SN/T 3840.1-2014
基本信息
标准号： SN/T 3840.1-2014
中文名称：鞋类和鞋材抗细菌性能测试方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3840.1-2014.Footwear and footwear components-Test methods to assess antibacterial activity.
1范围
SN/T 3840.1规定了评估鞋类和鞋材抗细菌性能的定量测试方法。
SN/T 3840.1适用于抗菌鞋材和抗菌鞋类产品。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
EN12353化学消毒剂和防腐剂、杀菌剂、杀孢子剂和杀真菌剂活性测定用试验有机体的保存.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1抗菌性能antibacterial activity
抗菌材料防止或减缓细菌生长,减少或杀死细菌的性能。
3.2对照样contrast samples
用于同一测试未经过抗菌处理的相同材料。
4设备和材料
4.1振荡培 养箱:(37±2)℃ ,转速(120±10)r/ min。
4.2二级 生物安全柜。
4.3恒温 培养箱:(37±2)°C。
4.4高压灭菌器:温度可保持在 121℃,压力保持在103 kPa.
4.5 恒温恒湿培养箱:温度可保持在37℃±2℃,相对湿度能保持在90%。
4.6旋涡振荡器。
4.7紫外灯。
4.8广口瓶:100mL,带盖,可高压灭菌。
4.9覆盖膜:不妨碍细菌生长和水分吸收的聚乙烯薄膜,厚度0.05mm~0.10mm。
4.10振荡器:二 维或三维。
1范围
SN/T 3840.1规定了评估鞋类和鞋材抗细菌性能的定量测试方法。
SN/T 3840.1适用于抗菌鞋材和抗菌鞋类产品。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
EN12353化学消毒剂和防腐剂、杀菌剂、杀孢子剂和杀真菌剂活性测定用试验有机体的保存.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1抗菌性能antibacterial activity
抗菌材料防止或减缓细菌生长,减少或杀死细菌的性能。
3.2对照样contrast samples
用于同一测试未经过抗菌处理的相同材料。
4设备和材料
4.1振荡培 养箱:(37±2)℃ ,转速(120±10)r/ min。
4.2二级 生物安全柜。
4.3恒温 培养箱:(37±2)°C。
4.4高压灭菌器:温度可保持在 121℃,压力保持在103 kPa.
4.5 恒温恒湿培养箱:温度可保持在37℃±2℃,相对湿度能保持在90%。
4.6旋涡振荡器。
4.7紫外灯。
4.8广口瓶:100mL,带盖,可高压灭菌。
4.9覆盖膜:不妨碍细菌生长和水分吸收的聚乙烯薄膜,厚度0.05mm~0.10mm。
4.10振荡器:二 维或三维。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3840.1—2014
鞋类和鞋材
抗细菌性能测试方法
Footwear and footwear components-Test methods to assess antibacterial activity2014-01-13发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-08-01实施
SN/T3840&鞋类和鞋材》共分为2部分：第1部分：抗细菌性能测试方法；第2部分：抗真菌性能测试方法。本部分为SN/T3840的第1部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局。SN/T3840.1—2014
本部分主要起草人：陈学灿、郑品、郑麟毅、黄晓蓉、吴谦、董健、郑洁、陈彬、林杰。1
1范围
鞋类和鞋材抗细菌性能测试方法SN/T3840的本部分规定了评估鞋类和材抗细菌性能的定量测试方法。木部分适用丁抗菌鞋材和抗菌鞋类产品。规范性引用文性
SN/T 3840.1--2014
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注口期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用下本文件。FV「2353化学消毒剂和防离剂、杀菌剂、杀孢子剂和杀真菌剂活性测定用试验有机体的保存3术语和定义
