SN/T 4079-2014.Detection and identification of Cactodera Krall & Krall, 1978.
1范围
SN/T 4079规定了出人境植物检疫中仙人掌孢囊属线虫的检疫鉴定方法。
SN/T 4079适用于出人境植物检疫中植物、土壤及介质中仙人掌孢囊属线虫的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 24829毛刺线 虫属(传毒种类)检疫鉴定方法
SN/T1157进境植物苗木检疫规程
SN/T1158进境植物盆景检疫规程
SN/T 1723.1马铃薯白线虫检疫鉴定方法
SN/T 1723.2马铃薯 金线虫检疫鉴定方法
3方法原理
中文名:仙人掌孢囊属
学名:Cactodera Krall &. Krll, 1978
分类地位:线虫门(Nematoda)、侧尾腺纲( Secernentea)、垫刃目Tylenchida). 纽带亚目( Hoplo-laimina)、纽带总科( Hoplolaimoldea)、异皮科( Heteroderidae)、异皮亚科( Heteroderinae)。
仙人掌孢囊属目前有13个种。孢囊的形状，膜孔的直径，阴门突的有无，卵壳的表面特征,2龄幼虫体长以及尾和透明尾的长度等形态特征是该属分类鉴定的主要依据;其生物学特性、寄主范围、地理分布、危害症状、传播途径及分子生物学特征可作为辅助判定依据。仙人掌孢囊属线虫寄主范围、地理分布、危害症状和传播途径参见附录A.膜孔形状见附录B.

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4079—2014
仙人掌孢囊属线虫检疫鉴定方法Detection and identification of Cactodera Krall & Krall,19782014-11-19发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-05-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4079—2014
本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局，
本标准主要起草人：王金成、郭京泽、龙海、黄国明、罗加风、廖芳、刘跃庭、刘鹏1范围
仙人掌孢囊属线虫检疫鉴定方法本标准规定了出人境植物检疫中仙人掌孢囊属线虫的检疫鉴定方法。SN/T 4079—2014
本标准适用于出人境植物检疫中植物、土壤及介质中仙人掌孢囊属线虫的检疫鉴定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T24829毛刺线虫属（传毒种类）检瘦鉴定方法SN/T1157
进境植物节木检疫规程
进境植物盆景检疫规程
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SN/T 1723.1
SN/T1723.2
3方法原理
马铃薯白线虫检疫鉴定方法
马铃薯金线虫检疫鉴定方法
中文名：仙人掌孢囊属
学名：CactoderaKrall&Krall.1978分类地位：线虫门（Nematoda
a）侧尾腺纲（Seccr
laimina），纽带总科（Hoplolaimooidea?
仙人掌孢囊属目前有13个种
（Tylenchida）、纽带亚目（Hoplo-垫刃自
异皮科（Heteroc
deridae）异皮亚科（Heteroderinae）。塞的形状，膜孔的直径，阴门突的有无，卵壳的表面特征，2龄幼虫体长以及尾和透明尾的长度等形态特征是该属分类鉴定的主要依据：其生物学特性、寄主范围、地理分布、危害症状、传播途径及分子生物学特征可作为辅助判定依据。人掌孢囊属线虫寄主范围、地理分布、危害症状和传播途径参见附录A·膜孔形状见附录B4仪器、用具和试剂
4.1仪器和用具
光学显微镜，体视显微镜恒温箱，漂浮桶、冰箱、加热板，标准套筛（20月~500目）烧杯（2000mL）干燥器、毛笔、毛刷、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统等。4.2试剂
酒精、甘油、40%甲醛、乳酚油、丁香油、过氙化氢、中性树胶、硫酸镁、石蜡、rTaqDNA聚合酶、dNTP、引物等。
5现场检疫
注意观察苗木地上部分和根组织是否有发育不良的症状，以及是否带有土壤、介质。重点选取地上SN/T4079—2014
