SN/T 3435-2012
基本信息
标准号： SN/T 3435-2012
中文名称：油棕枯萎病菌检疫鉴定方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：589343
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3435-2012.Detection and identification of Fusarium oxys porum Schlecht. f. sp. elaeidis Toovey.
1范围
SN/T 3435规定了油棕枯萎病菌( Fusarium orys porum Schlecht. f. sp. elaeidis Toovey)的检疫鉴定方法。
SN/T 3435适用于植物检疫中油棕上枯萎病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3原理
学名:Fusarium oxysporum Schlecht. f. sp. elueidis Toovey
中文名:油棕尖镰孢专化种
英文名:vascular oil palm wilt
油棕枯萎病菌属于真菌界Fung1.半知菌类Fungi Imperfecti,丝孢纲Hyphomycetes,瘤座孢目Tu-berculariales，瘤座孢科Tuberculariaceae廉孢菌属Fusarium 真菌。
油棕枯萎病菌可侵染油棕的根部并直接在其维管束内生长。该病菌可导致被侵染油棕叶片产生急性或慢性枯萎症状,其典型的内部症状是维管束变褐。病害的症状、病原菌的形态、病原菌的培养性状以及致病性测定是鉴定油棕枯菱病菌的主要依据。
1范围
SN/T 3435规定了油棕枯萎病菌( Fusarium orys porum Schlecht. f. sp. elaeidis Toovey)的检疫鉴定方法。
SN/T 3435适用于植物检疫中油棕上枯萎病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3原理
学名:Fusarium oxysporum Schlecht. f. sp. elueidis Toovey
中文名:油棕尖镰孢专化种
英文名:vascular oil palm wilt
油棕枯萎病菌属于真菌界Fung1.半知菌类Fungi Imperfecti,丝孢纲Hyphomycetes,瘤座孢目Tu-berculariales，瘤座孢科Tuberculariaceae廉孢菌属Fusarium 真菌。
油棕枯萎病菌可侵染油棕的根部并直接在其维管束内生长。该病菌可导致被侵染油棕叶片产生急性或慢性枯萎症状,其典型的内部症状是维管束变褐。病害的症状、病原菌的形态、病原菌的培养性状以及致病性测定是鉴定油棕枯菱病菌的主要依据。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3435—-2012
油棕枯萎病菌检疫鉴定方法
Deleclion and identification of Fusarium oxys porumSechlecht. f. sp. elaeidis Toovey2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草，SN/T3435—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别这些专利的责任，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起萱单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。本标准参加起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局中华人民共和国山东出人境检验检疫局。
本标准主要起草人;韩下吞、刘福秀、徐卫，李伟东、林明光、张建军.吴兴海。T
1范围
油棕枯萎病菌检疫鉴定方法
SN/T3435—2012
本标准规定了油棕枯萎病菌（FusariumorysporumSchlecht，f.sp.elaeidisToovey）的检疫鉴定方法。
本标准适用于植物检疫中油棕上枯萎病菌的检疫鉴定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件·仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫插样3原理
Schlecht.f.sp.elaeidis Toovey学名：Fusariumorysporum
中文名：油棕尖镰孢专化种
英文名：vascularioilpalmwilt油棕枯萎病菌属于真菌界Fun
berculariales瘤座孢科Tuberculartacea
油棕枯萎病菌可侵染油棕的根部升菌类Fungi Imperfecti.丝孢纲Hyphomycetes瘤座孢目Tu镰孢南属usarin真菌
接在其维管束
内生长，该病菌可导致被侵染油棕叶片产生急性或慢性枯萎症状，其典型的内是维管束变福
部症状
以及致病性测定是鉴定油棕枯萎病菌闷的主要依据
4试剂与培养基
4.1试剂
病害的症状、病原菌的形态、病原菌的培养性状0.1%升汞、0.5%次氯酸钠、吐温-20、链霉素、琼脂粉、马铃薯、葡萄糖。4.2培养基
病菌分离和纯化采用PDA和SNA培养基5仪器和用具
5.1仪器
生物显微镜、生物培养箱、高压灭菌锅、天平、超净工作台等。5.2用具
酒精灯、培养血，试管、载玻片、盖玻片、三角瓶、量筒、血球计数板、注射器、接种针、接种环、移液器、1
SN/T 3435—2012
丁术刀、于手术剪、镊子,璃棒等。6鉴定方法
6.1现场检疫
6.1.1样品抽取
按照SN/T22的法进行抽样，
6,1,2症状观察
现场检疫时应仔细观察油棕根部、枝干、树冠、叶片等部位足否有典型症状或可疑症状，症状述参见附录A症状图片参见附录B.