下列术语和定义适用于本义件。3.1
抗菌性能antibacterialactivity抗菌材料防止或减缓细菌生长，减少或杀死细菌的性能3.2
contrast samples
对照样
用于同一测试木经过抗菌处理的相同材料4
设备和材料
振荡培养箱：(37上2)℃,转速(120=10)r/min4.1
二级生物安全柜。
恒温培养箱：（37士2)℃。
高压灭菌器:温度可保持在121℃.压力保持在103 kPa，恒温恒培养箱：温度可保持在37℃-2℃.相对湿度能保持在90%4.5
4.6旋振荡器。
4.7紫外灯。
广口瓶:1mL.带盖，可高压灭菊。覆盖膜：不妨碍细菌生长和水分吸收的聚乙烯薄膜.厚度0.05 mm~~0.10 mm.4.10
振荡器：二维或一维。
4.11冰箱。
4.12显微镜。
5培养基和试剂
计数琼脂(EA),培养基和试剂的配制方法见附录A。5.1
SN/T3840.1-—2014
5.2营养琼脂（NA）。
5.3营养肉汤（NB)。
5.4SCDLP培养基。
5.5生理盐水（0.85%氯化钠溶液）。6试验菌种
6.1试验菌种
试验菌种如下：
a）金黄色葡萄球菌StaphylococAKOT
ATCC6538
b）肺炎克雷伯氏菌Klebsiella
peneumoniaeAS1.l736orATCC4
6.2菌种的保存
取典型菌落接种在营养琼脂（5.2）斜面试管内在（37±2下培养24h。将斜面试管贮存于（5十3）℃冰箱内，作为保存菌，每月传代一次。否则应丢弃保存菌种。
保存菌种传代次数不超过10代或保存期不超过一+个月，菌种也可按供应商推荐的方式或EN12353要求保存。7试验菌液的培养和制备
用接种环取营养琼脂培养基上的典型菌落接种于20mL营养肉汤（5.3）中，在（37土2）℃振动恒温培养箱内培养16h，用显微镜观察或者其他方法估算菌落数量。用加人1%营养肉汤的生理盐水溶液来调节菌液浓度，试验菌落浓度为2.8测试样制备
8.1测试样的准备
CFU/mL10×10°CFU/mL。
种抗菌材料占鞋内腔表面积的80%以上的.仅取该材料的测试样。如果种抗菌材料面积小于
行分别取样
鞋腔表面积的80%，则应对其中两种主要抗菌材料进从成鞋中制备测试样时，应从与脚直接接触的部位取样2mm，测试样共需要6份。应记录测试样的面积和重量。8.2测试样的预处理
测试样面积约为500mm，厚度不大于测试样的预处理是可选操作，仅在高生物负荷（污染）的情况下是必要的。预处理可采用高温高压灭菌或紫外线消毒。高温高压灭菌时测试样和对照样在（121土2）℃利103kPa条件下高温高压灭菌15min；紫外线消毒时，采用30W紫外线灯，距离样品300mm，样品每侧各1h。
采用预处理的，应当测试报告中详细描述灭菌方法8.3对照样的制备
对照样可采用未经抗菌处理的相同材料制备。若这种材料不可获得，可采用未经抗菌处理的100%棉织物。通常采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经高温蒸煮并用蒸馏水洗涤作为对照样，对2
-TTKAONKAca
照样面积与测试样相同。
检测方法
不同材质的样品使用的检测方法见表1。表1
10结果表达
鞋材类别
吸水性
非吸水性
非溶出性
各种鞋材检测方法列表
检测方法
静态竞争测试法，见附录B
膜接触测试法，见附录C
动态克争测试法，见附录
纺织品和皮革
SN/T3840.1—2014
材料示例
有微孔的材料：如合成革，EVA发泡材料，PU发泡材料等。
如致密型塑料或橡胶材料等
致密材料：
固定型抗菌剂的制作的抗菌材料抗菌性能以抑菌率来表示，对于鞋类中的不同抗菌材料应分别计算数值以百分率（%）计，保留三位有效数R=
式中：
抑菌率：
按照式（1)计算抑菌率（R），
音养后测得的细菌数的平均值，单位为CFU每毫升（CFU/mL）；-3个对照样接种菌液并培
一定的培养时问内测得的细菌数的平均值，单位为T—3个测试样接种菌液并培养24h后或者CFU每毫升（CFU/mL
如果没有对照样，用T。代替式
11检测报告
检测报告应至少包含下列信息：a)
检测标准名称；
样品和对照样的描述：
样品的预处理（例如，灭菌方法等）；试验菌种名称、编号、代数及接种菌浓度；试验方法；
试验温湿度；
抑菌率：
试验有效性的评价；
任何偏离本方法的情况；
试验人员和试验日期。
ikAoNiKAca
SN/T 3840.1—2014bzxZ.net
计数琼脂(EA)
A.1.1成分
胰蛋白陈
酵母浸白
葡萄桃
蒸馏水
A,1,2 制法
附录A
规范性录
培养基和试剂的配制
将上成分加入蒸增水[,煮沸溶解，调节pH到7.010.2。分装试管或雄形瓶，121 ℃高压灭菌15 min.
