SN/T 3683-2013.Detection and identification of Mycos phaerella gibsonii H. C. Evans.
1范围
SN/T 3683规定了进出境植物检疫中松针褐枯病菌MycosphaerellagibsoniH.C.Evans的检疫鉴定方法。
SN/T 3683适用于来自松针褐枯病菌疫区的寄主植物苗本、切枝以及松针的检疫。
2松针褐枯病菌基本信息
学名:Mycos phaerella gibsonii H.C. Evans 1984
异名:Cercos pora pini -densiflorae Hori & Nambu,Cercose ptoria pinir -densiflorae (Hori & Nam-bu) Deighton
英文名:Brown needle blight of pine，cercospora pine blight
分类地位:松针褐枯病菌有性阶段为子囊菌门(Ascomycota),座囊菌纲( Dothidemycetes) ,球腔菌科( Mycosphaerellaceae),球腔菌属( Mycosphaerella );其无性阶段为Pseudocercospora pini-densiflorae (Hori & Nambu) Deighton 1987。
传播途径:松针褐枯病菌通过风、雨水作近距离传播，随带菌苗木、切枝的调运作远距离传播。
松针褐枯病菌的其他相关信息参见附录A。
3方法原理
本方法遵循以松针褐枯病菌的形态特征为主，为害症状、寄主及地理分布为辅的鉴定原则。
4仪器和用具
4.1 仪器
显微镜,超净工作台,电子天平,光照培养箱,高压灭菌锅。
4.2 用具
培养皿、烧杯、三角瓶、镊子、剪刀、移植环.载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3683—2013
松针褐枯病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Mycosphaerella gibsonii H. C.Evans2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总后
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3683—2013
本标准起草单位：中华人民共和国安徽出入境检验检疫局、中华人民共和国昆山出人境检验检疫局、中华人民共和国湖北出人境检验检疫局本标准主要起草人：姚剑、纪容、廖太林、张萍、陈雪娇、李云飞、李刚、王振华、李百胜。1范围
松针褐枯病菌检疫鉴定方法
SN/T3683—2013
本标准规定了进出境植物检疫中松针褐枯病菌MycosphaerellagibsoniiH.C.Evans的检疫鉴定方法。
本标准适用于来自松针褐枯病菌疫区2松针褐枯病菌基本信息
学名：MycosphaerellagibsoniiH.C.Evans198及松针的检疫。
异名：Cercospora pini-densiflorae Hori&.Nambu,Cercoseptoria pini-densiflorae（Hori&Nam-bu)Deighton
英文名：Brownneedleblightof
pine.ccrcosporWww.bzxZ.net
pinebligh
分类地位：松针褐枯病菌有性阶段为子囊菌门（Ascomycota），座囊菌纲（Dothidemycetes），球腔菌科（Mycosphaerellaceae），球腔菌属（Mycosphaerella）：其无性阶）段为Pseudocercosporapini
densiflorae（Hori &.Nambu)Deighton 15传播途径：松针褐枯病菌通过风、雨水作近距离传播随带菌苗木、切枝的调运作远距离传播。松针褐枯病菌的其他相关信息参见附录A。3方法原理
本方法遵循以松针褐枯病菌的形态特征为主，为害症状、寄主及地理分布为辅的鉴定原则。4
仪器和用具
显微镜，超净工作台，电子天平，光照培养箱，高压灭菌锅。4.2用具
培养皿、烧杯、三角瓶、镊子、剪刀、移植环、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯、5试剂、材料和培养基
5.1试剂和材料
V8汁、葡萄糖、琼脂、无菌水、75%酒精、马铃薯、松针。5.2培养基
V8汁加松针煎汁培养基（P-V）、马铃薯葡萄糖培养基（PDA），培养基配方见附录B。SN/T 3683—2013
6鉴定方法
6.1症状检查
检查幼苗针叶是否坏死、脱落，是否有浅绿色、黄褐色至灰色的病斑，观察病斑上有无黑点。将疑似感病样品带回实验室作进一步检验。6.2切片检验
选取疑似感病样品·用剪刀剪取针叶组织（长约5mm）切片，从中选择片薄而带有黑点部分的切片，用移植环移宇载玻片中央的水滴中，在显微镜下观察子座、分生孢子梗以及分生孢子特征。如针叶病斑无了实体或了实体木成熟，可将感病针叶在25℃～30℃条件下保湿培养，待子实体长出并成熟后再做切片镜检。时间约需20d。
6.3分离培养
在典型病斑中切取小块病组织，在75%酒精中浸30S.用无菌水冲洗3次后置于P-V培养基上，25℃光照培养12h与0℃~-10℃黑暗培养12h交替进行。经纯化培养后.观察菌落生长性状，12d后镜检。
7鉴定特征
7.1无性阶段
分生孢子梗密集，丛生，暗褐色，直或稍弯，极少分隔，不分枝：大小2.5um×（10μm~45um）。分生孢了产生部位不加厚，无疤痕而具细点。分生孢子单生，淡黄褐色，长棍棒形，直或微弯，3~7分隔，基部平截或圆，不加厚，顶端钝圆：大小（20μm~60μm）×（2.5um~4.5um），大多数为（40μm~50μm)x(2.5μm4.5μm）。
7.2有性阶段