部分矮化、褪绿、地下根组织短小、稀蔬、分叉的苗木及根际土壤、介质：如无可凝症状则按要求随机取样。取样后立即置取样袋内密封，标记后及时送实验室检验。具体抽样比例按照SN/T1157和SN/T1158执行。6
实验室检验
6.1线虫分离
对于采集的根组织和土壤、介质，可通过贝尔曼漏斗法或浅盘法分离2龄幼虫，通过Fenwick-Oostenbrink漂浮法、简易漂浮法或直接过筛分离法分离孢囊。具体按照GB/T24829进行2龄幼虫分离。具体按照SN/T1723.1进行孢囊分离。6.2体式显微镜镜检
仙人掌孢囊属线虫2龄幼虫端虫形，较活跃，体长大于400pm，口针强壮，体环明显：孢囊柠檬形、近球形到球形，静止，体长大于400uⅡ，具有伸出的颈和末端突起6.3标本制作
若发现2龄幼虫需制作临时玻片或永久玻片：若发现孢囊，需制作肛阴板标本具体按照GB/T24829制作2龄幼虫临时玻片或水久玻片。具体按照SN/T1723.2制作孢囊肛阴板。6.4光学显微镜观察、摄影和测量应针对孢囊、2龄幼虫和卵的主要形态特征进行仔细观察并作显微摄影，重点包括孢囊的形状，膜孔的直径，阴门突的有无，卵壳的结构，2龄幼虫体长以及尾和透明尾的长度：需观察、测量获得分种检索表中的形态特征和形态测量值（分种检索表见附录C）。当虫量足够时，拍摄测量的抱囊或2龄幼虫的数自应在15个或条以上。7仙人掌孢囊属线虫的形态学鉴定7.1仙人掌孢囊属形态鉴定特征
成熟的虫和孢囊柠檬形到球形，具有末端突起，阴门位于末端，阴门裂小于30uⅡ，环膜孔，肛门无膜孔，无囊泡和阴门下桥，通常有阴门突，角质层有D层，2龄幼虫有4条刻线，侧尾腺口刻点状.唇区有唇盘和6个唇瓣。
7.2仙人掌孢囊属线虫分种形态特征仙人掌孢囊属分种形态图谱见附录D.形态描述见附录E。分子生物学检测
分子生物学检测流程参见附录F。2
-iKAoNiiKAca
9结果判定
SN/T4079-—2014
以孢囊、2龄幼虫和卵的形态作为仙人掌孢囊属线虫分种鉴定的主要依据。将观察、测量获得的待定线虫的形态特征和测计值调人该属检索表（见附录C），如果检索到某个种则可初步鉴定为该种。若初步鉴定的种符合该种线出对应的形态特征（见附录D和附录E），可判定检出该线虫。若只有2龄幼虫，则形态特征和分子牛物学特征均符合某个种时方可判定检出该线虫10
样本保存
样品保存
若鉴定为仙人掌孢囊属线虫，应将带虫样品摄影，置于4℃保存6个月以上，以备复验，谈判和仲裁。保存期满后，带虫样品需做销毁处理。10.2
线虫保存
若鉴定为仙人掌孢囊属线虫，应将剩余的线虫杀死、固定、制成永久玻片保存，也可用4%甲醛溶液固定后长期保存。标签中应写明样品编号、制作人、制作时间、寄主、产地、种名等信息。3
iKAoNiKAca
SN/T4079-—2014
附录A
（资料性附录）
仙人掌孢囊属线虫寄主范围、地理分布、危害症状和传播途径A.1仙人掌孢囊属线虫的寄主范围A.1.1仙人掌孢线虫Cactodera cacti（Filipjev&SchuurmansStekhoven，1941)Krall&Krall1978模式寄主：圆盘玉属种（Dis
主：仙人掌科（Cactaceae）：仙人山属（Cereus）、管花柱属（Cleistocactus种（Cereusspeciosus）：其他寄顶花球属（Coryphantha）、圆盘角杜属（Echinocereus）、县花属玉属（Discocactus）金琥属（Echinocartus）仙人球属（Echinobsis）、鹿）（Epiphyllum）、裸萼球属（Gymnocatyetum）、履县花属（Hatiora）、牡丹杜属（Heliocereus）、量天尺属（Hylocereus）、光山属（Leuchtenbergia）、银毛球属（Mammillaria）、花座球属（Melocactus）、南国玉属（Notocactus）Nopalea，Opuntia、刺翁柱属（reocereus
子孙球属（Rebutia）丝第属（Rhipsalis）、蟹爪兰属（Schlumbergera），蛇鞭柱属（Selenicereus）瘤王属（Thelocactus）；伞形科（Umbelliferae）：芹属（Apium）：大戟科（Euphorbiaceae）大戟属（Euphorhia）：登天科（
sulaceae）、桑科（Moraceae）夹竹epiadaceae）菊科（Asteraceac）、木犀科（Oleaceae)。