营养琼脂(NA)
蛋白陈
牛肉宵
氯化钠
蒸馏水
2制法
除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，调书pH到7.2~-7.1.加人琼胎，加热溶解，分装适宜容器，121高原火菌15min
营养肉汤（NB）
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
1 000 ml.
按上述成分混合溶解十蒸馏水中，调节pII到7.2-~7.4，加热游解，分装适宜容器，121℃高压灭菌4
-rKAoNirKAca
15min。
SCDLP培养基
酪蛋白陈
人豆蛋白陈
氯化钠
磷酸一钾
葡萄糖
卵磷脂
吐温80
蒸馏水
1 000 ml.
SN/T 3840.1--2014
将上述各成分加热煮沸至完全溶解，调节pH到7.2-0.1.分装适宜容需，121℃高压灭菌15minA.5
生理盐水
氯化钠
蒸馏水
A.5.2制法
1000ml
称取8.5g氯化钠-F:1000nL蒸馏水中，121℃高压灭菌15mim5
TKAoNiKAca
SN/T 3840.1—2014
B.1测试程序
B.1.1接种
附录B
（规范性附录）
静态竞争测试法
取6个测试样和6个标准空白对照样分别放人经消毒平菌的口瓶中，用移液器准确移取已制备的菌液（7）（1.0土0.1）ⅡL接种到每个广口瓶中，与样品混合均匀盖好瓶盖。使用的色板样本数量根据样品类型而定。
如果没有标准空白对照样，则用不含样品的空B.1.2接种后立即洗脱（T。时刻）门瓶作为对照，以控制测试样的有效性。在3个测试样和3个标准空白对照样（如果有对照样品）中加人20mLSCDLP培养基（5.4）。盖紧瓶盖，用手摇动30s，摆幅约30cm，或者用旋涡振荡器振荡5次.每次5s，将细菌洗脱。B.1.3培养
将其余3个测试样和3个标准空白对B.1.4培养后的洗脱
在B.1.3培养后的测试样和对照
B.1.5菌落数的测定
平板倾注法
过程同B.1.2
照样）放人（372）℃中培养（24士1）h。用经灭菌的移液器分别吸取1.0mLB1.2和B1.4的洗脱液，加人装有（9.0士0.1）mL生理盐水（5.5）的试管中，充分振荡。用生理盐水稀释洗脱液，将试管中的洗脱液分别作10倍系列稀释液。取100uI.各系列稀释液分别加到两个计数琼脂培养基平板中待培养基凝固后，倒置于培养血培养24h~48h。
培养后，取菌落数在30CFU至300CFU稀释度的培养Ⅲ进行菌落计数。若最小稀释倍数的菌落数30，则按实际数量记录；若无菌落生长，则菌落数记为“。B.2结果的表达
B.2.1细菌数的计算
按式(B.1)计算每个测定样品中的菌落数：M=ZXBX20
式中：
每个试样中的细菌数，单位为CFU/mL；两个培养Ⅲ菌落数的平均值，单位为CFU/mL；稀释倍数；
洗脱液的体积，单位为毫升（mL）。....+..(B,1)
-TTKAONKAca
B.2.2试验有效性的评价
SN/T3840.12014
接种后和培养后的3个对照样之间的极差值IgAC1；接种后的试验菌落数应大于（1×10°)CFU。平板计数法中，按式（B.2)计算细菌增长值FF - IgC, - IgC.