如发现可疑植株或植株所带的土壤，带回实验室做进步鉴定。6.2室内检测与鉴定
6,2.1植物组织中病菌的分离
剪取可疑的植物纠织.清水冲洗后.用0,1%的升末消声5min.火菌水洗3次，将再其移到PDA的培养基中.置25℃土1℃恒温光照培养箱12h光照与黑瞻交替培养。当发现可疑的菌，及时将菌落移植另一新的PT>A乎板I进步纯化培养。记录4d和7d的菌落直径大小，额色变化：显微镜下观察大，小型分生炮子和厚恒孢于的大小状利着4：方式；产孢细胞大小和形态特点等情况。分离出米的病原物产孢后，采用单孢分离法进一步纯化，将分生孢子制成浓度为[C（FT:/ml.的孢了悬浮波。在超净 1作台 [:用接种坏将泡子悬浮液涂在FL)A 平板表面-用低倍镜(10%)从培养血反而检查.妇发现谢野内只有一个孢于：同时附近也没有孢了存在，就用记马笔在培养Ⅲ底部（孢了存在位置)面一个小圆圈作记号，将带有小块单孢子的PDA培养苯切下.移植到新的PI)A培养基平板小，用封口膜封好 PDA平-板,25℃工1℃恒温培养，分离纯化的病原菌转到 PLA斜面上 4℃保行同时尽快将分离得到的培养物转移至费养贫乏的培养基SVA上.进行培养，并用冷冻干燥或液氮超低温冻结法保藏，以保持菌株的野生型状态；用PI)A培养培养观察其显微特征，诸如颜色、气味、生长速度、气生菌丝等。
6.2.2土壤中病菌的分商
取充分混勾样品 l.C g加l0 mI.无菌水,在磁力搅拌器上搅排［0 min，自然沉淀5tmin后.取1:清液100μuL,涂布含C.3rug/mL链素的PL)A培养基平板，25℃士1下，按6.2.1的方法培养并纯化。
6,3数病性测定
6.3.1供试植物材料准备
致病性测定采用感病非洲油棕Eleisgzzrtmsi(1.Mc96。油棕种子催芽前需用清水浸种 4 d-F小（新鲜种子的漫种时简可适当缩短），再用清水洗净，阴干.并用0，5%次氯酸钠表面消毒5mim.无菌水冲洗5nin，将处理好的种子放在人工气候箱33℃进行催芽。取萌穿种千播在30cm×50cm的塑料盆中，种植介质为灭菌的细沙排有机土（比例为1：2）。植株在室溢下生长出2片子叶时即可用上接种实验，为防止病菌扩，整个接种实验均在性负压温室中进行。2
KAoNiKAca
6. 3.2孢子悬浮液接种
5N/T 3435—2012
供试菌株在PT)A平板上2!，℃+1℃下培养1Cd.用C.025兴的叶溢20无菌水溶液将其中的分生饱子冲洗下来，制成1.X10\CFUI/mI.的孢子悬浮液。用注射针在供试植株主秆的树皮上扎一个小洞，再用注射器在小洞中注射1！的孢于悬浮液，将儿菌水湿润的灭菌吸水纸或棉花团敷下洞日，并用封口膜封好以防水分流。接种C.025为的叶温-20无菌水溶液作为对照。实验重复3次每个重复的菌株及对照接种至少多棵植株。接种后进行常水肥管理。接种7d后观察植株叶片是否变白枯萎，背面是否有褐色斑点+维管束是否变色；根部是否有微红病斑等症状,每大观察…·次，接种45t后所有植抹均不发病视为不致病，6.3.3病原菌再分离
检查植株是否有7.1 描述的症状出现,并按6. 2.1方法对 6.3.2发病并表现典型症状的植株接种部位附近的红进行病菌再分离，按了.2描述的病原特征对分离物进行观察，7鉴定特征
7.1症状特征
