SN/T 3947-2014.Chemical-Avian acute oral toxicity test.
1范围
SN/T 3947规定了鸟类急性经口毒性试验的试验方法、试验步骤及数据和报告。
SN/T 3947适用于鸟类急性经口毒性检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 21757-2008化学品急性经口毒性试验 急 性毒性分类法
3术语和定义
GB/T 21757-2008 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。.
3.1急性经口毒性acute oral toxicity
受试物一次或24h内多次经口给予受试动物某--剂量所引起的有害效应。
[GB/T 21757-2008,定义 3.1]
3.2剂量dose
所给受试物的量，常以质量(g,mg)或以受试动物单位体重的受试物的质量(mg/kg)来表示。
[GB/T 21757-2008,定义3.3]
3.3半数致死剂量median lethal oral dose;LDgo
一次性经口给予受试物预期会引起50%动物死亡的统计学剂量,LD50值以动物单位体重接受受试物的质量(mg/kg)来表示。
3.4限量剂量limit dose
试验的上限剂量(2 000 mg/kg或5000 mg/kg)。
[GB/T 21757-2008,定义3.6]
3.5最低剂量值ldose
某个阶段使用的最低剂量值。
3.6最高剂量值hdose
某个阶段使用的最高剂量值。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 39472014
化学品
鸟类急性经口毒性试验
Chemical-Avian acute oral toxicity lest2014-04-09 发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-11-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。言
SN/T3947—2014
本标准技术性内容与经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法223《鸟类急性经口毒性试验》(Avian acuteoral toxicitytest)(2olo)内—致本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国！海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：姚丽芳、缪义彬、李晨、陈相、蒋伟、李蔚、郑华、朱洪坤、蔡琥峰。1
SN/T 3947—2014
根据不同危险评估项目对信息要求不向，本标推提供三种测试方法以供选择：限量试验：当预期毒性较低或限量剂量下不大可能发生死亡时常采用该方法。限量剂量应适用于评估目的，常为2000mg/kg。除了空白对照组外，限量试验还需要5或10只动物。-LD-斜率试验：除了评低LD，值外，还需要确定剂量-反应性线斜率和/或置信区间时常来用该方法。该方法有3～4个阶段，除了空白对照纽外.该试验还需要24或34只动物一LD试验：当只需要半数致死量，但不需要提供剂量-反应曲线斜率和/或置信区间时常采用该方法。该方法有2个阶段，除了空白对照外.该试验还需要11只动物。LD-斜率试验和I.Ds试验为分步试验方法。H
1范围
化学品
类急性经口毒性试验
本标准规定了鸟类急性经口毒性试验的试验方法,试验步骤及数据和报告。本标准适用丁鸟类急性经口葬性检测。2规范性引用文件
SN/T 3947—2014
下列文件对子本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注H期的版本适用于本文件。凡是不洋H期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用丁本文。GB/T21757—200>8化学品急性经口毒性试验急性毒性分类法3术语和定义