式中：
F—对照样的细菌增长值；
.....(B. 2)
C,—3个对照样接种并培养18h~24h后测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL；C。3个对照样接种后立即测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL。F≥0时，判定试验有效，否则判定试验无效，应重新测试B.2.3抑菌率的计算
按式（B.3)计算抑菌率，数值以百分率（%)计，保留三位有效数字R_C-T
式中：
R—抑菌率；
C，一3个对照样接种菌液并培养后测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL；·CB.3)
T—3个测试样接种菌液并培养24h后或者一定的培养时间内测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL
如果没有对照样，用T。代替式（B.3)C，T。是对3个样品接种后立即测定的菌落数的平均值，单S
位为CFU/mL
SN/T 3840.1--2014
C.1试样制备
C.1.1样品制备
附录C
（规范性附录）
膜接触测试法
制取形状大小合适的薄膜贴于测誠样或空口对照样。制备时注意接种菌恐液不能从覆盖膜的边缘出，覆益膜应略小于样品。薄膜的实际形状大小应在测试报告中说明。C,1.2样品的灭菌（可选）
如果需要对样品进行预处理，可选以下步骤：取对照样和测试样，用70※乙醇溶液擦拭其衣面，5tnin后用孔菌蒸馏水冲洗→净，白然十燥、对不适十消毒剂处埋的样品，可根据样品特性直接用无菌蒸馏水冲洗或采用其他方法消毒，似不得影响其抗菌性能和下扰试验结果，C.2测试步骤
C.2.1接种
取6个测试样和6个空白对照样,分别放人灭菌培养血巾,保持测试表面向正。用移液器准确移取（0.1~0,2）mI.己制备的菌液（7），缓慢地滴加到样品表面用死菌镊子夹起覆盖膜平铺在样品表叫，不要在表面有任似气泡生，使接补菌液与样品表面紧紧接触，均匀覆益，盖好培养血益产，如图（1所示，2
说明：
1-—后盖膜:
2—试验期液；
5——测试样：
培养正：
5-培养盖。
图（.1试样接种和盖膜放普示意图8
SN/T 3840.1-2014
如果没有对照样，直接将菌液滴加于不含样品的空培养血作为对照，以控制测试样的有效性。C.2.2接种后立即洗脱(T。时刻）在已接种菌液的3个測试样培养正或者3个对照样培养血巾分别加人10mI.SCDLP培养基（5.4)后，将培养皿放在二维或三维振荡器上轻轻振荡5min，将样品和接盖膜上细菌洗脱下来。C.2.3培养
将接种菌液的其余6个培养血（3个对照样和3个测试样），在（37土2)℃，相对湿度不小丁90%的条件下培养（24-1)h。
C.2.4培养后洗脱(24 h)
在培养后的各培养血(C.2.3)巾,分别加人 SCDLP培养基 10 mL重复 C,2,2 实验步骤。C.2.5菌落数的测定
按 B.1.5 方法测定 C.2.2 和 C.2.4 中各洗脱液中的细菌数。C.3结果的衰示
C.3.1细菌数的计算
按式(C.1)计算每个测定样品中的菌落数：M=7 ×B ×10 X I
式中：
M——每个试群中的细菌数,单位为 CFU/mLZ——两个培养血菌落数的平均值,单位为CFUI/mE.:E
薪释倍数：
[0——洗脱液的体积,单位为毫升（L：1——稀释因子。
如果接种0.1mL，-10；如果接种0.2mL，1一5.C.3.2试验有效性的评价
试验满足以下条件，判断为有效，否则试验判断为无效，应重新测试：a）初始空白对照样的菌落数平均值应不小于(1.0×10*)CFU。b）接种后和培养后的3个对照样之间：细菌数的刘数值应满足式(C.2)要求：L最大 二七表等 0.2
式中：
L品大
活菌数的最大对数值，单位为CFU/mL：I-最小——活菌数的最小对数值,单位为（CFU/tnI.;I.平均--三个样片的活菌数对数的平均值，单位为CFU/mI.。-(c.1)
.(C.2)
对照样不应有明最的抗菌作用。经接触一定时问后对照样回收菌落数不应低于“”接触时间同收菌落数的1分之。
C.3.3抑菌率计算
按13.2.3方法计算抑菌率。
SN/T3840.12014
D.1测试步骤
D.1.1接种
附录D
（规范性附录）
动态竞争测试法