初期发病时，忠病幼苗生长停滞、矮小；内层叶片短、窄，呈束状，形成2种平顶的外观，顶端中央有时下陷;外层叶片变褐色、干枯，树冠中的叶片先变成黄色或灰白色，随着病菌的扩散.川片白下而！牟部变成白色，向时叶片背面会出现褐色的斑点，发病后期，树冠两边的叶片也逐渐变口，枯死，染病植株枝干横切面，能看到已经变成褐色、微红褐色或黑色的维管束。被油棕枯萎病菌感染的植株根系的中杜变浅色至深褐色，并有人量变他、微红的病斑,根的基部病斑最为明显，7.2病原特征
按Both(1971)分类鉴定系统对镰孢菌菌株进行形态学鉴定。于高倍录微镜（4C0×）下随机测量大型和小型分生孢子各30个，取测量值的平均值：油棕粘签病菌在PDA上25℃，个d,菌落直径45mm～55Mm,菌落突起状，菌丝白色质密，气生菌丝羊毛状.白色、粉色至紫-菌落背面避常产生粉色或紫色色素。大型分生孢子镶刀形.足细咆较明显，多为3~5分隔，（27um～60um）×（3um~5um）：小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形，假头生，0～1分隔,(μm~12 μm)×(2.2μm~3.5um);产孢细胞为单瓶梗,较短,单4:或具分枝.（3.75 μm-25mm）×（2.5μm-~3.75μm);厚垣孢于大多单生、对生.问生或项生，球形5.5~-10μm，菌株之问形态差较大,有些菌株产牛淡黄色分牛孢子和蓝色至蓝熙色的菌核。油棕枯萎病菌和近似种区别参见附录（
8结果判定
若菌葬特征、病原菌形态鉴定和致病性测定三名结果与油棕枯萎病菌的整定特征利致病性相衍合，判定为检出润棕枯萎病菌：否则判定为末出油掠萎病菌。9样品保存与复核
9.1样品保存与处理
样品经登记利签字后置于1℃冰箱或阴凉十燥、防虫防鼠处妥善保存：样品中分离出的渊棕枯签病3
TTKAoNiKAca
SN/T3435—2012
菌，在PDA斜面培养基25℃士1℃培养7d后，置于4℃冰箱保存，并定期转接：或将茵种用冷冻干燥机制成冻干粉置于一20低温冰箱长期保存。对鉴定为油棕枯萎病菌的样品至少应保存6个月，以备复检、谈判和仲裁，样品保存期满后，需经无害化处理。
9.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有实验人员和审核人员签字。
9.3复核
由国家质量监督检验检疫总局指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验S
irKAoNiKAca
A.1名称及分类地位
附录A
（资料性附录）
油棕枯菱病菌相关信息
学名：Fusarium orysporum Schlecht.f,spelaeidisToovey中文名：油棕尖镰孢专化种
英文名：vascularwiltofoilpalmSN/T3435—2012
半知菌类FungiImpcrfeeti.丝抱纲Hyphomycetes，瘤座孢日Tu油棕枯萎病菌属于真菌界Fung
berculariales，瘤座孢科Tuberculariaeeae，镰孢菌属Fusarium真菌A.2症状
