SN/T 3749-2013
基本信息
标准号:
SN/T 3749-2013
中文名称:麦类条斑病菌检疫鉴定方法
标准类别:商检行业标准(SN)
标准状态:现行
出版语种:简体中文
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相关标签:
麦类
条斑
病菌
检疫
鉴定
方法
标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3749-2013.Detection and identification of Ce phalos porium gramineum Nisikado & Ikata.
1范围
SN/T 3749规定了麦类条斑病菌的检疫鉴定方法。
SN/T 3749适用于冬小麦、大麦、黑麦等寄主的种子、病残体及随种子携带土壤的麦类条斑病菌的检疫。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是往日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。
SN/T 2088进 境小麦.大麦检验检疫操作规程
SN/T 2122进出境植物 及植物产品检疫抽样
3病菌基本信息
中文名:麦类条斑病菌
英文名:cephalosporium stripe
学名: Hymenula cerealis Ellis & Everh.
无性世代学名:Ce phalos porium gram ineum Nisikado &. Ikata
无性世代异名:Ce phalos porium acremonium Corda
分类地位:麦类条斑病菌属真菌界(Fungi),有丝分裂孢子真菌(Mitosporic fungi) ,丝孢纲( Hypho-mycetes) ,丛梗孢目( Moniliales) ,瘤座孢科(Tyberculariaceae)、盘瘤座霉属( Hymenula)。无性态属于有丝分裂孢子真菌(Mitosporicfungi),丝孢纲(Hyphomycetes),丛梗孢目(Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),头孢霉属(Ce phalos porium)。
4方法原理
麦类条斑病菌菌落、分生孢子梗、分生孢子的形态特征、培养性状等特征是其鉴定的依据。
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3749—2013
麦类条斑病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Cephalosporium gramineum Nisikado & Ikata2013-11-06发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-06-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局本标准主要起草人:廖芳、郭京泽、崔铁军、罗加凤、刘跃庭、刘鹏、黄国明。SN/T3749-—2013
1范围
麦类条斑病菌检疫鉴定方法
本标准规定了麦类条斑病菌的检疫鉴定方法SN/T3749—2013
本标准适用于冬小麦、大麦、黑麦等寄主的种子、病残体及随种子携带土壤的麦类条斑病菌的检疫。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2088进境小麦、人麦检验检疫操作规程SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3病菌基本信息
中文名:麦类条斑病菌
英文名:cephalosporiumstripc学名:Hymenula cerealisEllish.
neumNisikado&Tkata
无性世代学名:Cephalosporiumeram
无性世代异名:Cephalosporiumacr分类地位:麦类条斑病菌属真菌界mycetes),丛梗孢目(Moniliales)有丝分裂孢子真菌(Mitosporicung
有丝分
电科(Tubercul
丝孢纲(H
(Moniliaceae),头孢霉属(Cephalosbarium
传播途径:该真菌主要通过冬
osporicfungi),丝孢纲(Hypho荣(M