GB/T21757—20G8界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1
急性经口毒性
acute oral toxicity
受试物一次或21h内多次经口给予受试动物某一剂量所引起的有害效应。[GI3/T21757—2008，定义3.1]
剂量dose
所给受试物的量，常以质量（g，mig）或以受试动物单位体重的受试物的质量（mg/kg）求表示。LG:B/T 21757— 2008,定义 3.33.3
半数致死剂量
median lethal oral dose; LDsd一次性经II给予受试物预期会引起50%动物死亡的统计学剂量，LDs值以动物单位体重接受受试物的质量(mg/kg)来表示。
［GB/T217572008,定义3.5]］
限量剂量 limit dose
试验的上限剂量（2000mg/kg或5000mg/kg）。[GB/T21757—2008,定义3.6]
概率单位法
prohit
是概率积分转换法的缩与，其基本原理是将剂量改变成对数剂量，将死亡率转换成“概率单位\，划剂量反应曲线皇直线，其斜率为标准偏差的例数，由于剂量反应概率单位模型中量效关系成正态分布，标准正态分布是对称的，所以，其平均值也就是EDs值。3.6
最低剂量值
某个阶段使用的最低剂量值。
最高剂量值
hdose
某个阶段使用的最高剂量值。
TKAONrKAca
SN/T 3947—2014
倍增系数step
计算单独剂量时用到的乘法因子。3.9
部分死亡partialkills
多只受试动物给予同一剂量后，部分动物死亡，部分动物存活。3.10
reversals
高剂量组动物的死亡率低于低剂量组。4
试验方法
试验原则
4.1.1对于不大可能具有严重危险性的化合物建议先进行限量试验（试验步骤见图1）。如果已知毒性则建议使用分步试验法（试验步骤见图2）。分步试验法分为一些具体阶段，第1阶段是确定范围阶段，确定或者改进初始LDso评估值。第2阶段是进步确定LD值范围，为LD试验提供最终LD评估第3a和3b阶段的目的是完善和改进第2阶段获得的工作值，为LDa-斜率试验提供工作评估值。LD值和斜率，并有可能获得置信限当具有很好的LD。和斜率数据时，即逆转1时，建议使用3a阶段，当L.D和斜率数据较差时，即通转2时，建议使用3b阶段。第4阶段和第3b阶段相似。当第3b阶段斜率评估值不稳定或置信区间过宽时第4阶段试验能提供斜率评估值。第4阶段为最终阶段，总的试验结束。对于怀疑具有高毒性的化合物应从第1阶段开始。如果通过失败的限量试验或其他信息可获得LD，评估值，则分步试验从第2阶段给5只动物限量剂量化学品
结果：死亡0只
LDo>限量值
结果，死亡1只
存活动物具有事性症状？
再给子5只动物限量剂量化学品
结果：10只动物中
只有1只死亡
结果：死亡2只4只
进入分步试验第2
阶段试验
限量试验步骤
结果：死亡5只
进入分步试验第1
阶段斌验
TTKAoNTKAca
根据已知信息评估LDso值
LDsc试验结束，第2
阶段结束后计算LDsu
如果2次或2次以上逆转，根
据第1阶段和第2阶段结果计
算工作LDs0值以及斜率
第3a阶段：
2个剂量；5只动物剂
如果2次或2次以
上逆转，或2只
或2只以上鸟死亡
LD斜率试验结
数据计算最终L
根据所有已获得的
斜和贸信区间
第1阶段
4个剂量：1只动物剂量
SN/T3947-2014
根据第1阶段结果计算工作LDso值第2阶段
10个剂量：1只动物剂量
（根据限量试验结果，也
可以从第2阶段直接开始）
如果0或1次逆转，根据第1和
第2阶段结果计算工作LDso值
第3b阶段
5个剂量：2只动物剂量
如果0或1次道转并且0或1只鸟死亡，则根据第1、
第2阶段和第3b阶段的结
果计算工作LDs值
