SN/T 3983-2014
基本信息
标准号： SN/T 3983-2014
中文名称：出口食品中氨基酸类有机磷除草剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 食品 氨基酸 有机磷 除草剂 残留量 测定 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3983-2014.Determination of phosphonic and amino acid group-containing herbicides residues in foodstuffs for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 3983规定了大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜等食品中草甘膦(glyphosate)及其代谢产物氨甲基膦酸(aminomethyl phosphonic acid, AMPA)和草铵膦(glufosinate)等氨基酸类有机膦除草剂残留量的液相色谱质谱/质谱测定方法。
SN/T 3983适用于大米、小麦、大豆、玉米奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中、草甘膦、氨甲基膦酸(AMPA)和草铵膦残留量的测定与确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
采用水提取试样中(大米、奶白菜、葡萄、橙子)残留的氨基酸类有机膦除草剂类药物,经二氯甲烷净化,与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后，液相色谱质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
采用水和二氯甲烷混合溶液提取试样中(小麦、大豆玉米大蒜和马铃薯)残留的氨基酸类有机膦除草剂类药物,提取液经三氯乙酸沉淀蛋白,二氯甲烷净化,与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后,液相色谱-质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
虾肉、鱼肉、蜂蜜和茶叶中的氨基酸类有机膦除草剂类药物残留采用水和二氣甲烷混合溶液提取，提取液经阳离子交换柱(CAX)净化，与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后,液相色谱-质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
1范围
SN/T 3983规定了大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜等食品中草甘膦(glyphosate)及其代谢产物氨甲基膦酸(aminomethyl phosphonic acid, AMPA)和草铵膦(glufosinate)等氨基酸类有机膦除草剂残留量的液相色谱质谱/质谱测定方法。
SN/T 3983适用于大米、小麦、大豆、玉米奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中、草甘膦、氨甲基膦酸(AMPA)和草铵膦残留量的测定与确证。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
采用水提取试样中(大米、奶白菜、葡萄、橙子)残留的氨基酸类有机膦除草剂类药物,经二氯甲烷净化,与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后，液相色谱质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
采用水和二氯甲烷混合溶液提取试样中(小麦、大豆玉米大蒜和马铃薯)残留的氨基酸类有机膦除草剂类药物,提取液经三氯乙酸沉淀蛋白,二氯甲烷净化,与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后,液相色谱-质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
虾肉、鱼肉、蜂蜜和茶叶中的氨基酸类有机膦除草剂类药物残留采用水和二氣甲烷混合溶液提取，提取液经阳离子交换柱(CAX)净化，与9-芴基甲基氯甲酸酯衍生化反应后,液相色谱-质谱/质谱检测和确证,内标法定量。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3983—2014
出口食品中基酸类有机磷除草剂残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of phosphonic and amino acid group-containing herbicidesresiduesinfoodstuffsforexport-LC-MS/MSmethod2014-11-19发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-05-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草SN/T3983—2014