取6个测试样和6个标准空自对照样分别放人250mL已消毒灭菌的三角烧瓶中，用移液器准确移取制备好的菌液（7)（50士0.5）mL分别接种到每个二角烧瓶中。如果没有标准空白对照样，则在不含样品的无菌三角烧瓶中直接接种作为对照，以保证测试样的有效性。
D.1.2接种后洗脱（T。时刻）
用移液器从3个测试样和3个标准空白对照样中分别吸取2mL到盛有18mLSCDLP培养基的消毒灭菌的烧瓶中以中和抗菌活性。用手摇动烧瓶，摆幅约30cm，摇30s，或者用旋满振荡器振荡混合5次，每次5s，将细菌洗脱，D.1.3培养
将其余3个测试样和3个对照样放人振荡转速为120r/min自的振荡培养箱中培养（24士1）h，温度为(37±2)℃。
D.1.4培养后洗脱（24h）
在D.1.3培养后的测试样和对照样洗脱步骤同D.1.2。D.1.5活菌落数的测定
用灭菌移液器分别吸取1mLD1.2和D.1.4的洗脱液，加人装有（9.0士0.1）mL生理盐水（5.5）的试管内充分振荡。用生理盐水稀释洗脱液，将D.1.2和D.1.4的洗脱液分别作10倍系列稀释液。取100L各系列稀释液分别加到两个计数琼脂培养基平板中待培养基凝固后，倒置于培养皿中培养24h~48h，培养后，取菌落数在30CFU~300CFU稀释度的培养Ⅲ进行菌落计数。若最小稀释倍数的菌落数<30，则按实际数量记录若无菌落生长，则菌落数记为“1”。D.2结果的表示
D.2.1活菌落数的计算
按式（D.1）计算每个测定样品中的活菌落数：M=ZXBX10
式中：
每个试样中的活菌落数，单位为CFU/mL；两个培养血中活菌落数的平均值，单位为CFU/mL；稀释倍数；
中和稀释因子。
..(D.1)
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鞋类和鞋材
抗细菌性能测试方法
Footwear and footwear components-Test methods to assess antibacterial activity2014-01-13发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-08-01实施
SN/T3840&鞋类和鞋材》共分为2部分：第1部分：抗细菌性能测试方法；第2部分：抗真菌性能测试方法。本部分为SN/T3840的第1部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局。SN/T3840.1—2014
本部分主要起草人：陈学灿、郑品、郑麟毅、黄晓蓉、吴谦、董健、郑洁、陈彬、林杰。1
1范围
鞋类和鞋材抗细菌性能测试方法SN/T3840的本部分规定了评估鞋类和材抗细菌性能的定量测试方法。木部分适用丁抗菌鞋材和抗菌鞋类产品。规范性引用文性
SN/T 3840.1--2014
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注口期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用下本文件。FV「2353化学消毒剂和防离剂、杀菌剂、杀孢子剂和杀真菌剂活性测定用试验有机体的保存3术语和定义
下列术语和定义适用于本义件。3.1
抗菌性能antibacterialactivity抗菌材料防止或减缓细菌生长，减少或杀死细菌的性能3.2
contrast samples
对照样
用于同一测试木经过抗菌处理的相同材料4
设备和材料
振荡培养箱：(37上2)℃,转速(120=10)r/min4.1
二级生物安全柜。
恒温培养箱：（37士2)℃。
高压灭菌器:温度可保持在121℃.压力保持在103 kPa，恒温恒培养箱：温度可保持在37℃-2℃.相对湿度能保持在90%4.5
4.6旋振荡器。
4.7紫外灯。
广口瓶:1mL.带盖，可高压灭菊。覆盖膜：不妨碍细菌生长和水分吸收的聚乙烯薄膜.厚度0.05 mm~~0.10 mm.4.10
振荡器：二维或一维。
4.11冰箱。
4.12显微镜。
5培养基和试剂
计数琼脂(EA),培养基和试剂的配制方法见附录A。5.1
SN/T3840.1-—2014
5.2营养琼脂（NA）。
5.3营养肉汤（NB)。
5.4SCDLP培养基。
5.5生理盐水（0.85%氯化钠溶液）。6试验菌种
6.1试验菌种
试验菌种如下：
