SN/T 4258-2015
基本信息
标准号： SN/T 4258-2015
中文名称：出口食品中水溶性维生素的测定方法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4258-2015.Determination of water-soluble vitamins in foods for export.
1范围
SN/T 4258规定了食品中维生素B1(硫胺素)、B2(核黄素)、B3(烟酸、烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)、叶酸和B12(钴胺素)的液相色谱-质谱/质谱测定方法和维生素Vc(L抗坏血酸)的高效液相色谱测定方法。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸、烟酰胺)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和叶酸用盐酸溶液三氯乙酸溶液或温水(等电点法)提取,过膜后,用液相色谱质谱/质谱仪检测,内标法定量。
4试剂和材料
除非另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的--级水。
4.1甲 醇:HPLC级。
4.2甲 酸:HPLC级。
4.3乙酸铵:HPLC级。
4.4 氨水。
4.5盐酸。
4.6三氯乙 酸。
4.7氢 氧化钠。
4.8 BHT(二丁 基羟基甲苯):纯度大于等于99.3%,-18℃冷冻储藏。
4.9 0.1%甲 酸溶液(体积分数):量取0.1 mL甲酸(4.2),用水定容至100 mL。
1范围
SN/T 4258规定了食品中维生素B1(硫胺素)、B2(核黄素)、B3(烟酸、烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)、叶酸和B12(钴胺素)的液相色谱-质谱/质谱测定方法和维生素Vc(L抗坏血酸)的高效液相色谱测定方法。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸、烟酰胺)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和叶酸用盐酸溶液三氯乙酸溶液或温水(等电点法)提取,过膜后,用液相色谱质谱/质谱仪检测,内标法定量。
4试剂和材料
除非另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的--级水。
4.1甲 醇:HPLC级。
4.2甲 酸:HPLC级。
4.3乙酸铵:HPLC级。
4.4 氨水。
4.5盐酸。
4.6三氯乙 酸。
4.7氢 氧化钠。
4.8 BHT(二丁 基羟基甲苯):纯度大于等于99.3%,-18℃冷冻储藏。
4.9 0.1%甲 酸溶液(体积分数):量取0.1 mL甲酸(4.2),用水定容至100 mL。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4258—2015
出口食品中水溶性维生素的测定方法Determination of water-soluble vitamins in foods for export2015-05-26发布
中华人民共和国
利是查真务
国家质量监督检验检疫总局
2016-01-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4258—2015
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河北出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：艾连峰、段永生、王敬、郭春海、马育松、宋歌、曲栗。1
1范围
出口食品中水溶性维生素的测定方法SN/T4258—2015
本标准规定了食品中维生素B（硫胺素）、B（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、B（泛酸）B,（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）、叶酸和Bl（钴胺素）的液相色谱-质谱/质谱测定方法和维生素Vc（L-抗坏血酸）的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于果汁、奶粉、含乳饮料、大米、饼干和果冻中维生素B（硫胺素）、B（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、B（泛酸）、B（吡哆醇，吡哆醛、吡哆胺）、叶酸和Bs（钻胺素）的测定和确证；适用于果汁、奶粉、含乳饮料、大米、果泥和果冻申维生素Vc(L-抗坏血酸）的测定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。2分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
第一部分
3原理