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张建莹、胡晓苑、吴凤琪、张毅、罗耀、吴卫东、岳振峰。1范围
出口食品中氨基酸类有机磷除草剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法SN/T3983—2014
本标准规定了大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜等食品中草甘麟（glyphosate）及其代谢产物氨甲基膦酸（aminomethylphosphonicacid，AMPA）和草铵麟（glufosinate）等氨基酸类有机麟除草剂残留量的液相色谱质谱/质措测定方法。本标准适用于大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中草甘膦、氨甲基麟酸（AMPA）和草敏麟残留量的测定与确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
采用水提取试样中（大米、奶白化，与9-基甲基氯甲酸酯衍生化反应后
、橙子
残留的氨基酸类有
机麟除草剂类药物，经二氯甲烷净夜相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法定量夜提取试样中（小麦、大豆
玉米大蒜和
马铃薯）残留的氨基酸类有机麟采用水和二氯中烷混合溶液
蛋白，二氯甲烷净化，与9-荡基甲基氯甲酸酯衍生化反应后，液除草剂类药物，提取液经三氯乙酸沉淀定量。
相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法虾肉、鱼肉、蜂密和茶叶中的氨基酸类有机麟除草剂类药物残留采用水和二氯中烷混合溶液提取，提取液经阳离子交换柱（CAX)净化，与9-基甲基氟甲酸酯衍生化反应后，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，试验用水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1二氯甲烷：高效液相色谱纯。4.2丙酮：色谱纯。
中醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
三氯乙酸。
4.6盐酸。
硼酸钠（NaB,O,·10HO)。
乙酸铵：色谱纯。
中酸：色谱纯。
SN/T3983—2014
9-苏基甲基氯甲酸酯［9-fluorenylmethylchlorofornate（FMOC-CL）]：纯度不低丁99.0%，4.10
4℃保荐。
4.11氨水。
4.12CAX洗脱液：分别量取160mL水、2.7mL盐酸（4.6）和40ml甲醇（4.3），混匀，4.135%硼酸盐缓冲溶液（pH值9.0）：称取5g硼酸钠（4.7）用水溶解并定容至100mL，混勺4.14衍生化试剂：称取200mgFMOC-CL，用丙酮（4.2）溶解并定容至100mL，混勾。4.1520%三氯乙酸溶液：称取20g三氯乙酸（4.5）溶于适量水中，稀释定容至100mL。4.165mmoL乙酸铵水溶液（含0.1%中酸）：称取0.3854g乙酸铵溶解于适量的水中，加入1mL甲酸（4.9），用水定容至1C00mL，混勺。4.17乙晴（含0.1%甲酸）：吸取1mL甲酸于1000mL乙腈（4.4）中，混勾。4.18标准物质：草甘麟（glyphosate，CAS号：1071-83-6），纯度99.0%：氨甲基麟酸（AMPA，CAS号：1066519），纯度99.0%；草铵麟（glufosinate，CAS号：51276-47-2），纯度99.0%：草甘麟同位索内标（1，2-C\N5草甘麟）：100ug/mL（相关化学信息参见附录A中表A.1）。4.19标准储备液的配制：分别准确称取一定量的草甘麟、氨中基膦酸和草铵麟标准物质，用水溶解（另加2滴盐酸）后配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液，5℃以下避光保存，可使用6个月。4.20混合标准中间溶液的配制：准确移取适量体积的标准储备液（4.19）用水稀释成浓度为10.01mg/L的混合标准工作液。5以下避光保存，可使用3个月。4.21同位素内标标准工作溶液的配制：准确移取适量体积的标准母液（4.18），用水稀释成浓度为10.0mg/L的内标标准工作液。5℃以下避光保存，可使用3个月。4.22混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准中间溶液（4.20）和同位素内标工作溶液（4.21），用水配制成外标浓度为5.00μg/L、10.0μg/L、25.0ug/L、50.0g/1.和100ug/L的混合标准工作溶液（同位素内标物浓度均为20ug/1.)，当天配制。4.23阳离了交换固相萃取柱：AG50W-X8树脂，200目~400日，H+型，0.8cmX4cm（可采用美国Bio-Rad公司同等性能的CAX商品化小柱，或同等性能的其他小柱）。4.24微孔滤膜：0.45μm水相型。5仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2
固相萃取装置。
涡旋混匀器。
旋转蒸发仪
聚内烯离心管.50mL，15mL.具塞，带刻度。5.6
离心机：转速可达95001/min。
