SN/T 3529-2013.Determination of 2,4-diaminophenol ,2,3-diaminophenol and2,4-diaminoanisole in hair dyes for import and export.
1范围
SN/T 3529规定了氧化型染发剂中2,4-二氨基苯酚、2,3-二氨基苯酚的液相色谱测定方法和2,4-二氨基苯酚、2,3-二氨基苯酚.2,4-二氨基苯甲醚的液相色谱质谱/质谱测定方法。
SN/T 3529适用于染发霜、染发膏、煸发霜、染发剂等氧化型染发产品中2,4-二氨基苯酚、2,3-二氨基苯酚和2,4-二氨基苯甲醚的测定和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样，用添加抗氧化剂的甲酸水溶液提取，正己烷净化,离心,取下层水相过滤,采用液相色谱仪测定,液相色谱-质谱/质谱仪确证,外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1甲酸。
4.2甲醇:色谱纯。
4.3乙腈:色谱纯。
4.4抗坏血酸:优级纯。
4.5正已烷: 色谱纯。
4.6 乙酸铵。
4.7 庚烷磺酸钠。
4.8 柠檬酸。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3529—2013
进出口染发剂中2，4-二氢基苯酚2.3-二氢基苯酚和2.4-二氨基苯甲醚的检测方法
Determination of 2,4-diaminophenol,2,3-diaminophenol and2,4-diaminoanisole in hair dyes for import and export2013-03-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-09-16实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局SN/T3529—2013
本标准主要起草人：耿金培、曹鹏、曲志勇、隋涛、李晓玉、升大路、梁君妮、李金强、王海涛1范围
进出口染发剂中2，4-二氨基苯酚2,3-二氨基苯酚和2,4-二氨基苯甲醚的检测方法
SN/T3529—2013
本标准规定了氧化型染发剂中2，4-二氨基苯酚、2.3-二氨基苯酚的液相色谱测定方法和2.4-二氨基苯酚、2，3-二氨基苯酚、2，4-二氨基苯甲醚的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于染发霜、染发膏、焗发霜、染发剂等氧化型染发产品中2，4-二氨基苯酚、2，3-二氨基苯酚和2.4-二氨基苯甲醚的测定和确证。2
规范性引用文件
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分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样用添加抗氧化剂的甲酸水溶液提取，正已烷净化，离心，取下层水相过滤，采用液相色谱仪测定，液相色谱-质谱/质谱仪确证，外标法定量。方法一液相色谱法
4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲酸。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙睛：色谱纯。
4.4抗坏血酸：优级纯。
4.5正已烷：色谱纯。
4.6乙酸铵。
4.7庚烷磺酸钠。
4.8柠檬酸。
90.2%庚烷磺酸钠水溶液（pH值=3）：称取2.0g庚烷磺酸钠（4.7），用水溶解并定容至1000mL，4.9
柠檬酸（4.8)调节pH值-3。
SN/T3529—2013
00.1%甲酸中醇溶液：称取0.2g抗坏血酸（4.4).加人1mL甲酸（4.1)，用甲醇（4.2)定容至4.10
4.110.1%甲酸溶液：称取0.2g抗坏血酸（4.4），加人1mI.甲酸（4.1).用水定容至1L。4.12标准品：2.4--氨基苯（CAS号95-86-3）：纯度≥99.0%：2.3-二氨基苯酚（CAS号59649-568）：纯度97.0%。
4.13标准储备溶液：精确称取适量2,4二氨基苯酚、2.3二氢基苯酚（精确至0.1mg）于50mL棕色容量瓶中，用0.1%甲酸甲醇溶液（4.10）溶解并定容至刻度，2.3二氨基苯酚需采用差量法称取。储备液保存于4℃冰箱中，1周内使用。4.14标准工作溶液：根据需要移取适量标准储备溶液，用0的标准工作溶液，现用现配，使用棕色容量瓶
4.15滤膜：0.22um微孔滤膜.