油棕幼苗感病后，生长矮小，外轮叶片干枯，织切面显示出茎干组织的维管束变褐色，粉红色或黑色，剖开茎基部至顶芽附近的维管束呈褐色：其中层叶片和嫩叶首先变黄，以后长出的叶片逐渐变短，使病株外貌呈平顶状，外轮叶片干枯，心叶变得细小和紧缩成束量现淡黄色至象牙白色。该病在成年树上表现为急性枯萎和慢性枯萎2种症状，一种是急性枯萎，表现为叶片干枯并迅速死亡，但仍保持直立状态直至折断，通常从离基部1m～m的地方被风吹断。这种症状发病迅速，植株会在2～3个月内死亡，另一种是慢性枯要表现为植株矮小，可存活数月甚至数年之久。被侵染油棕首先是外层叶片干枯并垂挂于树干上随后逐渐蔓延到新叶。同时，当新叶长出时，仍保持直立，但一般是菱黄色，并且比正常叶片小很多，个树冠扇平，树干顶部也逐渐缩小已经变成微红褐色的维管束，有许多症状介于急性枯菱和慢性枯菱之间A.3寄主范围
染病植株枝干横切面，能看到
该菌主要危害非洲油棕Elaeigaineensi但通过人工接种从西非分离到的菌株也可使南美棕Elaeisoleifera发病。此外，把从刺范Amarunthzspinosas，飞机草Eupatorium odoratum、白芽Imperatacylindrica和Mariscusatterntfolius这些无症状杂草中分离到的镰刀菌F.oaysporum人工接种到油棕幼苗上也可致病。
A.4传播途径
该菌为土壤习居菌·菌丝体和厚垣孢子可以在土壤中长期存活，特别是厚垣孢子的存活力更强。可通过土壤、繁殖材料和种子等进行远距离传播。A.5地理分布
油棕枯萎病最早见报道于刚果民主共和国·现在主要分布手科特迪瓦扎伊尔、尼日利亚，加纳，略喀麦隆、象牙海岸、贝宁湾、圣多美和刚果，巴西和厄瓜多尔局部也有爆发。亚洲未有分布。5
KAoNiiKAca
SN/T3435-2012
说明：
大型分生孢子及分生孢子梗：
小型分生抱子及分生抱子梗：
厚垃孢子
附录B
（资料性附录）
油棕枯萎病病菌形态示意图
图B.1油棕枯菱病菌F.oxysporumf.sp.elaeidis形态示意图（引自CourtesyGerlach&Nirenberg1982）KAoNiKAca
病害名称
英文名称
中文名称
寄主范围
地理分布
形态特征
附录C
（资料性附录）
油棕枯萎病菌与近似种的区别
表 C. 1 油棕枯萎病菌与近似种的区别Fusarium orysporum f.sp.elueidisvaneular wilt ef til palin
油棕柿萎病
主要危害非洲油棕 Flaets gutnreteis 等油棕届Elaeis 植物。详见第A.3章
测果为上共和国.现在主要分布于科特迪瓦、扎伊尔、尼Ⅱ利亚、加纳,喀麦隆、象牙海岸、贝宁湾、圣多美利刚巢，巴西和厄犯多尔
大型分生孢子镰刀形，多为35分隔，大小：(27 μm~60 μm)×(3 um~5 μm)。小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形，假头生.0~1 分用,大小:(= μm1~12 μm)义(2. 2 μ~-3. 5 μm),库疯饱子大多单牛、对什间作或顺牛，球形5.= μm--10 μm.
菌抹之间形态差异较大，有些菌株产牛淡黄色分生孢子和蓝色至蓝黑色的菌核SN/T 3435—2012
Fusurium uxyspurun I, sp,aibetinisvascular wilt of date palm
海枣枯萎病
主要危害刺葵属Phuenixspp.散沐花Lausnniaimermis三叶草Trifotiumsp.