食品中水溶性维生素B,（硫胺素）B2（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、Bs（泛酸）、B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺和叶酸的测定试样中的维生素B（硫胺素）、维生素B核黄素）、维生素B（烟酸、烟酰胺）、维生素Bs（泛酸）、维生素B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）和叶酸用盐酸溶液、三氯乙酸溶液或温水（等电点法）提取，过膜后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，内标法定量4试剂和材料
除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：HPLC级。
4.2甲酸：HPLC级。
乙酸铵：HPLC级。
氨水。
盐酸。
三氯乙酸。
氢氧化钠。
BHT（二丁基羟基甲苯）：纯度大于等于99.3%，一18℃冷冻储藏。4.8
4.90.1%甲酸溶液（体积分数）：量取0.1mL中酸（4.2）用水定容至100mL。10mmol/L乙酸铵（pH=6.3）溶液：0.39g乙酸铵（4.3）加水溶解至500mL，混匀，用0.1%甲酸4.10
溶液（4.9）调节至pH—6.3。
SN/T4258—2015
0.01mo1/L盐酸溶液：量取900uL的需酸（4.5），用水定容至1000mL，混匀。4.11
4.125mol/L盐酸溶液：量取45mL的盐酸（4.5），用水定容至100mL，混匀。4.135mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠（4.7）溶于100mL水中，混勺。4.1440g/L三氯乙酸溶液：称取40g三氯乙酸（4.6）溶于1000mL水中.混勺。4.151%氨水溶液（体积分数）：量取1mL的氮水（4.4），用水定容至1C0mL，混勾。1mg/ml.BHT溶液：称取10mgBHT（4.8），溶于10ml甲醇（4.1）中，混勾。4.16
4.17维生素标准物质：维生素B（硫胺素）维生素B（核黄素）、维生素B（烟酸、烟酰胺）、维生素B（泛酸）、维生素B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）、叶酸：内标物质：L4烟酸、D4-烟酰胺、甲氨蝶呤和乙酰苯胺的纯度均为人于等于95%，避光冷藏。各化合物基本信息参见附录八表A.1。4.18标准储备液：精确称取适量标准品（4.17），配制成1mg/ml（维生素B，的浓度为0.1mg/mL）的标准储备液。叶酸用1%氨水溶液（4.15）溶解：其他维牛素用0.01mol/L盐酸溶液（4.11）溶解。储备液4℃避光保存，叶酸储备液保存期为4d.其他保持期为6d。4.19标准工作液：根据需要用0.01mo1/L盐酸溶液（4.11）将标准储备液（4.18）逐级稀释，配制成一系标准工作液·现用现配，
4.20内标储备液：准确称取适量的D4-烟酸、D4-烟酰胺、甲氨蝶呤和乙酰苯胺，分别用甲醇（4.1)配制成500ug/mL的标准储备液，4C以下避光保存4.21内标工作液：根据需要移取适量内标储备液（4.20），用中醇（4.1）配制成50g/mL的标准工作液，现用现配
4.22微孔滤膜：0.22m.水系。
5仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)，5.2
分析天平：感量为0.01g和0.1mg。组织捣碎机，
离心机：转速不小于40001/min，均质器：转速不小于15000r/min：涡旋混合器。
超声波清洗器。
聚丙烯具塞离心管：5CmL。
棕色容量瓶：10mL,25ml.和100mL。试样制备与保存
制样要求
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化6.2试样的制备
取同一批次3个完整独立包装样品（固体样品不少于200g，液体样品不少于200mL），固体或半固体样品粉碎混勺，液体样品混合均勾·分成两份，分别装人洁净容器内，一份作为试样供检测用，另一份作为留样保存并做好标识。
-TKAoNiKAca
7测定方法
7.1样品的提取
7.1.1果汁饮料
SN/T4258—2015
称取试样2g（精确至0.01g）于10mL棕色容量瓶中，加人40pL的内标工作液（4.21）和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），用10mL0.01mol/L盐酸溶液（4.11）定容至刻度.混勾，用0.22μm微孔滤膜过滤后·供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.2大米、果冻、饼干
称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入40μL的内标工作液（4.21）和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），加人10mI.0.01mol/L盐酸溶液（4.11），涡旋混匀1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22um微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.3含乳饮料