桃科（Apocynaceae）、萝科（AscleA.1.2异株苋孢囊线虫C.acnidae(Schuster&Brezina.1979）Wouts,1985模式寄主：异株苋属一种（Acnidaaltissima）：其他寄主：人豆、藜属（Amaranthussp.）、粗糙藜（Aretroflerus），直立募（PolygonumA.1.3苋菜孢囊线虫C.amaranthi（Stovanov，1972）Krall&Krall.1978riats）：其他寄主刺苋（Amaranthusspinosus）、反枝苋（A.Ret-模式寄主：野苋菜（Amaranthuswirroflerus）、苋属（Amaranthusspp.)、异株苋属一种（Acnidacuspidata）、苋科（Amaranthaceae）。燥砂孢囊线虫
A.1.4燥砂孢囊线虫C.eremicaBaldwin&Beln.1985模式寄主：密叶滨藜（Airiplercanfertifolia）A.1.5爱沙尼亚孢囊线虫C.es(onica（Kirjanova&Krall，1963)Krall&Krall，1978模式寄主：篇菩（Polygonumaviculare）。A.1.6埃文斯孢囊线虫C.evansiCiddelPrado&Rowe,2000模式寄主：康乃馨（Dianthuscaryophyllus）。A.1.7牛膝菊孢囊线虫C.galinsogaeTovarSoto,CiddelPrado,Nicol,Evans，SandovalIslas&MartinezGarza,2003
模式寄主：牛膝菊（Galinsogaparoiflora）：其他寄主：小麦、玉米、鬼针草属植物（Bidensadorata、B.ballsii，B.Serrulaia）、大友（Hordeumoulgare）、野燕麦（Avenafatua）。4
iKAoNiKAca
A.1.8米勒孢囊线虫C.milleriGraney&Bird，1990SN/T4079—2014
模式寄主：藜（Chenopodiumalhum）；其他寄主：觉色藜（C:amaranticolor）C.quinoaA.1.9根茎孢囊线虫C.radicaleChizhov，Udalova&Nasonova，2008寄主未知，但与下列植物相关：偃麦草（Elytrigiarepens）、欧著草（Achilleamillefolium）、斑点金丝桃（Hypericummaculatum）、法兰西菊（Leucanthemumulgare）、扇蓄（Polygonumaviculare）、草甸羊茅（Festucapratensis）、紫羊茅（F.rubra）、夏枯草（Prunellaoulgaris）、细弱剪股颖（Agrostistenuis），狭叶鼻花（Rhinanthusangustifolius），长毛箐姑草（Stellariamedia）广布野豌豆（Viciacracca）葡甸状车轴草（Trifoliumrepens）、草问荆（T.pratense）、苔属植物（Carersp.）A.1.10罗莎孢囊线虫C.rosaeCiddelPrado&Miranda.2008模式寄主：大麦（Hordeumuulgare）A.1.11盐生孢囊线虫C.salinaBaldwin，Mundo-Ocampo&McClure,1997模式寄主：海蓬子（SalicorniabigelouiA.1.12桑尼孢囊线虫C.thornei（Golden&Raski.1977)Mulvey模式寄主：生菜（MontiaperloliataA.1.13魏瑟孢囊线虫C.weissi（Steiner19492Krall&Krall197
模式寄主：宾夕法尼亚蓼（Polygonumpensylvar
Golden,1983
mm）：其他寄
主：善属的多数种（包括刻点薯P）eytum）、Rumer.coglomerutus钝时酸模（R.abtusifolius）。punctatum），养麦（FagopyrumesculerA.2仙人掌孢囊属线虫的地理分布A.2.1仙人掌孢囊线虫C.cacti
亚洲：亚美尼亚、中国、格鲁吉亚、印度、伊朗、以色列、日本、哈萨克斯坦、韩国、十库曼斯坦、乌兹别克斯坦、越南：欧洲：奥地利、比利时、捷克、丹麦、爱沙尼亚、德国、法国、幻牙利、意大利、立陶宛、马耳他、荷兰、波兰、葡萄牙、罗马尼亚、俄罗斯、斯洛文尼亚、西班牙、瑞典、瑞十、英国、乌克兰、南斯拉夫，非洲：阿尔及利亚：南美和加勒比地区：阿根廷、巴西、古巴、哥伦比亚北美：加拿大、美国、墨西哥；大洋洲：澳大利亚、新西兰。
A.2.2异株孢囊线虫C.acnidae
美国内布拉斯加州东部。