无机柜
5仪器和设备
5.1液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或双波5.2漩涡混合器，
5.3超声波提取仪。
5.4离心机：转速不低于5000
5.5分析天平：感量为0.1mg。
5.6具塞离心管聚四氟乙烯，1006测定步骤
6.1试样的制备与保存
繁外检测器。
0酸甲醇溶液（4.10）稀释成适用浓度样品检测时现用现取，在联样过程巾，需防止样品受到气化而发生残留物含量的变化。样品开封后，立即取出样品，并迅速加人含抗氧化剂的0.1%甲酸落液（4.11混匀，密封并做好标示，避光，常温下保存。
6.2试样的处理
称取0.1g试样（精确至0.c01g）于100mL离心管中，迅速准确加人50ml0.1%中酸溶液（4.11）及15mL正已烷，涡旋1min，超声5min，再涡旋1min，5000r/min离心5min，弃去上层液体再次加人15ml正已烷，涡旋1min，5000r/min离心5min，吸取下层水相过0.22μm微孔滤膜，滤液供上机测定。
6.3测定
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：ZORBAXEclipsePlusC.5μm，4.6mm（内径）X250mm或相当者；a)
b）流动相：(A)0.2%庚烷磺酸钠水溶液（柠檬酸调pII值一3)：(B)乙精：（C)甲醇。梯度洗脱程序见表1：
-TYKAONrKAca
时间/min
检测波长：286nm；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃：
进样量：20μL
6.3.2液相色谱测定
梯度洗脱条件
流动相A/%
根据样液中被测物含量，选定浓度相近的标准工作流动相B/%
SN/T3529—2013
流动相C/%
溶液，待测样液中日标物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液与样液等体积参循进样测定。在上述仪器条件下，2，4-二氨基苯酚为T7.6min和13.2min标准溶液的色谱图参见附录A。和2,3-二氨基苯酚的保留时问约为6.4空白试验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行7结果计算与表述
用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中口标物的
式中：
算结果需扣除空白值
量，计
染发剂中目标物的含量，单位为毫克每下克（mg/kg）：样品溶液中目标物的峰面积：
标准溶液中目标物的浓度，
克每J（mg
样品加人提取液的体积，单位为毫升（mL）；标准溶液中目标物的峰面积：
最终样液代表的试样质量。单位为（g）。8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法中2.4-一氨基苯酚和2.3二氨基苯酚的测定低限均为100.0mg/kg8.2回收率
本方法的添加浓度范围及回收率的实验数据参见附录B中表B.1(1)
KAoNiKAca
SN/T35292013
9试剂和材料
方法二液相色谱-质谱/质谱法
除特殊注明外，所用试剂和材料均同4.1~4.6、4.10~4.11和4.14~～4.15。9.1标准品：2，4-二氨基苯酚（CAS95-86-3）：纯度≥99.0%：2，3-二氨基苯酚（CAS59649-56-8）：纯度≥97.0%；2.4-氨基苯甲醚（CAS615-05-4）：纯度≥99.0%。9.2标准储备溶液：精确称取适量2，4-二氨基苯酚、2,3-二氨基苯酚、2.4-二氨基苯甲醚（精确至0.1mg）于50mL棕色容量瓶中，用0.1%甲酸甲醇溶液定容至刻度，2.3二氨基苯酚需采用差量法称取。储备液保存于4℃冰箱中，1周内使用。10
仪器和设备
除特殊注明外，所用仪器和设备均同5.2~5.6。液相色谱质谱/质谱联用仪：配备电喷雾离子源（ESI）。测定步骤
试样的制备与保存
同6.1。
试样的处理
同6.2。
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHShieldRPI8，1.7μm，2.1mm（内径）×100mm或相当者；
流动相：（A)5mmol乙酸铵0.1%甲酸水：(B)0.1%甲酸乙腈。梯度洗脱条件见表2；b)
梯度洗脱条件
时间/min
流动相A/%
流动相B/%
TKAoNIKAca
时间/min
流速：0.25ml/min；
柱温：35℃：
进样量：3μl。
质谱条件
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离了扫描：
检测方式：多反应监测（MRM)；表2（续）
流动相A/%
SN/T3529—2013
流动相B/%
其他质谱参考条件参见附录C，其中氮气和氩气纯度均大于等于99.999%。高效液相色谱-质谱/质谱检测
定量测定