称取试样2g（精确至0.01g）加入40μL的内标工作液（4.21)和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），准确加人10mL40g/L三氯乙酸溶液（4.14）.涡旋混勾1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.4奶粉
称取试样2g（精确至0.01g），加人40uL的内标工作液（4.21）和100μuL1mg/mLBHT溶液（4.16），准确加入20mL45℃~50℃水，涡旋混匀1min，超声15min。待溶液温度降至室温后，用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90土0.5.放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70土0.5，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定
上述提取步骤，均须避光进行。7.2测定
7.2.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：UPLCHSST，50mmX2.1mm（内径）.1.7μm.或相当者；a)g
柱温：30℃：
进样量：5uL；
d）流动相组成及梯度洗脱条件见表1。表1流动相洗脱程序
10mmol/L乙酸铵（pH=6.3）
mL/min
-TTTKAONKAca
SN/T4258—2015
质谱参考条件
质谱参考条件如下：bZxz.net
离子源：电喷雾离子源：
扫描方式：正离子扫描；
表1（续）
10mmol/LZ酸铵（pH=6.3)
检测方式：多反应监测（MRM）：d)
其他质谱参考条件参见附录B中表B7.2.3定性分析
在上述条件下测定样品和标准浴液流速
待测物色增峰保留时间与标准溶液对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，最大允许偏过表2起
规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物。9种招
过绿B中表B.1
维生素的参考保留时间参见附
相对离子丰度/%
允许相对偏差/%
7.2.4定量测定
性确证时相对离
子丰度的最大允许偏差
>10~20
在上述条件下，对样液及标准T作溶液（参考线性浓度范围为：0.05~10.0ug/mL，叶酸为0.05~100ng/mL进样，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内：内标法定量。标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录C图C.1。7.3空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8
结果计算
按式(1)计算各种维生素的含量，计算结果需扣除空白值：X
cXV1000
-TTKAONiKAca
式中：
试样中被测物含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；SN/T4258—2015
从标准曲线上得到的样液中待测物的含量，单位为微克每毫升（ug/mL)：样液最终定容体积，单位为毫升（rnL)：试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。
测定低限、精密度、回收率
测定低限
本方法中各维生素在不同基质的测定低限见表3表3不同基质中各维生素的测定低限标准物质
硫胺素
吡哆醒
吡哆醇
烟酰胺
核黄素
吡哆胺
回收率
含乳饮料
单位：mg/kg
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、饼干和奶粉基质中不同添加水平的添加向收率范围参见附录F表F.1。
第二部分
10原理
食品中水溶性维生素B12（钴胺素）的测定试样中的维生素B12（钻胺素）用盐酸溶液、三氯乙酸溶液或温水（等电点调节PH）提取，用HLB固相萃取柱进行富集并去除部分杂质后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。11
试剂和材料
除非另有规定外.所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5
iKAoMiKAca
SN/T4258—2015
11.1乙：HPLC级。
11.27%乙：量取70ml.乙晴（11.1），用水稀释定容至1000mL。11.325%乙腈：量取250mL乙（11.1），用水稀释定容至1000mL11.4维生素B（VitaminBz或Cyanocobalarnin)标准物质：纯度大于等于99%，冷藏于冰箱中避光保存。参见附录A表A.1。
