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SN/T 3682-2013

基本信息

标准号: SN/T 3682-2013

中文名称:葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 葡萄 病菌 检疫 鉴定 方法

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标准简介

SN/T 3682-2013.Detection and identification of Phoma glomerata (Corda) Wollenw. & Hochapfel.
1范围
SN/T 3682规定了葡萄茎枯病菌[ Phoma glomerata (Corda) Wollenw &. Hochapfel]检 疫鉴定的实验步骤、鉴定方法等。
SN/T 3682适用于葡萄茎枯病菌寄主植物种苗中葡萄茎枯病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 1126进出境木材 检疫规程
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程
3葡萄茎枯病菌的基本信息
学名: Phoma glomerata (Corda)Wollenweber & Hochapfel
异名:Conioth yrium glomeratum Corda
Phoma alternariacea Brooks&Searle
A pos phaeria fibricola (BERK.)SACC.
有性世代学名:Leptosphaeria sacchari Breda de Haan(尚未发现其有性型,但曾经有这个定名。
中文名称:葡萄茎枯病菌
分类地位:子囊菌门(Ascomycota),子囊菌纲( Asconycetes),粪壳菌亚纲( Sordariomycetidae),间座菌目(Diaporthales) ,黑座菌科(Valsaceae),茎点霉属(Phoma)

