SN/T 3751-2013.Detection and identification of Neofabraea malicorticis H. S.Jacks.
1范围
SN/T 3751规定了苹果树炭疽病菌的检疫鉴定方法。
SN/T 3751适用于苹果树炭疽病菌的寄主携带苹果树炭疽病菌的检疫鉴定。
2基本信息
中文名:苹果树炭疽病菌
学名:Neofabraea malicorticis H.Jacks
异名: Pezicula malicorticis ( H.Jacks ) Nannf., Cryptos poriopsis malicorticis ( Cordley) Nannf.Cryptos poriopsis curvis pora Peck ,Gloeos porium malicoticisCordley ,Macrophoma curvispora Peck,Macro phoma curvis pora ( Peck )Gremmen,Myxos poriun curvis porum (Peck)Sacc.
英文名:Bull's eye rot of apple,Anthracnose on apple tree ,Anthracnose canker on apple tree
分类地位:真菌界(Fung)、子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、锤舌菌纲(Leotio-mycetes).锤舌菌亚纲( Leotiomycetidae)、柔膜菌目( Helotiales)、皮盘菌科(Dermataceae)、明孢盘菌属(Neofabraea)。
3方法原理
苹果树炭疽病菌的形态学特征与培养性状是制定本标准的主要依据。
4仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平(感量0.01 g)、高压灭菌锅、常规冰箱(-20℃)。
4.2用具
样品袋、标签、放大镜、培养皿、烧杯、三角瓶、试管、量筒、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、脱脂棉、酒精灯。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3751—2013
苹果树炭病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Neofabraea malicorticis H.S.Jacks2013-11-06发布
中华人民共和国
宝家质量监督检验检疫总局
2014-06-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，言
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T3751—2013
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局，本标准主要起草人：王颖、程颖慧、章桂明、王宏毅、汪莹、王卫芳、王红英1范围
苹果树炭疽病菌检疫鉴定方法
本标准规定了苹果树炭疽病菌的检疫鉴定方法本标准适用于苹果树炭疽病菌的寄主携带苹果树炭疽病菌的检疫鉴定。2基本信息
中文名：苹果树炭病菌
学名：NeofabrueamalicurticisH.Jacks异名：Peziculamalicorticis（H.Jacks)NanntCrybtosbor
CryptosporiopsiscurvisporaPeck,Gloeosporium malicoticMacrophomacurvispora(Peck)GremmeM205207
SN/T3751—2013
opsismalicorticis(Cordley)Nannf.,Cordley,Macrophoma curoispora Peck,m.curvisporum(Peck)Sace.
英文名：Bull'seyerotofapple，AAnthraenuse on apple tree,Anthracnosecanker on appletree南门（Ascomycota）盘菌亚门（Peziz分类地位：真菌界（Fung）、了囊菌mycotina）、锤舌菌纲（Leotiomycetes）、锤舌菌亚纲（Leotiomycctidae）、柔膜菌目（Helotiales）、皮盘菌科（Dermataceae）、明孢盘菌属(Neofabraea).