11.5标准储备液：精确称取适量标准品（11.4），用0.01mol/L盐酸溶液（4.11）配制成1mg/mL的标准储备液。4℃避光保存，有效期为6d。11.6标准工作液：根据需要用0.01mo1/L盐酸溶液（4.11)将标准储备液（11.5)逐级稀释，配制成一系列标准工作液，现用现配。
11.7HLB固相萃取柱：60mg，3ml或相当者。使用前分别用5ml甲醇和5mL水预淋洗并保持柱体湿润。
11.8其他同第4章。
仪器和设备
固相萃取装置。
其他同第5章。
试样制备与保存
同第6章。
14测定方法
14.1样品的提取
果汁饮料
称取试样10g（精确至0.01
大米、果冻、饼干
g）于25mL棕色容量瓶中，用水定容至25mL，待净化。称取试样2g（精确至0.0lg）于50mL离心管中，加入10mL0.01mol/L盐酸溶液（4.11），涡旋混勺1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液置于25mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，待净化。
14.1.3含乳饮料
称取试样10g（精确至0.01g）于50ml离心管中，加入5mL40g/l三氯乙酸盐酸溶液（4.14），渴旋混匀1min，超声15min，以4000r/min离心10min取上清液置于25mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，待净化。
14.1.4奶粉
称取试样2g（精确至0.01g），加入20mL45℃~50℃水，涡旋混勾1min，超声15min待溶液6
-TTKAONKAca
SN/T4258—2015
温度降至室温后，用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90士0.5，放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70士0.5，以4000r/min离心10min，收集上清液，待净化，14.2净化
将14.1获得的待净化液通过固相萃取柱（11.7），用5mL.7%乙睛溶液（11.1)将干扰物质从固相萃取柱上淋洗下来，最后用1.0mL25%乙睛液（11.2）将维生素Bz洗脱，收集全部洗脱液，过0.22um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。上述提取步骤，均须避光进行。14.3测定
14.3.1仪器参考条件
同7.2.1和7.2.2。
定性分析
在上述条件下测定样品和标准溶液，样品中待测物色谱峰保留时间与标准溶液对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，最大允许偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。在上述仪器条件下，维生素B2的参考保留时间约为7.56min。14.3.3定量测定
在上述条件下，对样液及标准工作溶液（参考线性浓度范用为：0.05~100ng/mL）进样，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，外标法定量。标准物质的多反应监测（MRM）色谱图参见附录D图D.1。
14.4空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。15结果计算
试样中维生素B12的含量利用数据处理系统计算或按式(2)计算：X,-CXVx1000
式中：
试样中被测物含量，单位为微克每千克（ug/kg）；从标准曲线上得到的样液中待测物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）：样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。
·（2)
SN/T4258—2015
16测定低限、精密度、回收率
16.1测定低限
本方法中维生素B在果汁和含乳饮料的测定低限为0.5ug/kg，饼干和果冻的测定低限为1ug/kg大米的测定低限为2μg/kg，奶粉的测定低限为5ug/kg16.2
2回收率
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、饼干和奶粉基质中不同添加水平的添加回收率范围参见附录F表F.2。
第三部分食品中水溶性维生素Vc（L-抗坏血酸）的测定17原理
试样中的维生素Vc(I-抗坏血酸）用偏磷酸溶液或温水（等电点调节pH)提取后用液相色谱紫外检测器检测·外标法定量
18试剂和材料
18.1偏磷酸。
18.2磷酸二氢钾。
18.3磷酸。
18.43%偏磷酸溶液：称取30g偏磷酸（18.1），用水溶解并稀释至1000mL。18.50.05mol/L磷酸二氢钾（pH=3）：称取磷酸二氢钾（18.2）固体6.80g，用水溶解并稀释至1000ml，用磷酸（18.3）调节pH为3用0.22um微孔滤膜过滤。18.6维生素Vc(Ascorbicacid）标准物质纯度大于等于99%，冷藏于冰箱中避光保存。详见附录A表A.1.