第4阶段
5个剂量；2只动物剂量
分步试验步骤（LDs-斜率试验和LDsp试验）4.1.2第1阶段初始LDso评估值可以通过相似化合物物的化学
结构和毒性数据或其他鸟类或哺乳动物试验数据得到，或者，可以从限量试验中获得。后续每个阶段的剂量根据之前各阶段观察到的死亡率来确定。每个阶段同时给予受试物并观暴相同时间。2阶段每个剂量不需要重复，第3和4阶段第1和2
每个剂量需要重复试验。
受试动物
4.2.1优先选择具有低背景死亡率以及低反台倾向的圈养繁殖物种。常用的物种有山齿和日本鹑。有必要的话，应使用其他物种进行测试，如野鸭、野鸽、灰头文鸟和虎皮鹉。考虑到动物福利和疾病控制，应避免使用捕捉的鸟。4.2.2选择性成熟的动物。最好选择野生表型，圈养的鸟应有相同来源和繁殖数量，必要的时候应进行远系繁殖以维持基因不均勾性。如果不能使用野生表型，则应从不同表型中选择，以限制自交系特征：
4.2.3随机分配混合性别或单一性别处于休情期的试验动物。使用休情期的动物将有利于降低由于性别因素导致的杀虫剂急性经口途径灵敏度差异。对于存在性别差异的化合物或化学品种类，每个性别都应进行试验。
KAONiKAca
SN/T 3947-2014
4.2.4动物应独立编号。对于养的鸟，在试验开始之前牟少适应11大。拥捉来的鸟适应期应延长所有试验动物均应为健康动物。在适应期，圈养的鸟炎死亡率超过与%，捕提的鸟类死亡率超过10头的均不能用丁试验。如捕捉来的乌类不能适成试验，则应放回原求的地方。圈养的乌类人致应在相同的年龄，
4.3饲养和试验条件
4.3.1每只动物单独关养。对于群居动物如灰头文鸟-建议乌笼紫挨着放置，以使丁动物互相交流。不同品种动物建议的最小居任面积分别为：子3333cIm/以，野鸭2090cm2/只；鹑1000cm/只；虎皮鹅和灰头文鸟500cm/只。笼的底板应有网眼，网眼应足够大，使得排泄物能通过.1不能姐码动物行动。鸽于、成头文鸟和虎皮鹦鸪的鸟笼里应有木，4.3.2們鹑和鸭了试验温度应在15℃~-27℃范国内。通风充分，每小时至少10次。鹤鹑和缘头鸭光照时间为8h光照：lih黑暗，其他品种动物光照时问有必要提高到loh。应提供新鲜食物利水。试验开始前14大，试验过程中以及观察期问应避免使用药物。应定期检查饮食和水的洁净度。4.4受试物
受试物应以胶囊或溶于或悬浮于某种合适的溶剂的方式给予。如果受试物以溶丁溶剂的形式给予，则优先考虑使用水作为剂，其次为油，最后考虑其他溶剂。如果使用除水以外的溶剂，则溶剂的毒性应明确，并且不能引起反当，根据24H内测得的休重计算给予受试物的量，4.5剂量
受试物一次性灌胃给予，灌胃体积根据动物体重进行计算，不能超过10ml./kg。在给药前12h～15h动物应禁食。山齿和H本鹤等人型鸟类建议禁食过夜，对于体重在50或更少的鸟类更适合2h的禁食时间：禁食过夜对下小体积的动物可能会造成伤害。4.6临床观察
4.6.1给药后2h应分别观察反和临床反应症状的发生，给药当天至少应设置3个时间点，观察临床反应症状。之后的14天至少每天规察一饮。然而，不能死板地设定观察时间。应连续观察直到临床症状结束或死亡。实行安乐死的动物，可当做死亡动物。任何阶段如果延长观察时间，则接下来的阶段均要延长观察时间。
4.6.2观察的内容包括反台、中毒症状以及中毒症状减轻情况、不止常的行为.体重、死亡以及死时间，
4.6.3动物应在试验前以及给药后3天、7天和11人称量体重，以确定体重的变化：给药后前3天，应每天记录摄食量，之后3人--7人和7大~-11火记录摄食量。试验结束，实验组利对照组的动物均应进行病理解剂，以确定死广原因以及毒性症状，如果无任何动物死亡或不出现任何毒性症状，则不需要进行解剖。
4.6.4如果明确死亡与受试物无关，应剔除。如果对照组动物出现死亡，则应重新增加对照组动物。5试验步骤
5.1限量试验
5.1.1限量试验除了对照组动物外.同一时间给了-5！动物限基剂量的受试物。限量剂量带为2000mg/kg。对照组动物应给子相同剂量的不含有受试物的胶案，并与其他受试动物相同对待。给药后观察14天。4