宰洛哥、阿尔及利亚，毛里塔尼业人型分生泡子镰万形，多为3分隔，大小：（2-35 μrm)X(3 μm~-5 μm):
小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形假头生，大小：(6 μm-~i2 μm)X(3 μm-~5 μm),厚迈孢子多单生,对生,球形 4 Jrm~8 μm。菌核黑色·少见下载标准就来标准下载网
SN/T 3435—2012
参考文献
L可余风卡,覃伟权.朱辉，等，油棕析葵病研究综述LI~，山国热带农业.2909,02:16 18.L2」韦爱梅，黄茂俊，土军.三角挪、泊棕帖萎病的病原鉴定和南力测定初报二门.广东园林,2005。30(2) :33-34,
I3J Flood J. A revicw of Fuseriun wilt uf til palm caused by Fusarium ox.ysporun f. sp.etaeidis l.Phytopathology.20oti,96,6io-662.[4T Flood JI. Cooper R, M. anl Lets RE. An investigetion vf pathogenicity oJ four isolatce ofFusarium ozysporum from Sauh Aineriea, Africa and Maleysia to clonel oil palm [J-Phytoputhology.1989,124:8088.[5_ Flond J. .Mepsted R.,ancl Cooper R, M, Cantamination nf oil Faitn pollen and seeds byFusarium spp._J.Myco1.Res.,1990.94:708.709.[s] Flocd J. , Mepsted R. : and Cooper R. M. IPopulation dynamics of Fusariun -pecics on oilpalm sceds Jollowing chemical and hea1 ireatments J. Plant Fathol. , 1991.13, 177-182.[7]Flcod, J. ,Whitchcad. D. S. and Cooper. R. M. Vegetative conpatihility and I'NA polytnorphisms inFusurium oxysporum f. sp.eiaeidis and their relationship to isolate virulencc anrd arigin_jJ. Physiol.Mol.PlantPatho.1992.1l:20l-215.[8] Mouyna I. . Renard J, L. Brygoo. DNA polymorphism among Fusariutn oxysporum I. sp.elaeidlis populatinns Itan oil paltll, using il Iepeated and dispersed sequence \Palm\LJl. Curr Genct.1996,39:174 180.
9Mepsli R.,Floot?. J.anl Cooper R.M, Fusarium wilt of cil palm I.Possihle causes ofstunting_JJ. Physiol, Mnl. Plaml Pathol. ,1u95,46 :361 372.-lol Mepsted R, , Flocd, J, and (onper R. M. Ft:sariuin wili of oil paln T. Stuliting Aa &mechanism to reduce water strcss. [J' Physiol. Mol. Plan1 P:thol. . 1995,+i:3r3-387.「il] Rcnird J. L. and de Franqueville H, (il palm vaacular wilLJ]. Cleagintux. , 1989, Al:342-347.
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油棕枯萎病菌检疫鉴定方法
Deleclion and identification of Fusarium oxys porumSechlecht. f. sp. elaeidis Toovey2012-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-07-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草，SN/T3435—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别这些专利的责任，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起萱单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。本标准参加起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局中华人民共和国山东出人境检验检疫局。
本标准主要起草人;韩下吞、刘福秀、徐卫，李伟东、林明光、张建军.吴兴海。T
1范围
油棕枯萎病菌检疫鉴定方法
SN/T3435—2012
本标准规定了油棕枯萎病菌（FusariumorysporumSchlecht，f.sp.elaeidisToovey）的检疫鉴定方法。
本标准适用于植物检疫中油棕上枯萎病菌的检疫鉴定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件·仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫插样3原理
Schlecht.f.sp.elaeidis Toovey学名：Fusariumorysporum
中文名：油棕尖镰孢专化种
英文名：vascularioilpalmwilt油棕枯萎病菌属于真菌界Fun
berculariales瘤座孢科Tuberculartacea
油棕枯萎病菌可侵染油棕的根部升菌类Fungi Imperfecti.丝孢纲Hyphomycetes瘤座孢目Tu镰孢南属usarin真菌
接在其维管束
内生长，该病菌可导致被侵染油棕叶片产生急性或慢性枯萎症状，其典型的内是维管束变福
部症状
以及致病性测定是鉴定油棕枯萎病菌闷的主要依据
4试剂与培养基
4.1试剂
病害的症状、病原菌的形态、病原菌的培养性状0.1%升汞、0.5%次氯酸钠、吐温-20、链霉素、琼脂粉、马铃薯、葡萄糖。4.2培养基
病菌分离和纯化采用PDA和SNA培养基5仪器和用具
5.1仪器
生物显微镜、生物培养箱、高压灭菌锅、天平、超净工作台等。5.2用具
酒精灯、培养血，试管、载玻片、盖玻片、三角瓶、量筒、血球计数板、注射器、接种针、接种环、移液器、1
SN/T 3435—2012
丁术刀、于手术剪、镊子,璃棒等。6鉴定方法
6.1现场检疫
6.1.1样品抽取
按照SN/T22的法进行抽样，
6,1,2症状观察
现场检疫时应仔细观察油棕根部、枝干、树冠、叶片等部位足否有典型症状或可疑症状，症状述参见附录A症状图片参见附录B.