18.7标准储备液：精确称取适量标准品（18.6），用3%偏磷酸溶液（18.1）配制成1mg/mlL的标准储备液。4℃避光保存，现用现配
18.8标准工作液：根据需要用3%偏磷酸溶液（18.4）将标准储备液（18.7)逐级稀释，配制成一系列标准工作液，现用现配，
18.9其他同第4章。
仪器和设备
19.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。19.2其他同第5章。
20试样制备与保存
同第6章。
测定方法
样品提取
21.1.1果汁饮料
SN/T4258-—2015
称取试样2g（精确至0.01g）于50mL棕色容量瓶中，用3%偏磷酸溶液（18.4）定容至刻度.混匀用0.22um微孔滤膜过滤，所得滤液待进样测定。超出线性范围时用3%偏磷酸溶液（18.4）稀释到一定倍数后，用0.22um微孔滤膜过滤，供液相色谱仪测定。21.1.2大米、果冻、果泥、含乳饮料称取试样5g（精确至0.01g），用3%偏磷酸溶液（18.4）定容至100mL，超声15min且超声过程中需要加人冰块控制温度在10℃~20℃之间，4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。
21.1.3奶粉
称取试样2g（精确至0.0lg），加入20ml45℃50℃水，涡旋混匀1min，超声15min且超声过程中需要加人冰块控制温度在10℃~20℃之间。后用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90土0.5，放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70±0.5.以4000r/min离心10min，取上清液用0.22m微孔滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。上述提取步骤，均应避光进行。21.2测定
21.2.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：TechMateCi-ST柱，250mmX4.6m（内径），5μm，或相当者；波长：266nm
进样量：10ml
柱温：25℃
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾（pH=3）。21.2.2
色谱测定
按照上述检测条件测定样液和标准工作溶液，以被测物峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。若其响应值超过线性范围，可调整定容体积使之满足定量测定线性范围的要求。在上述色谱条件下，待测物的参考保留时问约为3.42min。标准溶液的液相色谱图参见附录E图E.1。9
SN/T4258—2015
空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。结果计算
同第8章。
23方法的测定低限和回收率
23.1测定低限
果汁、奶粉、含乳饮料、大米和果冻中维生素C的测定低限均为100mg/kg：果泥中维生素C的测定低限为20mg/kg。
2回收率
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、果泥和奶粉基质中不同添加水平的添加回收率范用参见附录F表F.3。
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出口食品中水溶性维生素的测定方法Determination of water-soluble vitamins in foods for export2015-05-26发布
中华人民共和国
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本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4258—2015
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本标准主要起草人：艾连峰、段永生、王敬、郭春海、马育松、宋歌、曲栗。1
1范围
出口食品中水溶性维生素的测定方法SN/T4258—2015
本标准规定了食品中维生素B（硫胺素）、B（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、B（泛酸）B,（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）、叶酸和Bl（钴胺素）的液相色谱-质谱/质谱测定方法和维生素Vc（L-抗坏血酸）的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于果汁、奶粉、含乳饮料、大米、饼干和果冻中维生素B（硫胺素）、B（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、B（泛酸）、B（吡哆醇，吡哆醛、吡哆胺）、叶酸和Bs（钻胺素）的测定和确证；适用于果汁、奶粉、含乳饮料、大米、果泥和果冻申维生素Vc(L-抗坏血酸）的测定2规范性引用文件
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第一部分
3原理
食品中水溶性维生素B,（硫胺素）B2（核黄素）、B（烟酸、烟酰胺）、Bs（泛酸）、B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺和叶酸的测定试样中的维生素B（硫胺素）、维生素B核黄素）、维生素B（烟酸、烟酰胺）、维生素Bs（泛酸）、维生素B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）和叶酸用盐酸溶液、三氯乙酸溶液或温水（等电点法）提取，过膜后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，内标法定量4试剂和材料
除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：HPLC级。
4.2甲酸：HPLC级。
乙酸铵：HPLC级。
氨水。
盐酸。
三氯乙酸。
氢氧化钠。
BHT（二丁基羟基甲苯）：纯度大于等于99.3%，一18℃冷冻储藏。4.8
