SN/T 3680-2013
基本信息
标准号： SN/T 3680-2013
中文名称：可可链疫孢荚腐病菌检疫鉴定方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3680-2013.Detection and identification of Moniliophthora roreri (Ciferri et Parodi) Evans.
1范围
SN/T 3680规定了可可链疫孢荚腐病菌检疫鉴定方法。
SN/T 3680适用于进境可可种子、苗木中可可链疫孢荚腐病菌的检疫鉴定。
2可可链疫孢荚 腐病菌基本信息
学名: Moniliophthora roreri (Ciferri et Parodi) Fvans.
异名:Crinipellis roreri (Cif.) H.C Evans
Monilia roreri Ciferri.
中文名称:可可链疫孢荚腐病菌
英文名:pod rot of cacao
frosty pod rot
分类地位:真菌界(Fungi) ,担子菌门( Basidiomycota),担子菌纲( Basidiomycetes),伞菌目( Agari-cales),皮伞菌科(Marasmiaceae) ,Moniliophthora属。病菌其他信息參见附录A。
传播途径:可可链疫孢荚腐病菌主要通过果荚内部组织和种子表面粘附的孢子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株,随苗木远距离传播。
3方法原理
通过病菌的分离培养,依据病菌培养性状,形态学特征对可可链疫孢荚腐病菌进行鉴定。
4仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器、常规冰箱。
4.2 用具
培养皿(直径90mm~100mm)、滤纸、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、酒精灯。
5主要试剂和培养基
5.1培养基
马铃薯葡萄糖培养基(PDA)、PDA选择性培养基(参见附录B)。
1范围
SN/T 3680规定了可可链疫孢荚腐病菌检疫鉴定方法。
SN/T 3680适用于进境可可种子、苗木中可可链疫孢荚腐病菌的检疫鉴定。
2可可链疫孢荚 腐病菌基本信息
学名: Moniliophthora roreri (Ciferri et Parodi) Fvans.
异名:Crinipellis roreri (Cif.) H.C Evans
Monilia roreri Ciferri.
中文名称:可可链疫孢荚腐病菌
英文名:pod rot of cacao
frosty pod rot
分类地位:真菌界(Fungi) ,担子菌门( Basidiomycota),担子菌纲( Basidiomycetes),伞菌目( Agari-cales),皮伞菌科(Marasmiaceae) ,Moniliophthora属。病菌其他信息參见附录A。
传播途径:可可链疫孢荚腐病菌主要通过果荚内部组织和种子表面粘附的孢子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株,随苗木远距离传播。
3方法原理
通过病菌的分离培养,依据病菌培养性状,形态学特征对可可链疫孢荚腐病菌进行鉴定。
4仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器、常规冰箱。
4.2 用具
培养皿(直径90mm~100mm)、滤纸、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、酒精灯。
5主要试剂和培养基
5.1培养基
马铃薯葡萄糖培养基(PDA)、PDA选择性培养基(参见附录B)。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3680—2013
可可链疫孢莱腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Moniliophthora roreri (Ciferri et Parodi) Evans2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3680—2013
本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：罗加凤、王金成、蔡国瑞、王宏毅、沈建国。1
1范围
可可链疫孢莱腐病菌检疫鉴定方法本标准规定了可可链疫孢荚病菌检疫鉴定方法。本标准适用于进境可可种子、苗木中可可链疫孢英腐病菌的检疫鉴定。2可可链疫孢英腐病菌基本信息
学名：Moniliophthoraroreri（Cif1at0r
异名：Crinipetlisroreri（Cif.)H.C.EvansMonilia roreri Ciferri.
