SN/T 3503-2013.Rapid screen of ractopamine residues with nano magnetic particles-Immunechromatographic assay.
1范围
SN/T 3503规定了采用纳米磁免疫层析法,对动物源性食品、饲料和尿液中的莱克多巴胺残留进行快速筛选检测。
SN/T 3503适用于动物源性食品、饲料和尿液等样品中莱克多巴胺残留快速筛选定性检测。
本标准检测下限为0.1 ug/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1饲料采样
GB/T 18088出人境动物检疫采样
SN/T 2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范
3原理
本方法是免疫层析法中的竞争抑制法,其主要原理是:通过将牛血清白蛋白偶联莱克多巴胺抗原、抗鼠IgG抗体、纳米超顺磁标记的抗莱克多巴胺抗体和其他试剂固着在硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜等纸膜材上制成检测试纸,应用层析式竞争法原理检测样品中的莱克多巴胺残留。样品中的莱克多巴胺在流动的过程中与玻璃纤维素膜上纳米磁珠标记的特异性抗莱克多巴胺抗体结合,抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上牛血清白蛋白-莱克多巴胺抗原偶联物的结合,使检测线上结合的纳米磁珠的量减少,使用超顺磁共振检测仪测定得到的磁共振信号强度与样品中的莱克多巴胺含量成反比。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3503—2013
莱克多巴胺纳米磁快速检测方法试纸法
Rapid screen of ractopamine residues with nano magnetic particles-Immunechromatographicassay
2013-03-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-09-16实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草SN/T3503—2013
请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不应承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口，本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、清华大学深圳研究生院、深圳市外来有害生物质检测技术研发重点实验室。本标准主要起草人：卢体康、秦智锋、孙洁、马岚、林庆燕、吕建强、杨俊兴、袁航、刘建利、廖立珊、陈兵、张彩虹、陶虹、花群义、陈书琨、曾少灵、曹琛福、吴峰、阮周曦、宗卉。1范围
莱克多巴胺纳米磁快速检测方法试纸法
SN/T3503-—2013
本标准规定了采用纳米磁免疫层析法，对动物源性食品、饲料和尿液中的莱克多巴胺残留进行快速筛选检测。
本标准适用于动物源性食品、饲料和尿液等样品中莱克多巴胺残留快速筛选定性检测。本标准检测下限为0.1μg/kg。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T18088出人境动物检疫采样
SN/T2123出人境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范3原理
本方法是免疫层析法中的竞争抑制法，其主要原理是：通过将牛血清白蛋白偶联莱克多巴胺抗原、抗鼠IgG抗体、纳米超顺磁标记的抗莱克多巴胺抗体和其他试剂固着在硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜等纸膜材上制成检测试纸，应用层析式竞争法原理检测样品中的莱克多巴胺残留。样品中的莱克多巴胺在流动的过程中与玻璃纤维素膜上纳米磁珠标记的特异性抗莱克多巴胺抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上牛血清白蛋白-莱克多巴胺抗原偶联物的结合，使检测线上结合的纳米磁珠的量减少，使用超顺磁共振检测仪测定得到的磁共振信号强度与样品中的莱克多巴胺含量成反比。4试剂与仪器
4.1试剂
4.1.1试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合GB/T6682规定的二级水，所用化学试剂均为分析纯。