均质器。
6试样制备与保存
6.1一般要求
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，1）非商业性声明：此处列出色谱柱型号仪是为了提供参考，不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或规格的色谱柱。
-TiKAoNiiKAca
6.2大米、奶白菜、小麦、茶叶、大豆、葡萄、马铃薯、大蒜和橙子SN/T3983—2014
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃冷藏存放。
6.3玉米、虾和鱼
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500，充分搅碎混匀，试样装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。6.4蜂蜜
取未开封蜂密样品置于50℃60℃的水浴中温热，待样品全部溶化后搅拌均勾，取试样约500g均分为两份，装入洁净容器，密封，并标明标记。常温保存。7分析步骤
7.1试样提取
7.1.1大米、奶白菜、葡萄和橙子称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加人草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25mL水和10mL二氯甲烷，涡旋振荡提取10min，9500r/min离心5min。吸取上清液4mL到15mL离心管中，使用氨水（4.11）调节pH值至7，加入5mL.二氯甲烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min。吸取上清液1.0mL到15mL离心管中，待衍生化。7.1.2小麦、大豆、玉米、大蒜和马铃薯称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25ml水和10mL二氯甲烷，涡旋振荡提取10min，9500r/min离心5min。吸取上清液5mL到15mL离心管中，加人0.2mL20%三氯乙酸（4.15）溶液，涡旋振荡提取1min，于9500t/min离心5min。取上清液4mL到15mL离心管中，使用氨水调节pH值至7，加入5mL二氯中烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min。吸取上清液1.0ml到15mL离心管中，待衍生化。7.1.3虾肉、鱼肉、蜂蜜和茶叶
称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25mL水和10mL二氯甲烷，高速勾浆提取10min，于9500r/min离心5min。取上清液6mL到15mL离心管中，再加人4mL二氯甲烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min，取上清液4mL到15mL离心管中，使用盐酸调节pH值至2，待净化。7.2净化
吸取1.0mL提取液（7.1.3）于活化好的CAX固相萃取柱（4.23）中，以约1.5mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再吸取1.0mLCAX淋洗液淋洗，弃去流出液，用12mLCAX淋洗液洗脱，收集洗脱液于干净的50mL磨口瓶中，50℃减压旋蒸浓缩至近干，加人1.0mL5%硼酸盐缓冲溶液（4.13），涡旋溶解残渣，待衍生化。7.3衍生化
吸取300μL硼酸盐缓冲溶液（4.13）到净化液（7.2)中，再加人200μL衍生化试剂（4.14），涡旋振荡3
TKAONiKAca
SN/T3983—2014
1min，室温静置衍生过夜。将衍生化后溶液涡旋振荡1min，收集水层过0.45um滤膜（4.24），供液相色谱-串联质谱测定。
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：Ca色谱柱，150mmX2.1mm（内径），2.7μm，或相当者；柱温：30℃；
进样量：20L，
流动相、流速及梯度洗脱条件见表1流动相流速及梯度洗脱条件
质谱条件
质谱条件如下：
离子化模式：电喷雾离了源（ESI）、正离了扫描h)
质谱扫描方式：多反应监测(MRM)：分辨率：单位分辨率；
其他参考质谱条件参见附习
液相色谱-质谱/质谱测定
定性测定
表B.1。
mmol乙酸铵水溶液
（含0.1%甲酸）
（含0.1%甲酸）
在相同实验条件下进行处理，样品中待测物质的保留时间，与混合标准溶液的保留时间偏差在土2.5%之内：每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度迅行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的最大偏差/%
20~-50
>10~20
-TTKAONiiKAca
7.4.3.2定量测定
SN/T3983-—2014
在仪器最住工作条件下，对混合标准工作溶液进样，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，以色谱峰面积按内标法定量。氨基酸类有机膦除草剂标准物质的多反应监测（MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。