如发现可疑植株或植株所带的土壤，带回实验室做进步鉴定。6.2室内检测与鉴定
6,2.1植物组织中病菌的分离
剪取可疑的植物纠织.清水冲洗后.用0,1%的升末消声5min.火菌水洗3次，将再其移到PDA的培养基中.置25℃土1℃恒温光照培养箱12h光照与黑瞻交替培养。当发现可疑的菌，及时将菌落移植另一新的PT>A乎板I进步纯化培养。记录4d和7d的菌落直径大小，额色变化：显微镜下观察大，小型分生炮子和厚恒孢于的大小状利着4：方式；产孢细胞大小和形态特点等情况。分离出米的病原物产孢后，采用单孢分离法进一步纯化，将分生孢子制成浓度为[C（FT:/ml.的孢了悬浮波。在超净 1作台 [:用接种坏将泡子悬浮液涂在FL)A 平板表面-用低倍镜(10%)从培养血反而检查.妇发现谢野内只有一个孢于：同时附近也没有孢了存在，就用记马笔在培养Ⅲ底部（孢了存在位置)面一个小圆圈作记号，将带有小块单孢子的PDA培养苯切下.移植到新的PI)A培养基平板小，用封口膜封好 PDA平-板,25℃工1℃恒温培养，分离纯化的病原菌转到 PLA斜面上 4℃保行同时尽快将分离得到的培养物转移至费养贫乏的培养基SVA上.进行培养，并用冷冻干燥或液氮超低温冻结法保藏，以保持菌株的野生型状态；用PI)A培养培养观察其显微特征，诸如颜色、气味、生长速度、气生菌丝等。
6.2.2土壤中病菌的分商
取充分混勾样品 l.C g加l0 mI.无菌水,在磁力搅拌器上搅排［0 min，自然沉淀5tmin后.取1:清液100μuL,涂布含C.3rug/mL链素的PL)A培养基平板，25℃士1下，按6.2.1的方法培养并纯化。
6,3数病性测定
6.3.1供试植物材料准备
致病性测定采用感病非洲油棕Eleisgzzrtmsi(1.Mc96。油棕种子催芽前需用清水浸种 4 d-F小（新鲜种子的漫种时简可适当缩短），再用清水洗净，阴干.并用0，5%次氯酸钠表面消毒5mim.无菌水冲洗5nin，将处理好的种子放在人工气候箱33℃进行催芽。取萌穿种千播在30cm×50cm的塑料盆中，种植介质为灭菌的细沙排有机土（比例为1：2）。植株在室溢下生长出2片子叶时即可用上接种实验，为防止病菌扩，整个接种实验均在性负压温室中进行。2
KAoNiKAca
6. 3.2孢子悬浮液接种
5N/T 3435—2012
供试菌株在PT)A平板上2!，℃+1℃下培养1Cd.用C.025兴的叶溢20无菌水溶液将其中的分生饱子冲洗下来，制成1.X10\CFUI/mI.的孢子悬浮液。用注射针在供试植株主秆的树皮上扎一个小洞，再用注射器在小洞中注射1！的孢于悬浮液，将儿菌水湿润的灭菌吸水纸或棉花团敷下洞日，并用封口膜封好以防水分流。接种C.025为的叶温-20无菌水溶液作为对照。实验重复3次每个重复的菌株及对照接种至少多棵植株。接种后进行常水肥管理。接种7d后观察植株叶片是否变白枯萎，背面是否有褐色斑点+维管束是否变色；根部是否有微红病斑等症状,每大观察…·次，接种45t后所有植抹均不发病视为不致病，6.3.3病原菌再分离
检查植株是否有7.1 描述的症状出现,并按6. 2.1方法对 6.3.2发病并表现典型症状的植株接种部位附近的红进行病菌再分离，按了.2描述的病原特征对分离物进行观察，7鉴定特征
7.1症状特征