中文名称：可可链疫孢荚腐病菌英文名：podrotofcacao
frosty pod rot
SN/T3680—2013
分类地位：真菌界（Fungi），担了菌门（Basidiomycota），担子菌纲（Basidiomycetes），伞菌目（Agaricales），皮伞菌科（Marasmiaceae），Momitiophthora 属。病菌其他信息容见附录A。传播途径：可可链疫孢英腐病菌主要通过果内部组织和种子表面粘附的孢子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株，随苗木远距离传播。3方法原理
通过病菌的分离培养，依据病菌培养性状、形态学特征对可可链疫孢英腐病菌进行鉴定。仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器、常规冰箱4.2用具
培养皿（直径90mm~100mm）、滤纸、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、酒精灯。5主要试剂和培养基
5.1主要试剂
1.0%次氯酸钠（NaCIO）青霉素、链霉素、无菌水、酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂5.2培养基
马铃薯葡萄糖培养基(PDA）PDA选择性培养基（参见附录B)。1
SN/T3680—2013
6鉴定方法
6.1可疑材料挑选
6.1.1可可种子中可疑材料挑选
将待检样品倒人洁净白瓷盘内，挑选干癌、弱小、畸形、变色的可疑病种子（参见图C.1），用手术刀剥离种皮和种子，将种皮剪成0.4cm×0.4cm小块，用纱布包好进行下一步分离培养实验6.1.2可可苗可疑材料挑选
仔细检查植株茎部、枝条有无变色、肿胀，树皮开裂症状，发现可疑植株，取有症状的茎部或枝条组织，用剪刀剪成0.4cm×0.4cm小块，纱布包好进行下步分离培养实验。6.2分离培养及形态测定
6.2.1表面消毒
纱布包好可疑材料，用1.0%的次氯酸钠溶液消毒3min，无菌水冲洗3次，火菌滤纸吸干水分后用于培养。
6.2.2分离培养
消毒后的材料置PDA选择性培养基平板上，每血放置3～4块，25℃黑暗条件下培养。培养3d~5d后开始观察，发现乳白色或白色可疑菌落，用PDA纯化6.2.3形态测定
PDA工纯化菌落生长7d后，体视显微镜下观测菌落中是否有病菌孢子形成.记录菌落培养性状，包括菌落生长速度、颜色，形状等，如有孢子产生，则将培养皿放在显微镜（100×）或（200×）下观察孢了生长方式，并挑取少许制片，在生物显微镜下镜检，观测菌丝、孢子形态特征，显微镜（1000×）下测量孢子的形状、大小，孢子胞壁厚度等。7鉴定特征
7.1培养性状
培养5d左右，病组织周围出现白色菌落，病菌在PDA上生长较缓慢，生长速度1mm/d～3mm/d，圆形，不降起，菌丝致密，平铺于培养基表面形成毡状菌丝层，菌落初为白色，后为奶油肉色，培养7d后菌落中出现粉状棕褐色孢子层（参见图C.2），并逐渐向菌落边缘扩散加厚，菌落颜色逐渐加深至棕褐色，打开培养血盖，菌落有蘑菇气味。7.2形态特征
菌丝无色，细长，新鲜菌丝分隔分枝很少，老熟的菌丝分隔稍多，分隔处有轻微缢缩，菌丝宽1.5um~3.5μm（参见图C.3a）
孢子淡黄色至淡褐色，串生成长链状，孢子链分枝或不分枝（参见图C.3b）.孢子形状有变异，不成熟孢子椭圆形或长椭圆形，孢壁不明显（参见图C.3c），成熟孢子球形、亚球形或长椭圆形，大小为（5um~14um）×（8μm~20μm），具明显胞壁，厚0.9μm~2.0μm（参见图c.3d)。2
KAoNiKAca
结果判定
SN/T36802013
病菌培养性状与7.1中描述相符，形态特征与7.2中描述相符，即可鉴定为可可链疫孢英腐病菌。菌株保存与处理
分离并最终鉴定为可可链疫孢英腐病菌的菌株应转人PDA培养基斜面上，存活后经登记和经手人签字，置于4℃8℃黑暗条件下保存，定期（3个月）转接，以防止病菌死亡，菌种至少保存6个月，必要时用病菌孢子作冻干菌种保存，保存期满后高压灭菌火活处理。3
rrKAoNrKAca
SN/T3680—2013
A.1分布
附录A
（资料性附录）
可可链疫孢英腐病菌其他信息
中美和加勒比海：墨西哥、伯利兹、哥斯达黎加、危地马拉、洪都拉斯、尼加拉瓜、巴拿马。南美：委内瑞拉、秘鲁、哥伦比亚厄瓜多尔A.2寄主
主要寄主：可可TheobromacacaoL.。其他寄主：野生Herraniaspp.和野生Theobromagilert，Theobromaspp.。A.3为害症状
可可链疫孢荚腐病菌为害可可果英，感染初期果英显示轻微褪绿肿胀，种子周围组织变软水样状，后期果英褪色，扭曲变形，膨大坏死，表面覆盖稠密毡状乳白色菌丝及浅褐色粉状孢子，有磨菇气味，病荚内部组织紧密成粘稠状，病荚种子早熟，瘦小，形状不规则，严重时种子腐烂坏死。如果病菌在果荚成熟中后期侵染果荚，外部症状不明显或只有局部有限的坏死，果英表面稍凹陷，早熟，果英内部，果皮、种子全部或部分呈红褐色坏死，种子很难与果皮分开。人工接种幼苗下胚轴表现出胚轴变色、肿胀，树皮开裂症状，极端情况下，致使幼苗死亡，A.4免费标准bzxz.net
传播方式
可可链疫孢英腐病菌主要通过果莱内部组织和种子表面粘附的泡子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株，随苗木远距离传播，4