空白实验
除不加入标准物质外，按上述测定步骤进行。8结果计算和表述
用液相色谱质谱/质谱数据处理软件或者按照式（1）计算试样中检测目标物残留量，计算结果应扣除空白值：
.XAXA-Xm
式中：
样品中氨基酸类除草剂残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；样液中氨基酸类有机麟除草剂标准工作溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；样液中内标物的浓度，单位为毫克每升（Mg/L）：样液中氨基酸类有机膦除草剂的峰面积；标准工作溶液中内标物的峰面积；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：标准工作溶液中内标物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；标准工作溶液中氩基酸类有机麟除草剂峰的面积：样液中内标物的峰面积
最终样液代表的试样质量，单位为克（）9
测定低限和回收率
测定低限
本方法对3种氨基酸类有机麟除草剂的测定低限均为0.0500mg/kg。2回收率
...(1)
在四个添加水平下，大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中草甘麟、氨甲基膦酸和草铵麟的回收率数据参见附录D中表D.1。5
-TrKAoNiKAca
SV/T3983-—2014
化合物名称
氨甲基膦酸
草铵麟
英文名
Glyphosate
Glufosinate
附录A
（资料性附录）
氨基酸有机膦类除草剂的相关信息表A.1
CAS号
1071-83-6
1066-51-9
51276-47-2
氨基酸有机麟类除草剂的相关信息分子式
C,HN,O,P
相对分子质量
分子结构
HOPCHNHCH.COOH
HO-PCH,NH
HC-PCH,CHCHCOOH
-riKAoNikAca
参考质谱条件如下：
电喷雾电压：5500V；
附录B
（资料性附录）
参考质谱条件2
雾化气压力（GS1)：275.8kPa（40psi)；辅助气流速（GS2）：413.7kPa（60psi)；幕帘气流速（CUR）：172.4kPa（25psi)；离子源温度：500℃C：
碰撞气CAD：68.95kPa(10psi)：其他质谱参数见表B.1。
定性离子对
化合物名称
草甘膜-FMOC
氨甲基膦酸
草铵-FMOC
草廿麟同位素
内标-FMOC
392.0/88.0
392.0/214.0
334.0/179.0
334.0/112.0
404.0/136.1
404.0/208.2
395.0/91.1
氨基酸有机麟类除草剂测定的质谱参数定最离子对
392.0/88.0
334.0/179.0
404.0/136.1
395.0/91.1
去簇电压DP
碰撞能量CE
碰撞室入口
电压CXP
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。SN/T3983—2014bzxz.net
碰撞室出口
电压EP
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在AP15000型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅2）
为提供参考，并不涉及商业目的·鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。7
SN/T3983—2014
草甘膦-FMOC
392.0/88.0
附录C
（资料性附录）
标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图14.19
时间/min
氨甲基膦酸FMOC
334.0/179.0
草铵腾-FMOC
404.0/136.1
时间/min
时间/min
草甘膦同位素内标-FMOC
395.0/91.1
时间/min
草甘膦FMOC
392.0/214.0
氨甲基膦酸
334.0/1120
卓铵胖FMOC
404.0/208.2
时间/min
时间/min
时间/min
氨基酸类有机膦除草剂标准溶液的多反应监测MRM）色谱图图c.1
SN/T3983—2014
6088212812
2608068.08892098018828002
0980088808
06888262-19828029202
28~722
828-002668122
668-22-2
08202252002
168278
998-802
2'V~02
626-198
282~0'02
0'08~-922
162~-872
818822
26~228
056-062
9019°62
396182828202
916-122
601~028
006~8629
9828029
096062
298262
+28~608
298-962
68288286
28~6'08
11~66016-078
201~88
06028886
298621-002
~-0°62
52~002
822002
T8~0*02
111828
0'18~0'92
068962
888668
201-~9°98
926828
2:06908
068~922
028-982
226-0'986'68-008
101--888
969881688
ay/hur
环国百?