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3682—2013
葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Phoma glomerata (Corda) Wollenw. & Hochapfel2013-08-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-03-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T3682—2013
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局。本标准主要起草人:贺艳、赵良娟、段维军、罗加凤、牛嘉慧、廖芳、赵卫东。1范围
葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法
SN/T3682—2013
本标准规定了葡萄茎枯病菌[Phomaglomerata(Corda)Wollenw&Hochapfel检疫鉴定的实验步骤、鉴定方法等
本标准适用丁葡萄茎枯病菌寄主植物种苗中葡萄茎枯病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1126进出境木材检疫规程
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3葡萄茎枯病菌的基本信息
学名:Phomaglomerata(Corda)Wallenweber异名:Coniothyrium glomeratumCordaPhoma alternariacea Brooks&SearleAposphaeriafibricola(BFRK.)SACC.&.Hochapfel
BredadeHaan(尚未发现其有性型,但曾经有这个定名。)有性世代学名:Leptosphaeria
sacchari
中文名称:葡萄茎枯病菌
分类地位:子囊菌门(AscomybZxz.net
ycota)
mycetes
粪壳菌亚纲(Sordariomycetidae),子囊菌纳(ASCO)
间座菌目(Diaporthales),黑座菌科(Valsaceae)
点霉属(Phoma)
传播途径:近距离传播方式为分生孢子随着风雨传播以及密植土壤中休眠的厚垣孢子。远距离传播方式为厚垣孢子随着种子,土壤和植物残渣传播。病菌在土壤中能够长期存活,当年收获遗留田间的植物残渣中的厚垣孢子等成为次年初侵染源葡萄茎枯病菌的其他信息参见附录A4原理
病原菌的培养性状和形态学特征(见附录B)作为葡萄茎枯病菌的检疫鉴定的主要依据5设备和试验用具
5.1仪器设备
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平(感量0.01g)、高压灭菌锅。5.2试验用具
放大镜、灭菌培养皿、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、解部刀、酒精灯、标签、载玻片、盖玻片等。
SN/T3682—2013
6试验和培养基
6.1试剂
麦芽汁提取物、蔗糖、硝酸钠(NaNO,)、硫酸镁(MgSO,·7H2O)、氯化钾(KCI)、硫酸铁(FeSO,:7H,O)、磷酸二氢钾(KH,PO,)、磷酸氢二钾(KHPO,)、琼脂、链霉素、1.0%次氯酸钠(NaCIO)、无菌水、酒精。
6.2培养基
麦芽汁琼脂培养基、查氏培养基、查氏酵舟琼脂(CYA)培养基(参见附录C)。7抽样
米自疫区葡萄茎枯病菌寄主的原木或板材按SN/T1126进行抽样。来白疫区葡萄茎枯病菌寄主的苗木按SN/T1157进行拙样。8检验方法
在葡萄上症状为枯萎,在苹果和小麦上为叶斑。实验室分离培养方法如下:将可疑的病变组织,剪成0.4cm×0.4cm小片,在1.0%的次氯酸钠溶液中消毒5min,灭菌水冲洗3次.灭菌滤纸吸干水分后,置于麦芽汁选择性培养基平板上,每血放置3~4片,24℃培养,3d后开始观察。解剖镜下发现有菌丝长出,立即挑取菌落边缘菌丝,转入麦芽汁选择性结养基上纯化培养。7d后用显微镜观察,记录其形态特征,并测定病菌生长速度、分生孢子长度和宽度等。继续在选择性培养基上培养,13h近紫外等照射11h黑暗条件培养至10d.产生厚垣孢子后测量其大小。葡萄茎枯病菌适宜生长温度为24℃,暗培养一个星期的菌落直径为5cm~7.5cm。鉴定特征
9.1病原菌培养性状
菌落的特征为轻微算立的菌丝体。菌落颜色为浅褐色,菌丝垫颜色逐渐变暗(砖格状厚垣孢子逐渐增多)。
在25℃下,在PDA和MEA上口生长速度为1cm/d左右,在OA上生长速度略慢,为0.75cm/d。在PDA、MEA,OA上菌落均仅有轻微管立的菌丝体,气生菌丝少稀薄,PDA上菌丝较MEA和OA上多。在3种培养基上,菌落边缘颜色均为白色,较浅,菌落中部颜色有所不同(在PDA、上,正面/反面:灰褐/灰黑;在MEA上,正面/反面:红褐/褐色;在OA上,正面/反面:灰黑/灰黑,有大量黑色状小点为病菌分生孢子器)(见附录B)。在培养早期以产生大量分生孢子器为主,但在3种培养基上培养5d后均未观察到厚垣孢了产生,培养后期可产生大量厚垣孢子。9.2病原菌形态特征
菌落形成大量的分生抱子器,直径50II~300m,分牛抱子器上形成浅玫瑰红色分生抱子液。分生抱子器通常为规则的球形,但偶尔也会形成长茎状物。小的分生抱子器会形成于砖格状厚垣抱子链之间。分牛抱子器壁为拟薄壁组织。分牛抱子通常为单细胞,无色透明,椭圆形至近圆柱形,直的或-TKAONi KAca
SN/T3682—2013
向内稍弯曲,有油球(1~3个),多为2个,3.3μm~6.15μm(5.09)×1.91μm~3.14(2.67)μm。该种最典型的特征是产生与链格孢属(Alternaria)真菌分生孢子相似的砖格状厚垣孢子,通常形成于分生孢子器或伸出的菌丝,形成分枝或不分枝的孢子链。厚垣孢子为砖格状,18um~48μm(35.2)×7.4μm~18.7(13.8)um。有时孢子链在培养基上是丛生的。葡萄茎枯病菌的砖格状厚垣孢子不脱落。孢子链上相邻的两个厚垣孢子断开后形成粗糙的边缘。砖格状厚垣孢子有一层外壁,能够与组成孢子的细胞壁区分开。显微镜下镜检观察脱落厚垣孢子较少,大多连接在一起。该病菌有性阶段至今尚未发现,病原菌的鉴定根据该病原菌的无性阶段形态特征。10
结果判定
病原菌培养性状和形态特征分别符合9.1和9.2中的描述,即可鉴定为葡萄茎枯病菌。菌株保存与处理