子座暗褐色，具疣状突起，充满气孔空隙，直径60μm～96um。子囊双囊壁，棍棒形至圆筒形，（33um~38μm）×（5.5μm7μm）；具加厚的钝圆的顶端，极少具气囊；（32um~36m）×（6μm~8m），8个抱子，排成倾斜两列。子囊间组织有或无。子囊抱子无色，1个分隔，椭圆形至楔形；(7.5μm12.5μm）X(1.8μm~2.8μm）：具油滴。7.3松针褐枯病菌与同属近似种区别松针褐枯病菌与近似种松针褐斑病菌MycosphaerelladearnessiBarr及松针红斑病菌Myco-sphaerellapiniE.Rostrup的区别参见附录C。8结果判定
如样品的切片和（或）分离培养的病菌形态特征与7.1和（或）7.2相符，即鉴定为松针褐枯病菌。9样品、菌种保藏
分离菌转接在PV培养基斜面上，待斜面表面长满菌丝后，置于4℃保存，定期转接。有条件可进行冷冻干煤保存。检出病菌的样品妥善保存6个月，保存期满灭活处理。2
iKAoNrKAca
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
松针褐枯病菌其他相关信息
SN/T3683-—2013
加勒比松（Pinuscaribaea）、地中海松（P.halepensis）、海岸松（P.pinaster）、辐射松（P.radiata）、加那利松（P.canariensis）、苏门答腊松（P.merkusii），多脂松（P.resinosa）北美乔松（P.strobus）欧洲赤松（P.sylvestris）、五叶松（P.pentaphyla）、糖松（P.lambertiana）、杰弗里松（P.jeffreyi）、欧洲黑松（P.nigra）、意大利伞松（P.pinca）、粗糙松（P.muricata）、美国黄松（P.ponderosa）、短叶松（P.cont-orta）、柔松（P.flerilis）、山松（P.montuna）、芒松（P.aristata）、瘤果松（P.attenata）、赤松（P.densiflora）、黑松（P.thunbergii）、琉球松（P.Luchuensis）、马尾松（P.Massoniana）、美洲短叶松（P.echinata)。
A.2分布
A.2.1亚洲：孟加拉、韩国、尼泊尔、斯里兰卡、泰国、越南、印度、日本、朝鲜、马来西亚、菲律宾以及中国（台湾、香港）。
A.2.2非洲：马拉维、坦桑尼亚、赞比亚、津巴布韦、肯尼亚、马达加斯加、斯威士兰。A.2.3美洲：尼加拉瓜、牙买加。A.2.4大洋洲，巴布亚新儿内亚。A.3
为害症状
为害症状见图A.1。
说明：
松苗为害状：
b——松针为害状。
注：引自ItoK.Bull.Gov.Exp.Sta.1972.No.246.21-33。图A.1松针褐枯病菌侵染黑松产生的为害症状3
KAoNiKAca
SN/T3683—2013
4无性阶段特征
无性阶段特征见图A.2。
说明：
分生孢子；
一分生孢子梗。
=10μm
注：引自ItoK.Bull.Gov.Exp.Sta.1972图A.2
A.5有性阶段特征
有性阶段特征见图A.3。
说明：
子囊：
子囊孢子。
0.246:21-33
松针褐枯病菌无性阶段特征
注：引自EvansHC.Mycological Papers.1984,No.153.63。图A.3松针褐枯病菌有性阶段特征4
-YrKAONIKAca
B.1V8汁加松针煎汁培养基（P-V)松针
10%V8汁
葡葡糖
加水定容至
200g（用浸出汁）
1000ml
马铃薯葡萄糖培养基（PDA）
马铃薯
葡萄糖
加水定容至
200g（用浸出汁）
1000mL
附录B
（规范性附录）
培养基配方
SN/T3683—2013
IKAoNiKAca
SN/T3683—2013
附录C
（资料性附录）
松针褐枯病菌与近似种的区别
松针褐枯病菌与近似种的区别见表C.1。C.1
表C.1松针褐枯病菌与近似种的区别种类
分生孢子
培养性状
松针褐枯病菌
(Mycosphaerella gibsonii)
淡黄褐色，壁薄、光滑
在PDA培养基上不产生红色素
和红色品体
松针上病斑浅绿色、黄褐色至
松针红斑病菌
(Mycosphaerella pint)
无色，壁薄、光滑
在PDA培养基上培养产生红色
素和红色晶体
松针上病斑红色
松针褐斑病菌
(Mycosphaerelladearnessii)
茶褐色或烟揭色，壁厚、上布黑色疣状突起
在PDA培养基上不产生红色素
和红色晶体
松针工病斑褐色
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参考文献
SN/T3683—2013
[i]ItoK.Cercospora needle blight of pines in Japan.Billetin of the Government Forestry ExperimentalStationTokyo,1972.246:21-33.[2] Evans H C.The genus Mycosphaerella and its anamorphs Cercoseptoria,Dothistroma andLecanasticta onpines.Mycological Papers,CABInternational,Wallingford,UK.,1984,153.[3]EPPO/CABI.Mycosphaerella dearnessiiandMycosphaerella pini.In:Quarantinepests forEurope.2ndedition.CABInternational,Wallingford,UK.,l996.[4]林际朗，陈贻谋.福建省主要林木病害名录.福建林业科技.1990,59（1)：76-79
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