国米王
舞由莺
SN/T3983-—2014
Foreword
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出口食品中基酸类有机磷除草剂残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of phosphonic and amino acid group-containing herbicidesresiduesinfoodstuffsforexport-LC-MS/MSmethod2014-11-19发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-05-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草SN/T3983—2014
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张建莹、胡晓苑、吴凤琪、张毅、罗耀、吴卫东、岳振峰。1范围
出口食品中氨基酸类有机磷除草剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法SN/T3983—2014
本标准规定了大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜等食品中草甘麟（glyphosate）及其代谢产物氨甲基膦酸（aminomethylphosphonicacid，AMPA）和草铵麟（glufosinate）等氨基酸类有机麟除草剂残留量的液相色谱质谱/质措测定方法。本标准适用于大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中草甘膦、氨甲基麟酸（AMPA）和草敏麟残留量的测定与确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
采用水提取试样中（大米、奶白化，与9-基甲基氯甲酸酯衍生化反应后
、橙子
残留的氨基酸类有
机麟除草剂类药物，经二氯甲烷净夜相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法定量夜提取试样中（小麦、大豆
玉米大蒜和
马铃薯）残留的氨基酸类有机麟采用水和二氯中烷混合溶液
蛋白，二氯甲烷净化，与9-荡基甲基氯甲酸酯衍生化反应后，液除草剂类药物，提取液经三氯乙酸沉淀定量。
相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法虾肉、鱼肉、蜂密和茶叶中的氨基酸类有机麟除草剂类药物残留采用水和二氯中烷混合溶液提取，提取液经阳离子交换柱（CAX)净化，与9-基甲基氟甲酸酯衍生化反应后，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，内标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，试验用水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1二氯甲烷：高效液相色谱纯。4.2丙酮：色谱纯。
中醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
三氯乙酸。
4.6盐酸。
硼酸钠（NaB,O,·10HO)。
乙酸铵：色谱纯。
中酸：色谱纯。
SN/T3983—2014
9-苏基甲基氯甲酸酯［9-fluorenylmethylchlorofornate（FMOC-CL）]：纯度不低丁99.0%，4.10
4℃保荐。
4.11氨水。
4.12CAX洗脱液：分别量取160mL水、2.7mL盐酸（4.6）和40ml甲醇（4.3），混匀，4.135%硼酸盐缓冲溶液（pH值9.0）：称取5g硼酸钠（4.7）用水溶解并定容至100mL，混勺4.14衍生化试剂：称取200mgFMOC-CL，用丙酮（4.2）溶解并定容至100mL，混勾。4.1520%三氯乙酸溶液：称取20g三氯乙酸（4.5）溶于适量水中，稀释定容至100mL。4.165mmoL乙酸铵水溶液（含0.1%中酸）：称取0.3854g乙酸铵溶解于适量的水中，加入1mL甲酸（4.9），用水定容至1C00mL，混勺。4.17乙晴（含0.1%甲酸）：吸取1mL甲酸于1000mL乙腈（4.4）中，混勾。4.18标准物质：草甘麟（glyphosate，CAS号：1071-83-6），纯度99.0%：氨甲基麟酸（AMPA，CAS号：1066519），纯度99.0%；草铵麟（glufosinate，CAS号：51276-47-2），纯度99.0%：草甘麟同位索内标（1，2-C\N5草甘麟）：100ug/mL（相关化学信息参见附录A中表A.1）。4.19标准储备液的配制：分别准确称取一定量的草甘麟、氨中基膦酸和草铵麟标准物质，用水溶解（另加2滴盐酸）后配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液，5℃以下避光保存，可使用6个月。4.20混合标准中间溶液的配制：准确移取适量体积的标准储备液（4.19）用水稀释成浓度为10.01mg/L的混合标准工作液。5以下避光保存，可使用3个月。4.21同位素内标标准工作溶液的配制：准确移取适量体积的标准母液（4.18），用水稀释成浓度为10.0mg/L的内标标准工作液。5℃以下避光保存，可使用3个月。4.22混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准中间溶液（4.20）和同位素内标工作溶液（4.21），用水配制成外标浓度为5.00μg/L、10.0μg/L、25.0ug/L、50.0g/1.和100ug/L的混合标准工作溶液（同位素内标物浓度均为20ug/1.)，当天配制。4.23阳离了交换固相萃取柱：AG50W-X8树脂，200目~400日，H+型，0.8cmX4cm（可采用美国Bio-Rad公司同等性能的CAX商品化小柱，或同等性能的其他小柱）。4.24微孔滤膜：0.45μm水相型。5仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2