婴孢子真
riaceae)
ghomyo
爵属(Hymenula)。无性态属于瘤座
梗孢日(Moniliales),丛梗孢科S从
麦、大麦,黑麦等奇主植物种子及种子携带的土壤传播麦类条斑病菌的其他信息参见附录4方法原理
麦类条斑病菌菌落、分生孢子梗、分生孢子的形态特征、培养性状等特征是其鉴定的依据。5仪器及用具
5.1仪器
体视显微镜、光学显微镜(带显微照相装置)、天平(感量0.1g)、生物安全柜、光照培养箱等。5.2用具
滤纸、烧杯、培养Ⅲ、三角瓶、镊子、载玻片、盖玻片、量筒、酒精灯、吸管、接种针等。1
SN/T37492013
6主要试剂和培养基
6.1主要试剂
琼脂、葡萄糖、下米粉、无菌水、1%次氯酸钠(NaCIO)、95%乙醇、25%的乳酸、氯硝胺、甲基立枯磷、三苯基氨氧化锡(文称毒菊锡)等。6.2培养基
酸化玉米粉琼脂培养基(acidifiedrornmealagar,ACMA),配制见附录B麦类条斑病菌半选择培养基(Cephalosporiumgramineumscmi-sclectivemedium,CGSM),配制见附录B。
马铃薯萄萄糖琼脂(potatodextroseagarmedium,PDA),配制见附录B,7现场检验
按照SN/T2088和SN/T2122规定进行取样,结合症状检查留意粮谷或种了携带的植株病残休及土块并带回实验室进一步分离。8病菌鉴定
病原菌的分离培养
8.1.1土壤中病菌的分离
称取15g~25g土壤与100mL无菌水混合15min,静置后用吸管将悬浮液滴于麦类条斑病菌的半选择培养基(CGSM)培养血上,置于生物培养箱中15℃黑暗下培养,10d~12d后观察是否出现菌落。并转接到PDA培养基上纯化
8.1.2种子中病菌的分离及纯化
挑选干癌的种子和病残体,将种子和病残体置于95%的乙醇进行表面消毒2min,灭菌滤纸吸干,用有效成分为1%的次氟酸钠(NaC1O)溶液表面火菌2min,灭菌水洗涤3次,置于培养皿中灭菌滤纸上室温(20℃)24h,每皿约10粒种子,然后一20℃冰冻20h,将冰冻后的种子移至麦类条斑病菌半选择培养基(CGSM)上,转至15℃培养箱中黑暗下培养,10d~12d后观察是否出现疑似菌落。并转接到PDA培养基上纯化,对纯化菌落的分生孢子在光学显微镜下进一步观察其特征。9鉴定特征
在PDA培养基上,病原菌菌落湿润,边缘不平滑,人多生于基质中,白色、灰色或者淡黄色,由大量的分生孢子梗和分生孢子组成.菌丝相对较少:菌丝无色,宽1.5um~4μm(多为2um),有隔膜,分枝,老熟菌丝内含多个颗粒状物和液泡:分生孢子梗从菌丝长出,无色透明,直立,短小,(5m~20um)X(1.5μm~4μm),结构简单,常埋生于基质中;分生孢子单细胞,无色,由分生孢子梗的顶端产生。(5μm~11um)×(1.5μm3μm),椭圆形、长椭圆形或卵圆形,分生孢子相继脱落,由所分泌的胶状物质常常粘连在一起,内多含有2个油滴,1个或3个较少见,油滴分布于两端,分生孢子两端圆形,较少微尖,常埋生于基质中,分生孢子萌发时常膨胀,有时能观察到隔膜,一端或两端伸出萌发管,很少TTKAoNIKAca
SN/T3749—2013
2个萌发管均从一端伸出,萌发管宽(1pm2um),尖端常常能观察到小的次生孢子。10
结果判定
如分离物的培养性状及形态学特征与9描述的麦类条斑病菌培养性状和形态特征相吻合,即可判定为检出麦类条斑病菌(Cephalosporiumgramineum);否则判定为未检出11
样品、菌种、实验记录的保存
样品保存
如发现麦类条斑病菌,该样品需保存6个月,以备复验、谈判和仲裁。期满后,需经灭菌处理方可丢弃。
菌种保存
将分离到的麦类条斑病菌菌种,转接在PDA斜面上培养,待菌丝体长满斜面后,置于4℃下保存,并定期(180d)转管,标注分离物来源、寄主、分离时间与鉴定人。11.3实验记录保存
妥善保存检验报告及实验原始记录,至少保存2年。3
iiKAoNiKAca
SN/T3749—2013
A.1分布
亚洲:日本、印度、朝鲜、菲律宾。非洲:埃及、南非。
北美洲:加拿大、西哥、美国
中美洲:多米尼加共和国。
附录A
(资料性附录)
麦类条斑病菌的其他相关信息
欧洲:奥地利、丹麦、德国、意大利、荷兰、被兰、瑞典、苏格兰、英格兰。中国无分布。
A.2寄主