-TTKAONIKAca
B.1马铃薯培养基PDA
附录B
（资料性附录）
培养基配制方法
SN/T3680—2013
马铃薯去皮后洗净，切成小块，称取200g，蒸馏水中煮30min，用4层纱布过滤，加人20g煎蔗糖、18g琼脂，加热使之完全溶解，蒸馏水定容至1000mL，分装于二角瓶中，121℃高压灭菌15min。B.2PDA选择性培养基
高压灭菌后的PDA冷却至45℃~50℃时，无菌操作下1000mL培养基中分别加入0.3g链霉素和0.3g青霉素，混匀，倒平板，静置备用。S
KAoNiKAca
SN/T3680—2013
附录C
（资料性附录
可可链疫孢荚腐病菌为害，菌落性状及形态特征注：引自EvansHC,etal.2003
图C.1病果英内部腐烂种子
图C.2PDA上菌落培养性状示褐色粉状孢子层（罗加凤摄TiKAoNrKAca
说明：
细长的营养菌丝：
孢子中生形成的孢子链：
未成熟的孢子：
成熟具厚壁的炮子，标尺-10um。图C.3病菌形态特征（罗加凤摄）SN/T3680--2013
SN/T3680—2013
参考文献
[1] Aine MC,Phillips-Mora W,2005.The causal agents of witchesbroom and frostypod rot ofcocoa(Theobroma cacao)form a new lineage of Marasmiaceae.Mycologia,In Press.[2JCABInternational,2007.CropProtection Compendium,2007.Edition.Wallingford,UK,Tax-onoiny and nomenclature for Moniliophthora roreri.CAB International.cabicornpendium.org/cpc.L3] Desrosiers R.and Suarez C,1974.Monilia roreri pod rot of cacao.In Phytophthora Diseaseof Cocoa.(P.H.Gregory.ed.),273-277.L4JEvansHC,Stalpers JA.Samson RA,and BennyGL,1978.On thetaxonony of Monilia roreri,an important pathogen of Theobroma cacao (Cacao).Can.J.Bot.,56(20):2528 2532.[5J Evans HC,1981.Pod rot of cacao caused by Moniliophthora (Monilia)roreri.Phytopathological papers24.Kew,UK.ComnonwealthMycological Institute.[6]Evans HC,Holmes KA,Phillips W,Wilkinson MJ,2002.What's in a name:Crinipellis,thefinal resting place forthe frosty pod rol pathogen of cocoa?.Mycologist,16(4):148-152.[7]Evans HC,Holmes KA,Reid AP,2oo3.Phylogeny of thefrostypod rot pathogen of cocoaPlantPathology,52:476-485.
[8] Fulton RH,1989.The cacao disease trilogy:black pod,Monilia pod pot,and witchesbroomPlantDisease73(7):601-603.
[9 Griffith GW,Nicholson J,Nenninger A,Birch R N,HedgerIN,2003 Witches'brooms andfrosty pods:Two major pathogens of cacao.New Zealand Journal of Botany,Volume4l:423-435.8
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可可链疫孢莱腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Moniliophthora roreri (Ciferri et Parodi) Evans2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3680—2013
本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：罗加凤、王金成、蔡国瑞、王宏毅、沈建国。1
1范围
可可链疫孢莱腐病菌检疫鉴定方法本标准规定了可可链疫孢荚病菌检疫鉴定方法。本标准适用于进境可可种子、苗木中可可链疫孢英腐病菌的检疫鉴定。2可可链疫孢英腐病菌基本信息
学名：Moniliophthoraroreri（Cif1at0r
异名：Crinipetlisroreri（Cif.)H.C.EvansMonilia roreri Ciferri.