固相萃取装置。
涡旋混匀器。
旋转蒸发仪
聚内烯离心管.50mL，15mL.具塞，带刻度。5.6
离心机：转速可达95001/min。
均质器。
6试样制备与保存
6.1一般要求
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，1）非商业性声明：此处列出色谱柱型号仪是为了提供参考，不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或规格的色谱柱。
-TiKAoNiiKAca
6.2大米、奶白菜、小麦、茶叶、大豆、葡萄、马铃薯、大蒜和橙子SN/T3983—2014
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃冷藏存放。
6.3玉米、虾和鱼
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500，充分搅碎混匀，试样装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。6.4蜂蜜
取未开封蜂密样品置于50℃60℃的水浴中温热，待样品全部溶化后搅拌均勾，取试样约500g均分为两份，装入洁净容器，密封，并标明标记。常温保存。7分析步骤
7.1试样提取
7.1.1大米、奶白菜、葡萄和橙子称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加人草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25mL水和10mL二氯甲烷，涡旋振荡提取10min，9500r/min离心5min。吸取上清液4mL到15mL离心管中，使用氨水（4.11）调节pH值至7，加入5mL.二氯甲烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min。吸取上清液1.0mL到15mL离心管中，待衍生化。7.1.2小麦、大豆、玉米、大蒜和马铃薯称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25ml水和10mL二氯甲烷，涡旋振荡提取10min，9500r/min离心5min。吸取上清液5mL到15mL离心管中，加人0.2mL20%三氯乙酸（4.15）溶液，涡旋振荡提取1min，于9500t/min离心5min。取上清液4mL到15mL离心管中，使用氨水调节pH值至7，加入5mL二氯中烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min。吸取上清液1.0ml到15mL离心管中，待衍生化。7.1.3虾肉、鱼肉、蜂蜜和茶叶
称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入草甘麟内标（4.21）50μL，涡旋振荡30s，再加人25mL水和10mL二氯甲烷，高速勾浆提取10min，于9500r/min离心5min。取上清液6mL到15mL离心管中，再加人4mL二氯甲烷，高速涡旋30s，9500r/min离心5min，取上清液4mL到15mL离心管中，使用盐酸调节pH值至2，待净化。7.2净化
吸取1.0mL提取液（7.1.3）于活化好的CAX固相萃取柱（4.23）中，以约1.5mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再吸取1.0mLCAX淋洗液淋洗，弃去流出液，用12mLCAX淋洗液洗脱，收集洗脱液于干净的50mL磨口瓶中，50℃减压旋蒸浓缩至近干，加人1.0mL5%硼酸盐缓冲溶液（4.13），涡旋溶解残渣，待衍生化。7.3衍生化
吸取300μL硼酸盐缓冲溶液（4.13）到净化液（7.2)中，再加人200μL衍生化试剂（4.14），涡旋振荡3
TKAONiKAca
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1min，室温静置衍生过夜。将衍生化后溶液涡旋振荡1min，收集水层过0.45um滤膜（4.24），供液相色谱-串联质谱测定。
液相色谱条件
液相色谱条件如下：
色谱柱：Ca色谱柱，150mmX2.1mm（内径），2.7μm，或相当者；柱温：30℃；
进样量：20L，
流动相、流速及梯度洗脱条件见表1流动相流速及梯度洗脱条件
质谱条件
质谱条件如下：
离子化模式：电喷雾离了源（ESI）、正离了扫描h)
质谱扫描方式：多反应监测(MRM)：分辨率：单位分辨率；
其他参考质谱条件参见附习
液相色谱-质谱/质谱测定
定性测定
表B.1。
mmol乙酸铵水溶液
（含0.1%甲酸）
（含0.1%甲酸）
在相同实验条件下进行处理，样品中待测物质的保留时间，与混合标准溶液的保留时间偏差在土2.5%之内：每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度迅行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的最大偏差/%
20~-50
>10~20
-TTKAONiiKAca
7.4.3.2定量测定
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在仪器最住工作条件下，对混合标准工作溶液进样，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，以色谱峰面积按内标法定量。氨基酸类有机膦除草剂标准物质的多反应监测（MRM)色谱图参见附录C中的图C.1。