A.2.3苋菜孢囊线虫C.amaranthi北美和加勒比地区：美国、古巴、墨西哥。A.2.4燥砂孢囊线虫C.eremica
美国犹他州沙漠。
-TKANiKAca
SN/T4079—2014
A.2.5爱沙尼亚孢囊线虫C.estonica亚洲：中国、土耳其；欧洲：爱沙尼亚、波兰、瑞典、荷兰、乌克兰、南斯拉夫：北美：美国。A.2.6埃文斯孢囊线虫C.evansi
墨西哥。
A.2.7牛膝菊孢囊线虫C.galinsogac墨西哥。
3米勒孢囊线虫C.milleri
美国。
根茎孢囊线虫C.radicale
俄罗斯。
罗莎孢囊线虫C.rosae
墨西哥。
盐生孢囊线虫C.salina
墨西哥。
桑尼孢囊线虫C.thornei
亚洲：中国，北美：美国。
魏瑟孢囊线虫C.weissi
北美：加拿大、美国。
3仙人掌孢囊属线虫的危害症状
仙人掌孢囊属线虫是一类根部固着性内寄生线虫。该类线虫侵染可造成寄主植物地上部分生长缓慢、矮化、萎為、叶片褪绿等症状，地下根组织表现为短小、稀疏、分叉等症状，但奇主植物根部不会形成根瘤症状。
A.4仙人掌孢囊属线虫的传播途径仙人掌孢囊属线虫主要通过苗木根组织、土壤和介质进行远距离传播。6
-TKAONKAca
说明：
附录B
（规范性附录）
孢囊线虫膜孔类型图解
三叶草孢囊线虫Heteroderatrifoli（半膜孔)：草地孢囊线虫[H.pratensis（双膜孔)]；抱囊线虫一种[H.sp.（双膜孔)]：刻点孢囊线虫[Punctoderapunctata（圆膜孔）]；根茎孢囊线虫[Cactoderaradicale（圆膜孔）]马铃薯金线虫［Globoderarostochiensis（圆膜孔）SN/T4079—2014
注1：率膜孔：孢囊末端的膜状角质结构，由阴门分成明显的两个部分，每一部分呈半圆形，阴门裂较长。注2：双膜孔，孢囊末端的膜状角质结构，由阴门分成明显的两个部分，每一部分呈卵圆形、近圆形或圆形，阴门裂较短
注3：圆膜孔：孢囊末端的膜状角质结构，圆形或近圆形，包围阴门。图B.1孢囊线虫膜孔
SN/T4079—2014
附录C
（规范性附录）
仙人掌孢囊属线虫分种检索表
1，抱囊长度通常是宽的2倍或者2倍以上，L/W平均值=2.3孢囊长度通常不到宽的2倍，L/W平均值=1.1~1.8卵壳有刻点·
卵壳光滑
3.2龄幼虫的平均门针长度26mm
2龄幼虫的平均口针长度26
C.estonica
2龄幼虫尾长—48μm-~64μm，透明区长度。23μm28um.膜孔直径-23um~41um.....C.thormei2龄幼虫尾长-37gm~48m，透明区长度-17um2龄幼虫平均体长411μm，平均尾长≥42u5.
2龄幼虫平均体长411um，平均尾长膜孔直径=23um~35um，阴门裂
膜孔直径=7um~-22um.阴门裂14.3am膜孔直径25m
膜孔直径≥25um
2龄幼虫尾透明区长度=4um
2龄幼虫尾透明区长度=16um-~23um9.2龄幼虫平均尾长40um
2龄幼虫平均尾长40pm
102龄幼虫体长=340um~~
2龄幼虫体长一410热m~
112龄幼虫针基部球前缘凹陷
2龄幼虫口针基部球前缘凸起.DGO-2.5m12:有阴门突2龄幼虫尾长=43
无阴门突，2龄幼虫尾长=46um
24pm.膜孔直径
-14μm~25μm....C.eremica
2龄幼虫门针=21jum~27umC.cact8um.2龄幼虫口针=21um~23μm
... C.milleri
C.galinsogae
3um.膜孔直径=25μm~38um...
C.amaranthi
25um.膜孔直径-20.4m~27.6m.
.... C.salina
C.acnidae
C.rweissi
C.radicale
D.1仙人掌孢囊线虫C.cacti
见图D.1和图D.2。
说明：
2龄幼虫的前体部：
2龄幼虫的尾；
雄虫的头
雄虫的尾：
孢囊。
注：引自Mulketat.,1977
附录D
（规范性附录）
仙人掌孢衰属线虫分种形态图谱图D.1仙人掌孢囊线虫（C.cacti）SN/T4079—2014
SN/T4079—2014
说明：
阴门锥（标尺=10um）。
注：引自V.N.Chizhov.俄罗斯。D.2异株苋孢囊线虫C.acnidue
见图D.3。
说明：
根上的自色雌虫；
2龄幼虫的唇区；
2龄幼虫的尾
图D2仙人堂掌孢囊线虫（C.cacti）注：引自Schuster&Brezina.1979。图D.3异株苋孢囊线虫（C.acnidae）10
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