中文名称：可可链疫孢荚腐病菌英文名：podrotofcacao
frosty pod rot
SN/T3680—2013
分类地位：真菌界（Fungi），担了菌门（Basidiomycota），担子菌纲（Basidiomycetes），伞菌目（Agaricales），皮伞菌科（Marasmiaceae），Momitiophthora 属。病菌其他信息容见附录A。传播途径：可可链疫孢英腐病菌主要通过果内部组织和种子表面粘附的孢子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株，随苗木远距离传播。3方法原理
通过病菌的分离培养，依据病菌培养性状、形态学特征对可可链疫孢英腐病菌进行鉴定。仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器、常规冰箱4.2用具
培养皿（直径90mm~100mm）、滤纸、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、酒精灯。5主要试剂和培养基
5.1主要试剂
1.0%次氯酸钠（NaCIO）青霉素、链霉素、无菌水、酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂5.2培养基
马铃薯葡萄糖培养基(PDA）PDA选择性培养基（参见附录B)。1
SN/T3680—2013
6鉴定方法
6.1可疑材料挑选
6.1.1可可种子中可疑材料挑选
将待检样品倒人洁净白瓷盘内，挑选干癌、弱小、畸形、变色的可疑病种子（参见图C.1），用手术刀剥离种皮和种子，将种皮剪成0.4cm×0.4cm小块，用纱布包好进行下一步分离培养实验6.1.2可可苗可疑材料挑选
仔细检查植株茎部、枝条有无变色、肿胀，树皮开裂症状，发现可疑植株，取有症状的茎部或枝条组织，用剪刀剪成0.4cm×0.4cm小块，纱布包好进行下步分离培养实验。6.2分离培养及形态测定
6.2.1表面消毒
纱布包好可疑材料，用1.0%的次氯酸钠溶液消毒3min，无菌水冲洗3次，火菌滤纸吸干水分后用于培养。
6.2.2分离培养
消毒后的材料置PDA选择性培养基平板上，每血放置3～4块，25℃黑暗条件下培养。培养3d~5d后开始观察，发现乳白色或白色可疑菌落，用PDA纯化6.2.3形态测定
PDA工纯化菌落生长7d后，体视显微镜下观测菌落中是否有病菌孢子形成.记录菌落培养性状，包括菌落生长速度、颜色，形状等，如有孢子产生，则将培养皿放在显微镜（100×）或（200×）下观察孢了生长方式，并挑取少许制片，在生物显微镜下镜检，观测菌丝、孢子形态特征，显微镜（1000×）下测量孢子的形状、大小，孢子胞壁厚度等。7鉴定特征
7.1培养性状
培养5d左右，病组织周围出现白色菌落，病菌在PDA上生长较缓慢，生长速度1mm/d～3mm/d，圆形，不降起，菌丝致密，平铺于培养基表面形成毡状菌丝层，菌落初为白色，后为奶油肉色，培养7d后菌落中出现粉状棕褐色孢子层（参见图C.2），并逐渐向菌落边缘扩散加厚，菌落颜色逐渐加深至棕褐色，打开培养血盖，菌落有蘑菇气味。7.2形态特征
菌丝无色，细长，新鲜菌丝分隔分枝很少，老熟的菌丝分隔稍多，分隔处有轻微缢缩，菌丝宽1.5um~3.5μm（参见图C.3a）
孢子淡黄色至淡褐色，串生成长链状，孢子链分枝或不分枝（参见图C.3b）.孢子形状有变异，不成熟孢子椭圆形或长椭圆形，孢壁不明显（参见图C.3c），成熟孢子球形、亚球形或长椭圆形，大小为（5um~14um）×（8μm~20μm），具明显胞壁，厚0.9μm~2.0μm（参见图c.3d)。2
KAoNiKAca
结果判定
SN/T36802013
病菌培养性状与7.1中描述相符，形态特征与7.2中描述相符，即可鉴定为可可链疫孢英腐病菌。菌株保存与处理
分离并最终鉴定为可可链疫孢英腐病菌的菌株应转人PDA培养基斜面上，存活后经登记和经手人签字，置于4℃8℃黑暗条件下保存，定期（3个月）转接，以防止病菌死亡，菌种至少保存6个月，必要时用病菌孢子作冻干菌种保存，保存期满后高压灭菌火活处理。3
rrKAoNrKAca
SN/T3680—2013
A.1分布
附录A
（资料性附录）
可可链疫孢英腐病菌其他信息
中美和加勒比海：墨西哥、伯利兹、哥斯达黎加、危地马拉、洪都拉斯、尼加拉瓜、巴拿马。南美：委内瑞拉、秘鲁、哥伦比亚厄瓜多尔A.2寄主
主要寄主：可可TheobromacacaoL.。其他寄主：野生Herraniaspp.和野生Theobromagilert，Theobromaspp.。A.3为害症状