a）金黄色葡萄球菌StaphylococAKOT
ATCC6538
b）肺炎克雷伯氏菌Klebsiella
peneumoniaeAS1.l736orATCC4
6.2菌种的保存
取典型菌落接种在营养琼脂（5.2）斜面试管内在（37±2下培养24h。将斜面试管贮存于（5十3）℃冰箱内，作为保存菌，每月传代一次。否则应丢弃保存菌种。
保存菌种传代次数不超过10代或保存期不超过一+个月，菌种也可按供应商推荐的方式或EN12353要求保存。7试验菌液的培养和制备
用接种环取营养琼脂培养基上的典型菌落接种于20mL营养肉汤（5.3）中，在（37土2）℃振动恒温培养箱内培养16h，用显微镜观察或者其他方法估算菌落数量。用加人1%营养肉汤的生理盐水溶液来调节菌液浓度，试验菌落浓度为2.8测试样制备
8.1测试样的准备
CFU/mL10×10°CFU/mL。
种抗菌材料占鞋内腔表面积的80%以上的.仅取该材料的测试样。如果种抗菌材料面积小于
行分别取样
鞋腔表面积的80%，则应对其中两种主要抗菌材料进从成鞋中制备测试样时，应从与脚直接接触的部位取样2mm，测试样共需要6份。应记录测试样的面积和重量。8.2测试样的预处理
测试样面积约为500mm，厚度不大于测试样的预处理是可选操作，仅在高生物负荷（污染）的情况下是必要的。预处理可采用高温高压灭菌或紫外线消毒。高温高压灭菌时测试样和对照样在（121土2）℃利103kPa条件下高温高压灭菌15min；紫外线消毒时，采用30W紫外线灯，距离样品300mm，样品每侧各1h。
采用预处理的，应当测试报告中详细描述灭菌方法8.3对照样的制备
对照样可采用未经抗菌处理的相同材料制备。若这种材料不可获得，可采用未经抗菌处理的100%棉织物。通常采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经高温蒸煮并用蒸馏水洗涤作为对照样，对2
-TTKAONKAca
照样面积与测试样相同。
检测方法
不同材质的样品使用的检测方法见表1。表1
10结果表达
鞋材类别
吸水性
非吸水性
非溶出性
各种鞋材检测方法列表
检测方法
静态竞争测试法，见附录B
膜接触测试法，见附录C
动态克争测试法，见附录
纺织品和皮革
SN/T3840.1—2014
材料示例
有微孔的材料：如合成革，EVA发泡材料，PU发泡材料等。
如致密型塑料或橡胶材料等
致密材料：
固定型抗菌剂的制作的抗菌材料抗菌性能以抑菌率来表示，对于鞋类中的不同抗菌材料应分别计算数值以百分率（%）计，保留三位有效数R=
式中：
抑菌率：
按照式（1)计算抑菌率（R），
音养后测得的细菌数的平均值，单位为CFU每毫升（CFU/mL）；-3个对照样接种菌液并培
一定的培养时问内测得的细菌数的平均值，单位为T—3个测试样接种菌液并培养24h后或者CFU每毫升（CFU/mL
如果没有对照样，用T。代替式
11检测报告
检测报告应至少包含下列信息：a)
检测标准名称；
样品和对照样的描述：
样品的预处理（例如，灭菌方法等）；试验菌种名称、编号、代数及接种菌浓度；试验方法；
试验温湿度；
抑菌率：
试验有效性的评价；
任何偏离本方法的情况；
试验人员和试验日期。
ikAoNiKAca
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计数琼脂(EA)
A.1.1成分
胰蛋白陈
酵母浸白
葡萄桃
蒸馏水
A,1,2 制法
附录A
规范性录
培养基和试剂的配制
将上成分加入蒸增水[,煮沸溶解，调节pH到7.010.2。分装试管或雄形瓶，121 ℃高压灭菌15 min.
营养琼脂(NA)
蛋白陈
牛肉宵
氯化钠
蒸馏水
2制法
除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中，调书pH到7.2~-7.1.加人琼胎，加热溶解，分装适宜容器，121高原火菌15min
营养肉汤（NB）
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
1 000 ml.
按上述成分混合溶解十蒸馏水中，调节pII到7.2-~7.4，加热游解，分装适宜容器，121℃高压灭菌4
-rKAoNirKAca
15min。
SCDLP培养基
酪蛋白陈
人豆蛋白陈
氯化钠
磷酸一钾
葡萄糖
卵磷脂
吐温80
蒸馏水
1 000 ml.