近似种：苹果树多年生溃疡病菌（N.peRhansKie
苹果树炭疽病菌的其他信息参见附录A3方法原理
苹果树炭疽病菌的形态学特征与培养性状是制定本标准的主要依据4仪器及用具
4.1仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平（感量0.01g）、高压灭菌锅、常规冰箱(-20℃)。
4.2用具
样品袋、标签、放大镜、培养血、烧杯、三角瓶、试管、量筒、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、脱脂棉、酒精灯。5试剂和培养基
5.1试剂
马铃薯、葡萄糖、燕麦、麦芽提取物、琼脂、乳酸、无水乙醇、75%乙醇。SN/T3751—2013
5.2培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：每1000mLPDA由200g去皮马铃薯，20g葡萄糖，18g琼脂配制而成，121℃高压灭菌20min。酸性马铃薯葡萄糖琼脂培养基（APDA)：每1000mLPDA中加入4.0mL25%乳酸燕麦培养基（OA）：每1000mLOA由20g燕麦，18g琼脂配制而成，121℃高压灭菌20min。麦芽提取物培养基（MEA）：每1000mLMEA由20g麦芽提取物，18g琼脂配制而成121℃高压灭菌20min。
6病原菌鉴定
6.1症状检查
病害初期在枝条或新梢上形成红色或紫色的小圆斑，随着病害的发展在树皮上形成椭圆形下陷的橙色至褐色的溃疡斑，在病健处树皮裂开，并有奶油色的分生孢子盘。病果表面、果洼及萼洼处有牛眼状腐烂病斑，病果腐烂组织表面出现奶油色分生孢子团。参见附录B。将可疑枝条和果实样品带回实验室作进一步检验，记录样品品种，数量、来源国及取样地点、取样人和样日期等信息。
6.2直接镜检
将有明显病症的病枝或病果置于体视显微镜下检查，挑取病部子实体制成玻片，置于显微镜下镜检。
6.3保湿培养
将无上述明显症状或看似健康的枝条、果，做保湿培养。将枝条或果实置于密闭的塑料盒或袋中，25℃下培养，待发现病原体时，进行显微镜检及病原菌的分离培养。6.4分离培养www.bzxz.net
直接挑取病部的分生孢子器或分生孢了团，置于APDA平板上；或采用组织分离培养法，用75%乙醇对果实表面消毒，晾干后用消毒过的刀片切取病健交界处组织，切成5mm见方小块后放置于APDA上，在25℃、黑暗下培养，长出菌丝后纯化分别转至PDA培养基、OA培养基、MEA培养基上培养。6.5病菌形态特征和培养性状观察显微镜检孢子的形态特征、产孢方式。观察记录在25℃黑暗条件下菌落的生长速度、额色变化、分生孢子的形成情况。
7鉴定特征
7.1病菌形态
分生孢子盘0.2tmm1mm，生于寄主表皮下，后突出表皮。分生孢子座聚生，其上产生大量简单或分枝的、无色的产孢细胞。大分生孢子单细胞，无色透明，镰刀状至U形（偶尔直），成熟后有1到数个油球，大小为（15μm~24μm）×（4um~6μm）。小分生孢子大小为（5μm~8μm）×（1.5μm~2.5μm）。了囊盘0.5mm~1mm，无柄（偶有短柄），灰色至肉色，在分牛孢子盘上很少形成子囊盘。子囊棍棒状，无盖，顶部平截至圆形，2
-TKAONIKACa
SN/T3751—2013
基部有短蒂，大小（75μm~~150μm）×（10μm~20um），内含8个子囊孢了。子囊孢子单细胞，椭圆形，无色透明，无隔，壁薄内含大颗粒或小油球，大小（12.5um~26um）×（5um9um）。随着孢了老熟，子囊孢子变为1～5隔，子囊孢子壁逐渐增厚，颜色变为淡褐色。参见附录B。7.2病菌培养性状
苹果树炭疽病菌在培养基上菌落边缘整齐。在OA培养基上培养14d后菌落直径约为60mm，气生菌丝稀少，菌落棕色至赭色，色索不扩散。球形分生孢子器理生在培养基中，部分埋生的球形分生孢子器有白色的菌丝。在MEA培养基上培养14d后菌落直径约为30mm，气生菌丝发达，灰色，部分变为肉色至珊瑚色，色素扩散使培养基变为红色或黄色。参见附录B。7.3与近似种的区别
Neofabraeamalicorticis的近似种主要是苹果树多年生溃疡（N.perennansKienholz），二者的主要区别在于N.malicorticis的分生孢子盘可产生高度弯曲的大分生孢子，而N.perennans的大分生孢子直或稍弯。参见附录C。
8结果判定
病菌形态学特征符合7.1、培养性状符合7.2则可判定为苹果树炭疽病菌（NeofabraeamalicorticisH.S.Jacks)
9样品保存与处理
保存样品应视样品的状态采用相应的保存方式，妥善保存6个月。如发现苹果树炭疽病菌，该样品应保存1年，以备复验。保存期满后，需经灭菌处理。10菌种保存与处理