可可链疫孢荚腐病菌为害可可果英，感染初期果英显示轻微褪绿肿胀，种子周围组织变软水样状，后期果英褪色，扭曲变形，膨大坏死，表面覆盖稠密毡状乳白色菌丝及浅褐色粉状孢子，有磨菇气味，病荚内部组织紧密成粘稠状，病荚种子早熟，瘦小，形状不规则，严重时种子腐烂坏死。如果病菌在果荚成熟中后期侵染果荚，外部症状不明显或只有局部有限的坏死，果英表面稍凹陷，早熟，果英内部，果皮、种子全部或部分呈红褐色坏死，种子很难与果皮分开。人工接种幼苗下胚轴表现出胚轴变色、肿胀，树皮开裂症状，极端情况下，致使幼苗死亡，A.4免费标准bzxz.net
传播方式
可可链疫孢英腐病菌主要通过果莱内部组织和种子表面粘附的泡子、菌丝远距离传播，病菌也可能侵染植株，随苗木远距离传播，4
-TTKAONIKAca
B.1马铃薯培养基PDA
附录B
（资料性附录）
培养基配制方法
SN/T3680—2013
马铃薯去皮后洗净，切成小块，称取200g，蒸馏水中煮30min，用4层纱布过滤，加人20g煎蔗糖、18g琼脂，加热使之完全溶解，蒸馏水定容至1000mL，分装于二角瓶中，121℃高压灭菌15min。B.2PDA选择性培养基
高压灭菌后的PDA冷却至45℃~50℃时，无菌操作下1000mL培养基中分别加入0.3g链霉素和0.3g青霉素，混匀，倒平板，静置备用。S
KAoNiKAca
SN/T3680—2013
附录C
（资料性附录
可可链疫孢荚腐病菌为害，菌落性状及形态特征注：引自EvansHC,etal.2003
图C.1病果英内部腐烂种子
图C.2PDA上菌落培养性状示褐色粉状孢子层（罗加凤摄TiKAoNrKAca
说明：
细长的营养菌丝：
孢子中生形成的孢子链：
未成熟的孢子：
成熟具厚壁的炮子，标尺-10um。图C.3病菌形态特征（罗加凤摄）SN/T3680--2013
SN/T3680—2013
参考文献
[1] Aine MC,Phillips-Mora W,2005.The causal agents of witchesbroom and frostypod rot ofcocoa(Theobroma cacao)form a new lineage of Marasmiaceae.Mycologia,In Press.[2JCABInternational,2007.CropProtection Compendium,2007.Edition.Wallingford,UK,Tax-onoiny and nomenclature for Moniliophthora roreri.CAB International.cabicornpendium.org/cpc.L3] Desrosiers R.and Suarez C,1974.Monilia roreri pod rot of cacao.In Phytophthora Diseaseof Cocoa.(P.H.Gregory.ed.),273-277.L4JEvansHC,Stalpers JA.Samson RA,and BennyGL,1978.On thetaxonony of Monilia roreri,an important pathogen of Theobroma cacao (Cacao).Can.J.Bot.,56(20):2528 2532.[5J Evans HC,1981.Pod rot of cacao caused by Moniliophthora (Monilia)roreri.Phytopathological papers24.Kew,UK.ComnonwealthMycological Institute.[6]Evans HC,Holmes KA,Phillips W,Wilkinson MJ,2002.What's in a name:Crinipellis,thefinal resting place forthe frosty pod rol pathogen of cocoa?.Mycologist,16(4):148-152.[7]Evans HC,Holmes KA,Reid AP,2oo3.Phylogeny of thefrostypod rot pathogen of cocoaPlantPathology,52:476-485.
[8] Fulton RH,1989.The cacao disease trilogy:black pod,Monilia pod pot,and witchesbroomPlantDisease73(7):601-603.
[9 Griffith GW,Nicholson J,Nenninger A,Birch R N,HedgerIN,2003 Witches'brooms andfrosty pods:Two major pathogens of cacao.New Zealand Journal of Botany,Volume4l:423-435.8
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