空白实验
除不加入标准物质外，按上述测定步骤进行。8结果计算和表述
用液相色谱质谱/质谱数据处理软件或者按照式（1）计算试样中检测目标物残留量，计算结果应扣除空白值：
.XAXA-Xm
式中：
样品中氨基酸类除草剂残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；样液中氨基酸类有机麟除草剂标准工作溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；样液中内标物的浓度，单位为毫克每升（Mg/L）：样液中氨基酸类有机膦除草剂的峰面积；标准工作溶液中内标物的峰面积；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：标准工作溶液中内标物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；标准工作溶液中氩基酸类有机麟除草剂峰的面积：样液中内标物的峰面积
最终样液代表的试样质量，单位为克（）9
测定低限和回收率
测定低限
本方法对3种氨基酸类有机麟除草剂的测定低限均为0.0500mg/kg。2回收率
...(1)
在四个添加水平下，大米、小麦、大豆、玉米、奶白菜、葡萄、橙子、马铃薯、大蒜、茶叶、虾肉、鱼肉和蜂蜜中草甘麟、氨甲基膦酸和草铵麟的回收率数据参见附录D中表D.1。5
-TrKAoNiKAca
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化合物名称
氨甲基膦酸
草铵麟
英文名
Glyphosate
Glufosinate
附录A
（资料性附录）
氨基酸有机膦类除草剂的相关信息表A.1
CAS号
1071-83-6
1066-51-9
51276-47-2
氨基酸有机麟类除草剂的相关信息分子式
C,HN,O,P
相对分子质量
分子结构
HOPCHNHCH.COOH
HO-PCH,NH
HC-PCH,CHCHCOOH
-riKAoNikAca
参考质谱条件如下：
电喷雾电压：5500V；
附录B
（资料性附录）
参考质谱条件2
雾化气压力（GS1)：275.8kPa（40psi)；辅助气流速（GS2）：413.7kPa（60psi)；幕帘气流速（CUR）：172.4kPa（25psi)；离子源温度：500℃C：
碰撞气CAD：68.95kPa(10psi)：其他质谱参数见表B.1。
定性离子对
化合物名称
草甘膜-FMOC
氨甲基膦酸
草铵-FMOC
草廿麟同位素
内标-FMOC
392.0/88.0
392.0/214.0
334.0/179.0
334.0/112.0
404.0/136.1
404.0/208.2
395.0/91.1
氨基酸有机麟类除草剂测定的质谱参数定最离子对
392.0/88.0
334.0/179.0
404.0/136.1
395.0/91.1
去簇电压DP
碰撞能量CE
碰撞室入口
电压CXP
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。SN/T3983—2014bzxz.net
碰撞室出口
电压EP
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在AP15000型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅2）
为提供参考，并不涉及商业目的·鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。7
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草甘膦-FMOC
392.0/88.0
附录C
（资料性附录）
标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图14.19
时间/min
氨甲基膦酸FMOC
334.0/179.0
草铵腾-FMOC
404.0/136.1
时间/min
时间/min
草甘膦同位素内标-FMOC
395.0/91.1
时间/min
草甘膦FMOC
392.0/214.0
氨甲基膦酸
334.0/1120
卓铵胖FMOC
404.0/208.2
时间/min
时间/min
时间/min
氨基酸类有机膦除草剂标准溶液的多反应监测MRM）色谱图图c.1
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6088212812
2608068.08892098018828002
0980088808
06888262-19828029202
28~722
828-002668122
668-22-2
08202252002
168278
998-802
2'V~02
626-198
282~0'02
0'08~-922
162~-872
818822
26~228
056-062
9019°62
396182828202
916-122
601~028
006~8629
9828029
096062
298262
+28~608
298-962
68288286
28~6'08
11~66016-078
201~88
06028886
298621-002
~-0°62
52~002
822002
T8~0*02
111828
0'18~0'92
068962
888668
201-~9°98
926828
2:06908
068~922
028-982
226-0'986'68-008
101--888
969881688
ay/hur
环国百?
国米王
舞由莺
SN/T3983-—2014
Foreword
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