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将上述各成分加热煮沸至完全溶解，调节pH到7.2-0.1.分装适宜容需，121℃高压灭菌15minA.5
生理盐水
氯化钠
蒸馏水
A.5.2制法
1000ml
称取8.5g氯化钠-F:1000nL蒸馏水中，121℃高压灭菌15mim5
TKAoNiKAca
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B.1测试程序
B.1.1接种
附录B
（规范性附录）
静态竞争测试法
取6个测试样和6个标准空白对照样分别放人经消毒平菌的口瓶中，用移液器准确移取已制备的菌液（7）（1.0土0.1）ⅡL接种到每个广口瓶中，与样品混合均匀盖好瓶盖。使用的色板样本数量根据样品类型而定。
如果没有标准空白对照样，则用不含样品的空B.1.2接种后立即洗脱（T。时刻）门瓶作为对照，以控制测试样的有效性。在3个测试样和3个标准空白对照样（如果有对照样品）中加人20mLSCDLP培养基（5.4）。盖紧瓶盖，用手摇动30s，摆幅约30cm，或者用旋涡振荡器振荡5次.每次5s，将细菌洗脱。B.1.3培养
将其余3个测试样和3个标准空白对B.1.4培养后的洗脱
在B.1.3培养后的测试样和对照
B.1.5菌落数的测定
平板倾注法
过程同B.1.2
照样）放人（372）℃中培养（24士1）h。用经灭菌的移液器分别吸取1.0mLB1.2和B1.4的洗脱液，加人装有（9.0士0.1）mL生理盐水（5.5）的试管中，充分振荡。用生理盐水稀释洗脱液，将试管中的洗脱液分别作10倍系列稀释液。取100uI.各系列稀释液分别加到两个计数琼脂培养基平板中待培养基凝固后，倒置于培养血培养24h~48h。
培养后，取菌落数在30CFU至300CFU稀释度的培养Ⅲ进行菌落计数。若最小稀释倍数的菌落数30，则按实际数量记录；若无菌落生长，则菌落数记为“。B.2结果的表达
B.2.1细菌数的计算
按式(B.1)计算每个测定样品中的菌落数：M=ZXBX20
式中：
每个试样中的细菌数，单位为CFU/mL；两个培养Ⅲ菌落数的平均值，单位为CFU/mL；稀释倍数；
洗脱液的体积，单位为毫升（mL）。....+..(B,1)
-TTKAONKAca
B.2.2试验有效性的评价
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接种后和培养后的3个对照样之间的极差值IgAC1；接种后的试验菌落数应大于（1×10°)CFU。平板计数法中，按式（B.2)计算细菌增长值FF - IgC, - IgC.
式中：
F—对照样的细菌增长值；
.....(B. 2)
C,—3个对照样接种并培养18h~24h后测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL；C。3个对照样接种后立即测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL。F≥0时，判定试验有效，否则判定试验无效，应重新测试B.2.3抑菌率的计算
按式（B.3)计算抑菌率，数值以百分率（%)计，保留三位有效数字R_C-T
式中：
R—抑菌率；
C，一3个对照样接种菌液并培养后测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL；·CB.3)
T—3个测试样接种菌液并培养24h后或者一定的培养时间内测得的细菌数的平均值，单位为CFU/mL
如果没有对照样，用T。代替式（B.3)C，T。是对3个样品接种后立即测定的菌落数的平均值，单S
位为CFU/mL
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C.1试样制备
C.1.1样品制备
附录C
（规范性附录）
膜接触测试法
制取形状大小合适的薄膜贴于测誠样或空口对照样。制备时注意接种菌恐液不能从覆盖膜的边缘出，覆益膜应略小于样品。薄膜的实际形状大小应在测试报告中说明。C,1.2样品的灭菌（可选）
如果需要对样品进行预处理，可选以下步骤：取对照样和测试样，用70※乙醇溶液擦拭其衣面，5tnin后用孔菌蒸馏水冲洗→净，白然十燥、对不适十消毒剂处埋的样品，可根据样品特性直接用无菌蒸馏水冲洗或采用其他方法消毒，似不得影响其抗菌性能和下扰试验结果，C.2测试步骤
C.2.1接种