初期发病时，忠病幼苗生长停滞、矮小；内层叶片短、窄，呈束状，形成2种平顶的外观，顶端中央有时下陷;外层叶片变褐色、干枯，树冠中的叶片先变成黄色或灰白色，随着病菌的扩散.川片白下而！牟部变成白色，向时叶片背面会出现褐色的斑点，发病后期，树冠两边的叶片也逐渐变口，枯死，染病植株枝干横切面，能看到已经变成褐色、微红褐色或黑色的维管束。被油棕枯萎病菌感染的植株根系的中杜变浅色至深褐色，并有人量变他、微红的病斑,根的基部病斑最为明显，7.2病原特征
按Both(1971)分类鉴定系统对镰孢菌菌株进行形态学鉴定。于高倍录微镜（4C0×）下随机测量大型和小型分生孢子各30个，取测量值的平均值：油棕粘签病菌在PDA上25℃，个d,菌落直径45mm～55Mm,菌落突起状，菌丝白色质密，气生菌丝羊毛状.白色、粉色至紫-菌落背面避常产生粉色或紫色色素。大型分生孢子镶刀形.足细咆较明显，多为3~5分隔，（27um～60um）×（3um~5um）：小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形，假头生，0～1分隔,(μm~12 μm)×(2.2μm~3.5um);产孢细胞为单瓶梗,较短,单4:或具分枝.（3.75 μm-25mm）×（2.5μm-~3.75μm);厚垣孢于大多单生、对生.问生或项生，球形5.5~-10μm，菌株之问形态差较大,有些菌株产牛淡黄色分牛孢子和蓝色至蓝熙色的菌核。油棕枯萎病菌和近似种区别参见附录（
8结果判定
若菌葬特征、病原菌形态鉴定和致病性测定三名结果与油棕枯萎病菌的整定特征利致病性相衍合，判定为检出润棕枯萎病菌：否则判定为末出油掠萎病菌。9样品保存与复核
9.1样品保存与处理
样品经登记利签字后置于1℃冰箱或阴凉十燥、防虫防鼠处妥善保存：样品中分离出的渊棕枯签病3
TTKAoNiKAca
SN/T3435—2012
菌，在PDA斜面培养基25℃士1℃培养7d后，置于4℃冰箱保存，并定期转接：或将茵种用冷冻干燥机制成冻干粉置于一20低温冰箱长期保存。对鉴定为油棕枯萎病菌的样品至少应保存6个月，以备复检、谈判和仲裁，样品保存期满后，需经无害化处理。
9.2结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有实验人员和审核人员签字。
9.3复核
由国家质量监督检验检疫总局指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验S
irKAoNiKAca
A.1名称及分类地位
附录A
（资料性附录）
油棕枯菱病菌相关信息
学名：Fusarium orysporum Schlecht.f,spelaeidisToovey中文名：油棕尖镰孢专化种
英文名：vascularwiltofoilpalmSN/T3435—2012
半知菌类FungiImpcrfeeti.丝抱纲Hyphomycetes，瘤座孢日Tu油棕枯萎病菌属于真菌界Fung
berculariales，瘤座孢科Tuberculariaeeae，镰孢菌属Fusarium真菌A.2症状
油棕幼苗感病后，生长矮小，外轮叶片干枯，织切面显示出茎干组织的维管束变褐色，粉红色或黑色，剖开茎基部至顶芽附近的维管束呈褐色：其中层叶片和嫩叶首先变黄，以后长出的叶片逐渐变短，使病株外貌呈平顶状，外轮叶片干枯，心叶变得细小和紧缩成束量现淡黄色至象牙白色。该病在成年树上表现为急性枯萎和慢性枯萎2种症状，一种是急性枯萎，表现为叶片干枯并迅速死亡，但仍保持直立状态直至折断，通常从离基部1m～m的地方被风吹断。这种症状发病迅速，植株会在2～3个月内死亡，另一种是慢性枯要表现为植株矮小，可存活数月甚至数年之久。被侵染油棕首先是外层叶片干枯并垂挂于树干上随后逐渐蔓延到新叶。同时，当新叶长出时，仍保持直立，但一般是菱黄色，并且比正常叶片小很多，个树冠扇平，树干顶部也逐渐缩小已经变成微红褐色的维管束，有许多症状介于急性枯菱和慢性枯菱之间A.3寄主范围