菌株在含30%甘油的冻存管中于一80℃保存，或将菌株转接在PDA斜面上培养，待菌丝体长满斜面后，置于4℃下保存，并定期转管，标注分离物来源、寄主、分离时问和鉴定人。11实验记录保存
妥善保存检验报告，包括症状、病菌等图文资料。检验报告应注明检验日期、方法、结果等，并有检验人签名。
rkAoNikAca
SN/T3751—2013
A.1寄主范围
附录A
（资料性附录）
苹果树炭疽病菌的相关资料
蔷薇科（Rosaceae）：苹果属（Malus）包括欧洲栽培苹果（M.domestica）、苹果（M.pumila）、海棠果（M.fusca）欧洲森林苹果（M.sylvestris），梨属（Pyrus）包括西洋梨（P.communis）、概了（P.malus）；榻属（Cydonia）包括棒（C.oblonga）等，均可被害。A.2地理分布
美国、加拿大、英国、日本、南非、澳大利亚、新西兰、津巴布韦、葡萄牙、丹麦、荷兰、S
TKAoNIKAca
说明：
附录B
（资料性附录）
苹果树炭疽病菌症状、病原形态特征及培养性状图枝条上的症状（引自H.J.Larsen，200g）；果实上的症状引自H.J.Larsen，2008)；培养性状（引白G.J.M.Verkley.1999）；大分生孢子图（引自F.M.Dugan，1993）。图B.1苹果树炭疽病菌症状、病原形态特征及培养性状图SN/T3751—2013
-TTTKAoNiKAca
SN/T3751—2013
无性型
有性型
病果症状
病原菌大分生
孢了形态特征
附录C
（资料性附录）
苹果树炭疽病菌与近似种苹果树多年生溃疡病菌的区别表C.1
苹果树炭疽病菌与近似种苹果树多年生溃疡病菌的区别苹果树炭疽病菌
Crypiosporiopsiscurwisporu(Peck)GremmenNeofabraea malicorticis HJacks美国、加拿大、英国、日本、南非、澳大利亚、新西兰、津巴布韦、葡萄牙、丹麦、荷兰
欧洲栽培苹果（Malusdomestica），苹果（M.pumila）、海棠果（M.fusca）、欧洲森林苹果（M.syiwestris）、西洋梨（Pyruscommunis），橄子（P.malus），荐(Cydonia oblonga)
病害初期在枝条或新梢上形成红色或紫色的小圆斑，随着病害的发展在树皮上形成權圆形下陷的橙色至褐色的溃疡斑，在病健处树皮裂开，并有奶油色的分生孢子盘
果实上腐烂病斑呈牛眼状
单细胞，无色透明，镰刀状至U形苹果树多年生溃疡病菌
C.perennans (Zeller&Childs)WollenwN.perennans Kienholz
美国、澳大利亚、加拿大、荷兰、英国欧洲栽培苹果（M.domestica）、苹果（M.pumila）、欧洲森林苹果（M.sylvestris）西洋梨（P.communis）、棒（C.ohlonga）、档叶唐棣（Amelanchieralmfolia）病斑椭圆形，下陷，橙色、紫色或褐色，并产生轮状愈合组织。分生孢了盘黑色，突破表皮生
果实上腐烂病斑呈牛眼状
单细胞，无色透明，直或稍弯
iiKAoNirKAca
参考文献
SN/T3751—2013
[1Verkley G J M.A monograph of the genus Pezicula and its anarnorphs.Stud.in Mycol.1999,44:129-171.
[2JGrove G,G.Anthracnose and Perennial canker.Pp36-38.in:Jones,A.L.&.AldwinckleH.S.(des.):Compendium of apple and pear diseases.APS Press,St.Paul,Minnesota.[3JDogan F M,Grove G.G.,Rogers J D.Comparative Studies of Cryptosporiopsis curvisporaandC.perennans.l.Morphology andPathogenicBehavior.Mycologia,1993,85(4)551-564.[4JKienholz J R,Comparative Study of the Apple Anthracnose and Perennial Canker Fungi.Journal ofAgricultural Research,1939,59(9):635664.
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