3层胞壁的厚垣孢子；厚垣孢子萌发时外壁破裂，内壁突起成泡囊，内含物移人泡囊。休眠孢子排成一层，内生孢子在休眠孢子内形成，休眠孢子间生，壁平滑；内生孢了成双配合。翅果属植物上的产囊丝为圆形或近圆形（46μm~83μm）×（40μm~68m）[通常是（59um~62μm）×（55μm～59um），外生跑子和孢壁中层是光滑的，外生孢子的厚度不一，三层加起来共6.2um,基部附属物为短蒂状。
m）[通常是（46μm~52μm）×
兰芹属植物上的产囊丝为圆形
彩(37um~7lμm）x(31qm~62m
（43μm~46μm）。产囊丝的壁有二层·淡黄棕色
外生跑子和孢壁中层是光滑的，2m厚，孢子内辟薄而透明，三层加起来共2um～3μm。找不到成熟的子囊，但经常能发现细胞壁破裂。9结果判定
症状符合8.1中的描述，病原菌培养性状和形态特征分别符合8.2.1和8.2.2中的描述，即可鉴定为香菜茎瘦病菌。
10菌株保存与处理
分离并最终鉴定为香菜茎瘦病菌的菌株应转人燕麦汁培养基斜面上，存活后经登记和经手人签字，置于4℃~8℃黑暗条件下保存，定期（60e）转接，以防止病菌死亡，至少保存6个月，必要时用病原菌子囊孢子作冻干菌种保存。保存期满后用高压灭菌灭活处理。3
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SN/T3684—2013
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
香菜茎瘦病菌基本信息
芜菱（Coriandrumsatioum）、菊科（Composilae）、翅果属（LaserpitiumLlatifolium）、兰芹属(Carumcarui)e
地理分布
丹麦、爱沙尼亚、芬兰、法国、德国、爱尔兰、立陶宛、荷兰、挪威、波兰、苏联、瑞典、瑞士、英国、北爱尔兰、津巴布韦、加拿大、苏格兰、澳大利亚、美国。在瑞士、斯洛伐克和喀尔巴阡山脉报导过香菜茎瘦病菌侵染翅果属。而香菜茎瘘病菌侵染兰芹属只在波兰、瑞士和挪威发生。4
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附录B
（规范性附录）
香菜茎瘦病菌危害症状及病菌形态特征注：引自Crop Protection Compendium 2007Edition.图B.1芜要（Coriandrumsativum）茎干感病后初期及后期病症SN/T3684—2013
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SN/T3684—2013
注：引自CropProtectionCompendium2007Edition.图B.2芜要（Coriandrumsativum）花序感病后初期及后期病症注：自Malcolmstorey.2o11.
香菜茎瘦病菌（Protomycesmacrosporus Unger）的厚垣孢子图B.3
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说明：
翅果属叶片上的惠瘤（标尺1mm）；叶片维管束组织中的菌丝和产囊丝（标尺50m）：在菌丝细胞间和插人中间的产囊丝（标尺50pm）：成熟的产囊丝具有三层细胞壁（标尺50m）：成熟的产囊丝，细胞壁破裂后释放出孢子（标尺50μm）。注：引自kamila，2co8
图B.4香菜茎瘦病菌侵染翅果属叶片镜检结果SN/T3684—2013
SN/T3684—2013
说明：
兰芹属茎上的瘦痛（标尺1In）
侵染茎部横截面—
一菌丝沿若维管束组织扩展（标尺50m）在维管束组织中形成产囊丝（标尺50um)；成熟的产囊丝（标尺50um）：
成熟的产囊丝具有三层细胞壁（标尺50m）；囊的形成（标尺50um）。
注：引kamila2008
图B.5香菜茎瘦病菌侵染兰芹属茎叶镜检结果成分
马铃薯
葡萄糖
链霉素
蒸馏水
配制方法
（资料性附录）
马铃薯琼脂葡萄糖（PDA)选择性培养基配制方法200g
1000ml
SN/T36842013
马铃薯去皮后洗净，切成小块，蒸馏水中充分煮沸30min，用4层纱布过滤，加人琼脂，加热使之完全溶解.用蒸馏水定容至1000mL，混勾后分装于三角瓶中，121℃高压火菌15min。培养基冷却至不烫手时无菌操作下添加链霉素并混勾，将大约15mL的培养基倒入无菌培养血中，静置备用。9
SN/T3684—2013
参考文献
1CropProtectionCompendium2007Edition(ISSN.1365-9065,ISBN.978-1-84593-357-9)[2Kamila Bacigalova,Marcin Piatek,Marek Wolkowycki,Protomyces Cirsi-Oleracei(Fungi,Protomycetales),aNew Species forPoland,PolishBotanical Journal 2005,Vol.50,No.1,77-82.[3 Kamila Bacigalova,WieslawMulenko,Agata Wolczanska,Novelties of Protomycetaccac inthe Tatra MTS,Polish Botanical Journal,2008,Vol.53,No,2,169-176.[4]A.N.Mukhopadhyay,M.S.Pavgi,Enviroment in Relationto Infection of Coriander by ProtomycesMacrosporusUnger,Ann.PhNo.3.215-319
[5] Robert Nicholas Trigiano,Mark Townsend Windham,Alan S.Windham,Plant pathology:concepts and laboratoryexercises,0849310377.9780849310379.6]K.Tubaki,Biologicaland CulttVol.49,No.1,44-54.
ThreeSpeciwww.bzxz.net
[7] Pavqi MS,Mukhopadhyay AN.Arificial culturfProtomyces，Mycologia.1957
and in vitro chlanydospore developnent ofProtmyces macrosporus Unger,Pathol Microbiol.1969.Vol.33,No.5,287-95.L8]MukhopadhyayAN.Pavqi MS,MukhopadhyayAN.Chlamydspore germination and artificial culture of Protomyces macrosporus UngerExperiential,1964,Vol.20.Ne.11,619.L9JSappin-Trouffy,P.1897.Note sur la place da Protomyces macrosporus Unger dans la classification.Le Botaniste 5:285-288.[10]］魏景超，真菌鉴定手册，上海出版社，1982[l]] Pavqi MS,Mukhopadhyay
AN,Transmi
ission of Pratomyces macrosporus Unger,the Incit-ant of Stcm Gallof Coriander,Anp Phytopath.Soc.Japan.1969,36.265-270.10
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