rKANiKAca
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5.1.2如果14天观察期结束无动物死亡，则在95%可信区问内1D值高于限量剂量。试验结束。两种情况表小限量试验失败，第一，如果不能得出在；%可信区间内1.1%值高于限量剂量；第二，需要迹行分步试验第1或第2阶段，
5.1.3如果发现1例因受试物引起死工：，但其他动物均未出现毒性症状，则再给于5只动物限量剂量的受试物，或进人分步试验第2阶段。重新试验可以在14天观察期未结束时开始。如果增加5只动物后，即总数为10只动物的试验，仍只有一只动物死亡：，H他动物均未出现毒性症状，则可得出在95%可信区问内「.T)，值高于限量剂量的结论，试验结束。5.1.4如果 5只动物中发现1例因受试物引起死亡，具他动物发生中毒症状，或2 只-~4 只死亡，或10只动物中2！以上动物死亡，则进行分步试验，从第2阶段开始。5.1.5如果所有动物均死亡，则进行分步试验，从第1阶段开始。重新试验可以在14天观察期术结束时开始，
5.1.6以限量剂量试验进人分步试验第2阶段，需要评:T作LL)值。表1为限量剂量为2000mg/kg时对应的工作ILD值，低剂量和高剂量可以根据第2阶段试验描述的方法计算得到。其他限量剂量下，评估工作 LD值的方法参见附录 A。表 1 限重剂量试验死亡率对应的工作 LDso值(2 000 mg/kg)死亡率/号
作LD.值/mg/kg）
5.2 LD50和 LDa-斜率试验
5.2.1第1阶段
5.2.1.1选择1个剂量均句分布在初始[I)s:评估值周国。ldose.hdose和倍增常数的订算如下：Idose = dosel =0.141 4 ×初始 IDs: 评估值hdasc=lot:4=7.071×初始LD5:评估值初始LDc评估值是根据啮齿类动物或其他种属动物毒性试验得到的·或根据表1失败的限掌剂量法得到,限量剂量为2 000 mg/kg之外的1.T)sr值评估参见附录 A。5.2.1.2hdose 大于 3 330 mg/kg.则设定 hdose 为 3 330 mg/kg,ldase--hdast/tto)5.2.1.3倍增常数-501/3=3.679，5.2.1.4计算第2和第3剂量：
rlasc2=ldose×倍增常数
lasc3 =losc2 ×倍增常数 =ldose ×倍增常数× 倍增常数5.2.1.5每只动物给予1个剂量。5.2.1.6观察-段时间动物是否死L（通常3天）,计算工作1.D值（见表2)。工作I.D)值可用于评估第2阶段剂量，
表 2 根据第 1 阶段 4 个剂量计算工作 LDsu值,hdosel
(close4 X duse5)l:
(dose3 x dosez)l
1.作L值
(dose2X dasc3 x dase4 X dase5)t+=(dose3× dose4)1?*5
TTKAONTKAca
SN/T3947—2014
O表示存活X表示死工
表2(续）
工作LDm值
(doselxdose2xdose4Xdose5)—dose3(dose0xdoselxdose4xdose5)/=(dose2xdose3)2(dose2xdose3)/2
(dose1Xdose2Xdose4Xdose5)/4=dose3(dosc0XdoselXdose4Xdose5)/4(dose2Xdose3)/2(dose3)12
aseoxdose1xdose2xdosesXdose4Xdoses)(dosc2dose3)1HoseoXdoselXdose3Xdosetdosez(doselxdose2)1/2
(doseXdose
(doseu
(doselXdose2)2
4=dose2
Xdose5)//=(dose2xdose3)
bdoseo=dose1/倍增常数，dose5-dose4×借增常数。或dose5计算T作LD值。