4.1.2莱克多巴胺纳米磁免疫层析快速检测试纸4.1.3
冲洗液（配方见附录A的A.1)。
4.1.4甲醇。
乙酸乙酯。
4.1.6氨水。
氨化甲醇溶液（配方见A.2）。
SN/T3503—2013
4.1.8PH7.40.02mol/LPBS溶液(配方见A.3）4.1.90.5μg/L莱克多巴胺阳性标准品溶液（配方见A.4），置于4℃，可保存3个月。4.1.10莱克多巴胺阴性对照：不含有莱克多巴胺残留且经气相-液相-液相（I.C/MS/MS）仪器确证为阴性的尿液、肌肉、组织或血液样本。4.1.11空白对照：冲洗液。
4.2仪器
超顺磁共振检测仪。
离心机：
涡旋式混合器
勾浆器。
微量移液器：50pL、100L和1008pL单通道移液器5样品采集、运输与保存
5.1样品的采集
样品的采集、保存及运输应符合5.2样品的运输与保存
37T11699
饲料样品可于常温运输，其余样品应置6样品制备
6.1肌肉、肝脏制样
3/T18088
N/T2123的相关采样要求。
整封的容器内运输.2℃~8℃保存不应超过21h称取肌肉或肝脏2.0：于匀浆器中充分勾浆，加人
10min，取出上清液；沉淀中再加1混匀，于45℃下氮气吹干，用1mlTPH
6.2尿液制样
甲醇，涡旋振荡
旋振荡10min，4000g离心
000g离心10min，合并两次上清液，min,4
PBS稀释液充分溶解后待检。
澄清的尿液可直接用于检测：若尿液混，需要4000g离心5in后待检。
6.3血液制样
血清或血浆4000g离心5min，取上清液用pH7.40.02mol/LPBS进行1：5稀释后待检。6.4饲料制样
用勾浆器将何料充分粉碎，称取2.0g，加12mL氨化甲醇溶液，充分混匀.振荡1min2min，加9ml乙酸乙酯，振荡20min，以4000g离心10min，取1层有机相500uL至一试管中，45℃氮气吹干，用1mlpH7.40.02mol/LPBS稀释液充分溶解后待检。7样品中莱克多巴胺快速筛选检测7.1上样前的准备与检查
7.1.1先将待检测样品和冲洗液恢复至室温（22℃~25℃）。2
YYKAONTKAcawww.bzxz.net
2检查铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气不得使用7.1.2
7.1.3打开铝箱袋，将试纸条取出，检查纸条是否完好，若有破损或弯曲不得使用。7.1.4将试纸条加样孔朝外平放在实验台面上。7.2
设立对照
SN/T3503—2013
在样品处理过程中必须设立阳性对照、阴性对照和空白对照，并与待检样品一起检测，7.3样品检测
7.3.1使用微量移液器取待检测样品100uL，垂直缓慢滴入莱克多巴胺纳米磁免疫层析快速检测试纸条的前端加样孔，随即在试纸条的后端加样孔中垂直缓慢滴人50u冲洗液。7.3.2在空温孵育15min后，将试纸放人超顺磁共振检测仪中，判读结果。15min20min内测试结果有效。超过20min判读结果无效。仪器使用后至少间隔1min后，才可以检测下个样品8结果判定
8.1值设定和试验成立判定
设定磁共振信号强度350为阅值。阴性对照和空白对照经超顺磁共振检测仪检测信号强度>350，阳性对照经超顺磁共振检测仪检测信号强度≤240。两者均成立才可判定试验成立，否则试验无效。8.2阳性判定
在试验成立的条件下，超顺磁共振检测仪检测信号强度≤350，判定为样品中莱克多巴胺残留初筛阳性。表明样品中莱克多巴胺残留≥0.1nug/kg。8.3阴性判定
在试验成立的条件下，超顺磁共振检测仪检测信号强度>350，判定为样品中莱克多巴胺残留初筛阴性。表明样品中莱克多巴胺残留低于o.1ug/kg。8.4仪器确证
初筛阳性的样品应用仪器确证的方法（HPLC或LC/MS/MS)加以复核确证。TKAONKAca
SN/T3503—2013
A.1冲洗液
吐温20（Tween20)
0.02 mol/L PBS(pH7.4)
氨化甲醇溶液
pIH9～10的氨水溶液
允分混勾。
A.3pH7.40.02mol/LPBS溶液
磷酸氢二钠（NazHPO,）
附录A
（规范性附录）
主要检测试剂的配制
水合磷酸二氢钠（NaHPO，·HO)氯化钠（NaCI）
加去离了水至
调节pH值至
加去离子水定容至
0.5μg/L莱克多巴胺阳性标准品溶液A.4
莱克多巴胺标准品
0.01mol/L盐酸
配制成标准储备液
1001g/mL标准储备液
pH7.40.02mol/LPBS溶液
100μg/mL
199份
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