取6个测试样和6个空白对照样,分别放人灭菌培养血巾,保持测试表面向正。用移液器准确移取（0.1~0,2）mI.己制备的菌液（7），缓慢地滴加到样品表面用死菌镊子夹起覆盖膜平铺在样品表叫，不要在表面有任似气泡生，使接补菌液与样品表面紧紧接触，均匀覆益，盖好培养血益产，如图（1所示，2
说明：
1-—后盖膜:
2—试验期液；
5——测试样：
培养正：
5-培养盖。
图（.1试样接种和盖膜放普示意图8
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如果没有对照样，直接将菌液滴加于不含样品的空培养血作为对照，以控制测试样的有效性。C.2.2接种后立即洗脱(T。时刻）在已接种菌液的3个測试样培养正或者3个对照样培养血巾分别加人10mI.SCDLP培养基（5.4)后，将培养皿放在二维或三维振荡器上轻轻振荡5min，将样品和接盖膜上细菌洗脱下来。C.2.3培养
将接种菌液的其余6个培养血（3个对照样和3个测试样），在（37土2)℃，相对湿度不小丁90%的条件下培养（24-1)h。
C.2.4培养后洗脱(24 h)
在培养后的各培养血(C.2.3)巾,分别加人 SCDLP培养基 10 mL重复 C,2,2 实验步骤。C.2.5菌落数的测定
按 B.1.5 方法测定 C.2.2 和 C.2.4 中各洗脱液中的细菌数。C.3结果的衰示
C.3.1细菌数的计算
按式(C.1)计算每个测定样品中的菌落数：M=7 ×B ×10 X I
式中：
M——每个试群中的细菌数,单位为 CFU/mLZ——两个培养血菌落数的平均值,单位为CFUI/mE.:E
薪释倍数：
[0——洗脱液的体积,单位为毫升（L：1——稀释因子。
如果接种0.1mL，-10；如果接种0.2mL，1一5.C.3.2试验有效性的评价
试验满足以下条件，判断为有效，否则试验判断为无效，应重新测试：a）初始空白对照样的菌落数平均值应不小于(1.0×10*)CFU。b）接种后和培养后的3个对照样之间：细菌数的刘数值应满足式(C.2)要求：L最大 二七表等 0.2
式中：
L品大
活菌数的最大对数值，单位为CFU/mL：I-最小——活菌数的最小对数值,单位为（CFU/tnI.;I.平均--三个样片的活菌数对数的平均值，单位为CFU/mI.。-(c.1)
.(C.2)
对照样不应有明最的抗菌作用。经接触一定时问后对照样回收菌落数不应低于“”接触时间同收菌落数的1分之。
C.3.3抑菌率计算
按13.2.3方法计算抑菌率。
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D.1测试步骤
D.1.1接种
附录D
（规范性附录）
动态竞争测试法
取6个测试样和6个标准空自对照样分别放人250mL已消毒灭菌的三角烧瓶中，用移液器准确移取制备好的菌液（7)（50士0.5）mL分别接种到每个二角烧瓶中。如果没有标准空白对照样，则在不含样品的无菌三角烧瓶中直接接种作为对照，以保证测试样的有效性。
D.1.2接种后洗脱（T。时刻）
用移液器从3个测试样和3个标准空白对照样中分别吸取2mL到盛有18mLSCDLP培养基的消毒灭菌的烧瓶中以中和抗菌活性。用手摇动烧瓶，摆幅约30cm，摇30s，或者用旋满振荡器振荡混合5次，每次5s，将细菌洗脱，D.1.3培养
将其余3个测试样和3个对照样放人振荡转速为120r/min自的振荡培养箱中培养（24士1）h，温度为(37±2)℃。
D.1.4培养后洗脱（24h）
在D.1.3培养后的测试样和对照样洗脱步骤同D.1.2。D.1.5活菌落数的测定
用灭菌移液器分别吸取1mLD1.2和D.1.4的洗脱液，加人装有（9.0士0.1）mL生理盐水（5.5）的试管内充分振荡。用生理盐水稀释洗脱液，将D.1.2和D.1.4的洗脱液分别作10倍系列稀释液。取100L各系列稀释液分别加到两个计数琼脂培养基平板中待培养基凝固后，倒置于培养皿中培养24h~48h，培养后，取菌落数在30CFU~300CFU稀释度的培养Ⅲ进行菌落计数。若最小稀释倍数的菌落数<30，则按实际数量记录若无菌落生长，则菌落数记为“1”。D.2结果的表示
D.2.1活菌落数的计算
按式（D.1）计算每个测定样品中的活菌落数：M=ZXBX10
式中：
每个试样中的活菌落数，单位为CFU/mL；两个培养血中活菌落数的平均值，单位为CFU/mL；稀释倍数；
中和稀释因子。
..(D.1)
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