继续观察11大（观察期共
如果根据前3天的观察
表明在
试动物明显恢复。某种情况下，必须等待天之启动物将
动物死亡或最大剂量时动物存活使用doseo死广
则延迟计算工作LD值，直到受
天武验结束后再开始进入
下一阶段试验。如果计算工作
LDs值的观察周期延长，则接下来的阶段中均应延长周期应相应延长。
5.2.2第2阶段
如果在bzxz.net
后发生延迟反应，则该阶段试验第2阶段10个剂量均勾分布在第1阶段或限量试验中得到的工作LD.值周围，ldose、hdose5.2.2.1
和倍增常数计算如下：
ldose=dosel=0.3425X工作LD值
hdosc=dose10=2.919×工作LD值5.2.2.2
如hdose大于3330)mg/kg，则设定hdose为3330mg/kg，并重新计算ldose，ldose=hdose/8.5。倍增常数-（hdose/ldose）1
计算中间8个剂量：dose:=ldose×倍增常数i-n，i=29分别给予10只动物10个剂量。
如果只进行1.Ds试验，则观察周期为14天。使用概率单位法，根据第1阶段和第2阶段以及限量试验的数据评估LDs。值
如果进行LD-斜率试验，则观察一段时间内动物是否死亡（通常3天，如果之前使用更长的时5.2.2.7
间或死广延后，则观察期相应增长），计算逆转动物数量（例子参见附录B），概率单位法适用于使用限量试验和第1和第2阶段得到的死亡率数据计算工作LD。值。如果逆转数量大于或等于2，则进入阶段6
3a，否则进人阶段3b。
5.2.2.8继续观察11天（观察期共为14天）。SN/T3947—2014
5.2.2.9如果根据前3的观察表明在3天之后动物将会发生死亡，则延迟计算工作LDso值，直到受试动物明显恢复，某种情况下，必须等待14天试验结束后再开始进人下一阶段试验。如果计算工作LD，值的观察周期延长，则接下来的阶段中均应延长。如果在14天之后发生延迟反应，则该阶段试验周期应相应延长。
5.2.3第3a阶段
5.2.3.1限量试验、第1阶段和第2阶段试验中逆转数量大于或等于2时，第3a阶段两个剂量平均分布在限量试验（如果有的话）和第1阶段和第2阶段得到的工作LD，评估值周围。第3a阶段Idose、hdose和倍增常数计算如下：
=10-L080解来做×工作LD6个
宝086/作销净试
X工作LD
其中工作LDsc值和工作斜率是基于限量剂量试验、第阶段和/或第2阶段试验结果得到的。如果工作斜率值大于15或小于1则分别设定工作斜率为15或1，并重新计算ldose和hdose。如果不能获得工作斜率值，则设定工作斜率为5，并计算ldose和bdosc。5.2.3.2如果hdose大于3330mgkg，则设定hdose.为3330mg/kg，并重新计算ldose，ldose=hdose/10/2.072/斜车）
5.2.3.3最低剂量和最高剂量分别给予5只动物共计10只动物5.2.3.4观察14天并记录死亡和存活情况，根据限量试验和第1，2和3a阶段试验的数据，使用概率单位法得出最终LD值和斜率的评估值。试验结束5.2.3.5如果不能使用概率单位法，则应报道并计算50%死亡时两侧剂量的平均值作为LD，评估值。或者，使用其他插值法和移动平均法评估LD值。5.2.4第3b阶段
限量剂量试验、第1阶段和第2阶段试验中逆转数量小于2时，第3b阶段五个剂量平均分布5.2.4.1
在限量试验（如果有的话）和第1阶段租第2阶段得到的工作LD评估直周围，第3b阶段ldose、hdose和倍增常数计算如下：
ldose-dosel-0.6205XT作LD
文工作LD值
3380mg/kg，并重新计算Idose，ldose=5.2.4.2如果hdose大于3330mg/kg则设定hdose为hdose/2.6