染病植株枝干横切面，能看到
该菌主要危害非洲油棕Elaeigaineensi但通过人工接种从西非分离到的菌株也可使南美棕Elaeisoleifera发病。此外，把从刺范Amarunthzspinosas，飞机草Eupatorium odoratum、白芽Imperatacylindrica和Mariscusatterntfolius这些无症状杂草中分离到的镰刀菌F.oaysporum人工接种到油棕幼苗上也可致病。
A.4传播途径
该菌为土壤习居菌·菌丝体和厚垣孢子可以在土壤中长期存活，特别是厚垣孢子的存活力更强。可通过土壤、繁殖材料和种子等进行远距离传播。A.5地理分布
油棕枯萎病最早见报道于刚果民主共和国·现在主要分布手科特迪瓦扎伊尔、尼日利亚，加纳，略喀麦隆、象牙海岸、贝宁湾、圣多美和刚果，巴西和厄瓜多尔局部也有爆发。亚洲未有分布。5
KAoNiiKAca
SN/T3435-2012
说明：
大型分生孢子及分生孢子梗：
小型分生抱子及分生抱子梗：
厚垃孢子
附录B
（资料性附录）
油棕枯萎病病菌形态示意图
图B.1油棕枯菱病菌F.oxysporumf.sp.elaeidis形态示意图（引自CourtesyGerlach&Nirenberg1982）KAoNiKAca
病害名称
英文名称
中文名称
寄主范围
地理分布
形态特征
附录C
（资料性附录）
油棕枯萎病菌与近似种的区别
表 C. 1 油棕枯萎病菌与近似种的区别Fusarium orysporum f.sp.elueidisvaneular wilt ef til palin
油棕柿萎病
主要危害非洲油棕 Flaets gutnreteis 等油棕届Elaeis 植物。详见第A.3章
测果为上共和国.现在主要分布于科特迪瓦、扎伊尔、尼Ⅱ利亚、加纳,喀麦隆、象牙海岸、贝宁湾、圣多美利刚巢，巴西和厄犯多尔
大型分生孢子镰刀形，多为35分隔，大小：(27 μm~60 μm)×(3 um~5 μm)。小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形，假头生.0~1 分用,大小:(= μm1~12 μm)义(2. 2 μ~-3. 5 μm),库疯饱子大多单牛、对什间作或顺牛，球形5.= μm--10 μm.
菌抹之间形态差异较大，有些菌株产牛淡黄色分生孢子和蓝色至蓝黑色的菌核SN/T 3435—2012
Fusurium uxyspurun I, sp,aibetinisvascular wilt of date palm
海枣枯萎病
主要危害刺葵属Phuenixspp.散沐花Lausnniaimermis三叶草Trifotiumsp.
宰洛哥、阿尔及利亚，毛里塔尼业人型分生泡子镰万形，多为3分隔，大小：（2-35 μrm)X(3 μm~-5 μm):
小型分生孢子卵形、椭圆形或肾形假头生，大小：(6 μm-~i2 μm)X(3 μm-~5 μm),厚迈孢子多单生,对生,球形 4 Jrm~8 μm。菌核黑色·少见下载标准就来标准下载网
SN/T 3435—2012
参考文献
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