分离并最终鉴定为葡萄茎枯病菌的菌株应转人PDA培养基斜面上,存活后经登记和经手人签字,置于4℃~8℃黑暗条件下保存,定期(60d)转接,以防止病原菌死亡,至少保存6个月,必要时用病原菌分生孢了作冻干菌种保存。保存期满后高压灭菌灭活处理。3
-iiAoNiKAca
SN/T3682—2013
A,1寄主
附录A
(资料性附录)
葡萄茎枯病菌基本信息
葡萄科(VitaceaeLindley)、苹果属(MalusMill.)、小麦(TriticumaestivumL.)、燕麦属(AvenaLinn.)马铃薯(SolanunluberosumL)甘薛属(SaccharumLinn)蚕豆(Viciafaba)柑橘属(CitrusL.)、橄榄属(CanariumL.),花旗松Pseudotsuga menziesii(Mirbel)Franco]、大豆[Glycinemar(Linn.)Merr.、桃属(AmygdalussL番石榴(PsidiumguajauaLa)
杏(ArmeniacauulgarisL.)、杨属(PopulusL.)、首蓓属(MedieagoLinn棕榈属(IrachyearpusH.Wendland)、蓝花楹属(JacaranduJuss.)、荔枝属(LitchiSonn.),玫瑰(Rosa rugosaThunb.)、植香属(SantalumL.)橡皮树(Ficuselastica)
地理分布
主要分布于意大利、希腊、瑞典、印度、澳大利亚、以色列、秘鲁、匈牙利、美国、加纳、南非、伊朗。S
-TTKAONKACE
注:(引自Scholefield)。
附录B
(规范性附录)
葡萄茎枯病菌症状和形态特征
图B.1小麦穗表面的葡萄茎枯病菌的分生孢子器注:(引自Aghapour2009)
葡萄茎枯病菌在橡皮树(Ficuselastica)上形成的叶斑病SN/T3682-—2013
TrKAoNTkAca
SN/T3682—2013
葡萄茎枯病菌在PDA培养基的培养性状(左边为正面,右边为背面)图B.4
葡萄茎枯病菌在OA培养基的培养性状(左边为正面,右边为背面)iKAoNiKAca
SN/T3682-2013
葡萄茎枯病菌在MEA培养基的培养性状(左边为正面,右边为背面)注:(引自Aghapour2009)。
葡萄茎枯病菌在PDA培养基上形成的具网格的厚垣孢子(标尺=30μm)SN/T3682—2013
注:(引自Aghapour2009)
葡萄茎枯病菌在水琼脂培养基上形成的分生孢子(标尺为5μm)注:(引自Aghapour2009)
葡萄茎枯病菌在水琼脂培养基上形成的分生孢子器(标尺为50μm)图B.8
附录C
(资料性附录)
培养基的配方和配制方法
麦芽汁琼脂培养基(OA)(pH6.5)成分C.1
麦芽汁提取物(Difco0024)
琼脂(Difco0140)
蒸馏水
PDA培养基
马铃薯
葡萄糖
链霉素
蒸馏水
MEA培养基
麦芽汁提取物(Difco0024)
大豆蛋白陈
琼脂(Difco0140)
蒸馏水
配制方法
SN/T3682—2013
定容至/000mL,调pH至6.5士0.220g
1000ml
定容至
000mL调pH至5.6±0.2
按照配方准确称量,加人少量水,加热使之完全溶解,用蒸馏水定容至1000mL,调节pH值,混匀后分装于三角瓶中,121℃高压灭菌15m1n。培养基冷却至不烫手时无菌操作下添加链霉素并混勾,将人约15mL的培养基倒入无菌平板中,静置备用。该配制方法适用于上述3种培养基的配制。9
SN/T3682—2013
参考文献
[1CropProtectionCompendium2007Edition(ISSN:1365-9065,ISBN:978-1-84593-357-9).[2]CAB Abstracts,1973-1998,Data mined from CAB Abstracts dalabase,years 1973 to 1998.Wallingford,UK.CABInternational.L3] George M.Luedemann, The Dictyochlamydospore of Peyronellaea Glornerata(Corda)GoidanichcxTogliani Contrasted With the Dictyoporaspore of Alternaria Tenuis Auct.Mycologia, 1959,5l(6):772-780.
G.H,Bocrema,Maria M.J.Dorenhosch, The Phoma and Ascochyta species described byWollenweber and Hochapfel in their study on fruit-rotting,Mycology,1973,15(3).[5G.H.Boerema,M.J.Dorenbosch,H.A.Vesteren,Remarks on Species of Phoma Referred toPeyronellaea.V,KewBulletin1977,31(3)533-544.[6]John Michael McPartland,Robert Connell Clarke,Hemp diseases and pests:managementand biological control
[7] Scholefield RobinsonHorticultural Services PtyLtd.[8]R.M.HosfordJr.,Phoma glomerata,a New Pathogen of Wheat and Triticales,CultivarResistance Related to Wet Period.Phytopathology.1975.65:1236-1239.L9]Raymond F.Sullivan and James F White.Jr.Phoma glomerata as a Mycoparasite ofPowderyMildew,ApplEnvironMicrobiol.2000January,66(1):425427.[1o]B.Aghapour,K.B.Fotouhifar,A.Ahmadpour et.al.First report of leaf spot disease on Ficuselastica caused by Phoma glonerata in Iran,Australasian Plant Disease Notes,2009,4,82-83.10
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