主要侵染冬小麦(TriticumaestioumL)、大麦(HordeumuulgareL)黑麦(ScalecereatL),燕熊麦(AenasativaL.)、黑小麦(Triicosecate)等重要的经济作物,还能曼染禾木科草坪草和牧草,如鸭茅(DactylisglamerataL.)野燕麦AoenafatuaL)山地雀麦(BromusmarginatusNees.)、无芒雀麦(B.sterilisL.)、粉绿披碱草(ElymusglaucusBuckl.)候麦草[AgropyronTepens(L.)Beauv.J、大看麦娘(AlopecuruspratensisL.)、大穗看麦娘(A.mHuds.)、粗茎早熟禾(PoatrivialisL.),Vosurodies
以及农业上具有经济重要性的多花黑麦草CLoliumgmaluiflorumLan.3症状
晚冬或早春感病麦苗叶片上出现镶嵌状草色风点和多年生黑麦草(L.perenme)。这种叶
片常常在条斑形成前死亡。随着生长,叶片上出现明显的纵向褪绿条斑,条斑可能发散或呈斑叶片上表现为细长的黄色条纹,条纹中央驳·成款
为棕色线斑(坏死维管组织)。通常每片叶上有1一个条纹
条纹会
正仲至叶鞘和茎,棕色线斑会延续到叶鞘。感病植株节比正常植株颜色更深,纵向切开,可观察到节组织内部呈棕色。感病植株发育迟缓,梢部白色不育,即使能产生种子,通常也是干癌。灸热加剧水分胁迫时,感病植株会出现烧灼气候
症状。
生物学特性
麦类条斑病菌是种侵染小麦维管系统的病原真菌,阻止小麦通过维管系统输送水分和营养,分在成熟前死亡或使穗上籽粒皱缩,数量减少,可造成小友50%~80%的减产,麦类条斑病菌生活史有寄生和腐生两个阶段。夏天麦类条斑病菌在麦秸上腐生时能在分生孢子座产生小分生孢子,秋天和冬天,植物的吞化作用或土壤中昆虫的叮咬损伤植物根部,小分生孢了作为初始侵染源从根部伤!人侵小麦维管系统,通过维管蔓延至全株,春天和夏天能观察到条斑。夏天该病菌在病残体中腐生,可在木腐烂的麦杆中存活3年以1·并能在潮湿环境下大量产抱,通过雨水传播。麦类条斑病菌适于在低洼湿润的偏酸性土壤生存,不具有微核利厚垣孢子等结构,分生孢子形成的温度范围为1022℃,最适温度为15℃.分生孢子梗无色,细长,(5m~20μm)×(1.5um~4μm),分生孢子单细胞无色,山菌丝或分生孢子梗的顶端产生,(5μm~1lμm)x(1.5um~3um),椭圆形、长椭圆形或卵圆形。4
iikAoNrKAca
附录B
(规范性附录)
培养基的配制wwW.bzxz.Net
B.1酸化玉米粉琼脂培养基(acidifiedcornmealagar.ACMA)B.1.1成分
玉米粉200g·琼脂20g,25%的乳酸B.1.2制法
SN/T3749—2013
称取200g玉米粉及琼脂20g,加火菌水100mmL.混合均句,然后进行高压灭菌(121℃,15min),待冷却至48℃时,加人25%的乳酸(lacicacid)1.25mL,混匀。B.2
麦类条斑病菌半选择培养基(CephalosporiumB.2.1成分
gramineum semi-selectivemedium,CGSM)1000ml.玉米粉琼脂培养基,25%的乳酸(lactieacida1.25mL、氟硝胺(dieloran)0.5mg,甲基立枯磷(tolclofos-methyl)1.0mg,三苯基氧氧化锡(毒菌锡,uriphenyltinhydroxide)o.5mg。B.2.2制法
将玉米粉琼脂(CMA)121℃处理15acid)(调节pH值至4.0)、0.5mg氯硝胺然后冷』
min。
dicloranlt
基氢氧化锡(毒菌锡,triphervltinide).充分溶解
hydrox
时,加人1.25ml.25%的乳酸(lacticmg甲基立磷(tolclofos-methyl)、0.5mg三茶B.3
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potatodextroseagarmediumPDA)B.3.1成分
马铃薯(去皮切块)300g:琼脂20g.蒸馏水1000mLB.3.2制法
将马铃薯去皮切块,加1000mL蒸馏水,煮沸10min~20min。用纱布过滤,补川蒸馏水尘1000ml。加人葡糖和琼脂,加热溶化,分装,121℃高压灭菌20min。TYKAoNrKAca
SN/T3749—2013
参考文献
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