5.2.4.3倍增常数=（hdose/ldose）1/4。5.2.4.4计算3个中间剂量：doseldose×倍增常数-1.=2~4，5.2.4.5每个剂量给予2只动物，总计10只动物。5.2.4.6观察一段时间动物是否死亡（通常3天，如果之前使用更长的时间或死亡延后，则观察期相应增长）。根据限量试验和第1、2和3b阶段试验的数据，便用概率单位法得出工作LD。值和斜率评估值。
5.2.4.7如果观察到至少2次逆转或者2次部分死广，并得到斜率工作评估值，则不需要进行第4阶段试验。继续观察直至14天试验结束。根据限量试验和第1、2和3b阶段试验的数据，使用概率单位法得出最终LD，值和斜率的评估值。试验结束5.2.4.8如果不满足5.2.4.7的条件，则进行第4阶段试验。5.2.4.9继续观察11天（共14天）。7
SN/T 3947—2014
5.2.4.10如果根据前3天的观察表明在3大之后动物将会发生死亡，则延迟计算工作1D，值，直到受试动物明显恢复。某种情况下，必须等待14大试验结束后再开始进人下一阶段试验。如果计算丁作L.D值的规察周期延长，则接下来的阶段中均应延长。如果在14天之后发生延迅反应，则该阶段试验周期应相应延长。
5.2.5第4阶段
5.2.5.15个剂量平均分布在限量试验（如果有的话）和第1、2和3阶段得到的T作LD评估值周围第4阶段ldose、hdasc和倍增常数计算如下：Idose =dosel =0.620 5 X T作 LD:值hdosc=lose5=1.611×作LD值
5.2.5.2果hdose大于3330mg/kg则设定hulase为3330ing/kg，并重新计算Idase.ldose=hdose/2.6.
5.2.5.3倍增常数=(hclose/ldose)14,5.2.5.4计算3个中问剂量：dose，—dose×倍增常数-，=2~4。5.2.5.5付个剂量给予2只动物，总计10只动物。5.2.5.6观察11大并记录死亡利存活情况。根据限量试验和第1、2、31，和4阶段试验的数据.使用概率单位法得出最终LD。利斜率的评估值。试验结束。5.2.5.7如果第4阶段结束不能获得最大似然值.则应报道并计算50%死亡时两侧剂量的平均值作为LD。评估值，或者，使用其他插值法和移动平均法评估LD值。6数据和报告
6.1数据
6.1.1数据应以表格形式报告，包括剂量，受试动物数量、毒性症状，死亡和处死动物数量、死\时间、毒性症状开始和消失时间、体重（试验开始前，试验开始后第3、7和14天，试验结束）食量和病结果。6.1.2计算LDu值、斜率和置信区间。分步试验使用概率单位法评估LL)sc值。对于概率单位法，Ig(LD50)的最人似然值为一a和h其中为截距，b为斜率，使用标准最大似然法至少需要出现2次部分死亡或2次逆转，这些情况应该写人分步试验设计。如果无法获得最大似然值，则报告并计算50%死亡率两侧剂量的平均值作为I.T)评估值。也可以选择插值法和移动平均数法评估LD：值。6.1.3使用Fieler定埋、拟然率方法或二项式方法获得LD.。置信区间。6.1.4LI)50-斜率试验应报道模型适应性评估。L.TD)5s试验可以选择报道模型适应性评估：6.2报告
报告应至少含有以下倍息：
a）受试物：
标识：
——批次或批弓：
一纯度；
一室温下稳定性；
-挥发性，
b）试验方法和试验系统：
一试验类型；
试验动物种类.米源、品系、年龄.体重，健康状说-试验方法的描述。
试验操作：
试验分组和设计(试验次数和币复数)；适应和阶段分配（周期）；
一剂量（给药方法：胶囊，载体：落剂，体积：按每只动物体百分比)；SN/T 3947—2014
饲养和试验条件（类型、大小、材料、地板、温度、湿度、光照时问、光强度）；饮食和饮水（获取、标识、来源、组成、热量值、污染分析结果）；一观察频率、周期和方式（健康状态/死亡率、体重、进食量）：数据统计方法描述。
d）试验结果：
死亡率（死亡时间，临床症状，L.Dsa值，如果有的话，还包括斜率和置信限）：-临床症状并始和结束时间；
大体病理解制结果：
体重数据：
进食量数据，
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