根据样液中被测物含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中目标物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液与样液等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，2，4-二氨基苯酚、23二氨基苯酚、2.4-二氨基苯甲醚的保留时间约为1.08min.1.44min和1.81min。标准溶液的液相色谱质谱/质谱图参见附录A。鉴于国内外对二氨基酚类物质的限量要求比较高，因此按照第一法液相色谱法检出超线性浓度的目标物时，应对定容液进行适当的稀释处理再进样检测，并且如果检出则可采用本方法即超高效液相色谱-串联质谱法进行定性确证。11.3.3.2定性测定
按照上述条件测定样品和混合标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与混合标准工作溶液一致，允许偏差小于士2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当混合标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
11.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。>20
TiKAoNrKAca
SN/T3529-2013
结果计算与表述
同第7章。
测定低限和回收率
13.1测定低限
本方法中24-二氨基苯酚、2.3-
回收率
本标准的添加浓度范围及回收
氨基苯酚和2,4
氨基苯中醚的测定低限均为1.0mg/kg，数据象贴附录B中表B
kAoNirkca
附录A
（资料性附录）
标准溶液色谱图
A.1液相色谱法标准溶液色谱图见图A.1。蒸深配
氮基米酚
种二氨基酚类化合物混合标准溶液液相色谱图A.2液相色谱质谱/质谱法标准溶液色相谱图见A1.81
24氨基苯酶
氨基苯酚
SN/T3529—2013
0.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803种二氨基酚类化合物的TIC总离子流图图A.2
SN/T35292013
0.200.400.600.80
125>80
1.802.602.202.402.602.80mm
125>108
0.200.400.600.80100
1201.401601.802.002.202402.602.80b)
2.4-二氨基苯酚多反应监测谱图1.44
125>80
0.200.400.600.801.001.20
2.202.402.602.80
1.401.601.802.00
125>107
0.200.400.600.801001.20
1.601.802.00
2.202.402.602.80
2,3-二氨基苯酚多反应监测谱图139>124
0.200.400.600.80
1.00120140.601.802.002.202.402.602.80a)
139>108
0.200.400.600.80
1001.201.401.601.802.00
2.202.402.602.80
图A.52,4-二氨基苯甲醚多反应监测谱图8
样品名称
养护染发霜
染发膏
焗发霜
染发剂
附录B
（资料性附录）
液相色谱法与液相色谱-质谱/质谱法回收率数据SN/T35292013
表B.14种染发产品中二氨基酚类物质的回收率和精密度（LC法）项目名称
2,4-二氨基苯酚
2,3-二氨基苯酚
2,4-二氨基苯酚
2,3-二氨基苯酚
2,4-二氨基苯酚
2.3-二氨基苯酚
2,4-二氨基苯酚
2,3-二氨基苯酚
添加浓度/（mg/kg）
回收率/%
76.0~95.5
79.2102.2
83.5--107.6
92,6~-111,1
95.5~115.0
100.2~119.8
88.5~106.8
91.2~108.4
96.1-112.7
75.5--91.2
83.4~102.2
78.8~95.2
83.8~101.2
86.1~105.8
92.9107.5
96.8115.5
99.9~120.9
96.0~112.6
99.6~118.8
103.8~123.3
75.0~90.8
88.5-~105.4
SN/T3529—2013
样品名称
养护染发霜
染发膏
焗发霜
4种染发产品中二氨基酚类物质的回收率和精密度（I.C-MS/MS法）项目名称
2,4-氨基苯酚
氨基苯酚
2.4氨基苯甲面
2,1-氨基苯甲醚
2.4-二氨基苯酚
2.3-二氨基苯酚
2，4-二氨基苯甲醚
漆血浓度/（mg/kg）
回收率/%
65.1~-86.3
72,3~-93.7
90.3~110.5
92.1~115.2
95.4-119.0
7C.1-91.8
74.0-~95.2
78.1~97.3
84.5~102.4Www.bzxZ.net
87.9~107.3
89.7--110.6
66.6~86.7
69.3~90.0
72.6~95.9
91.1-110.0
93,4-~115.3
96.5~-118.2
71.2~~90.2
75.0~96.1
79.2~100.4
902~108.7
93.2~111.2
95.0-116.9
75.0--92.3
79.8~97.4
85.0-102.8
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