4.90.1%甲酸溶液（体积分数）：量取0.1mL中酸（4.2）用水定容至100mL。10mmol/L乙酸铵（pH=6.3）溶液：0.39g乙酸铵（4.3）加水溶解至500mL，混匀，用0.1%甲酸4.10
溶液（4.9）调节至pH—6.3。
SN/T4258—2015
0.01mo1/L盐酸溶液：量取900uL的需酸（4.5），用水定容至1000mL，混匀。4.11
4.125mol/L盐酸溶液：量取45mL的盐酸（4.5），用水定容至100mL，混匀。4.135mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠（4.7）溶于100mL水中，混勺。4.1440g/L三氯乙酸溶液：称取40g三氯乙酸（4.6）溶于1000mL水中.混勺。4.151%氨水溶液（体积分数）：量取1mL的氮水（4.4），用水定容至1C0mL，混勾。1mg/ml.BHT溶液：称取10mgBHT（4.8），溶于10ml甲醇（4.1）中，混勾。4.16
4.17维生素标准物质：维生素B（硫胺素）维生素B（核黄素）、维生素B（烟酸、烟酰胺）、维生素B（泛酸）、维生素B（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）、叶酸：内标物质：L4烟酸、D4-烟酰胺、甲氨蝶呤和乙酰苯胺的纯度均为人于等于95%，避光冷藏。各化合物基本信息参见附录八表A.1。4.18标准储备液：精确称取适量标准品（4.17），配制成1mg/ml（维生素B，的浓度为0.1mg/mL）的标准储备液。叶酸用1%氨水溶液（4.15）溶解：其他维牛素用0.01mol/L盐酸溶液（4.11）溶解。储备液4℃避光保存，叶酸储备液保存期为4d.其他保持期为6d。4.19标准工作液：根据需要用0.01mo1/L盐酸溶液（4.11）将标准储备液（4.18）逐级稀释，配制成一系标准工作液·现用现配，
4.20内标储备液：准确称取适量的D4-烟酸、D4-烟酰胺、甲氨蝶呤和乙酰苯胺，分别用甲醇（4.1)配制成500ug/mL的标准储备液，4C以下避光保存4.21内标工作液：根据需要移取适量内标储备液（4.20），用中醇（4.1）配制成50g/mL的标准工作液，现用现配
4.22微孔滤膜：0.22m.水系。
5仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)，5.2
分析天平：感量为0.01g和0.1mg。组织捣碎机，
离心机：转速不小于40001/min，均质器：转速不小于15000r/min：涡旋混合器。
超声波清洗器。
聚丙烯具塞离心管：5CmL。
棕色容量瓶：10mL,25ml.和100mL。试样制备与保存
制样要求
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化6.2试样的制备
取同一批次3个完整独立包装样品（固体样品不少于200g，液体样品不少于200mL），固体或半固体样品粉碎混勺，液体样品混合均勾·分成两份，分别装人洁净容器内，一份作为试样供检测用，另一份作为留样保存并做好标识。
-TKAoNiKAca
7测定方法
7.1样品的提取
7.1.1果汁饮料
SN/T4258—2015
称取试样2g（精确至0.01g）于10mL棕色容量瓶中，加人40pL的内标工作液（4.21）和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），用10mL0.01mol/L盐酸溶液（4.11）定容至刻度.混勾，用0.22μm微孔滤膜过滤后·供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.2大米、果冻、饼干
称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入40μL的内标工作液（4.21）和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），加人10mI.0.01mol/L盐酸溶液（4.11），涡旋混匀1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22um微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.3含乳饮料
称取试样2g（精确至0.01g）加入40μL的内标工作液（4.21)和100μL1mg/mLBHT溶液（4.16），准确加人10mL40g/L三氯乙酸溶液（4.14）.涡旋混勾1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.1.4奶粉
称取试样2g（精确至0.01g），加人40uL的内标工作液（4.21）和100μuL1mg/mLBHT溶液（4.16），准确加入20mL45℃~50℃水，涡旋混匀1min，超声15min。待溶液温度降至室温后，用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90土0.5.放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70土0.5，以4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定
上述提取步骤，均须避光进行。7.2测定
7.2.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：UPLCHSST，50mmX2.1mm（内径）.1.7μm.或相当者；a)g
柱温：30℃：
进样量：5uL；
d）流动相组成及梯度洗脱条件见表1。表1流动相洗脱程序
10mmol/L乙酸铵（pH=6.3）
mL/min
-TTTKAONKAca
SN/T4258—2015
质谱参考条件
质谱参考条件如下：bZxz.net
离子源：电喷雾离子源：
扫描方式：正离子扫描；
表1（续）
10mmol/LZ酸铵（pH=6.3)
检测方式：多反应监测（MRM）：d)
其他质谱参考条件参见附录B中表B7.2.3定性分析
在上述条件下测定样品和标准浴液流速
待测物色增峰保留时间与标准溶液对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，最大允许偏过表2起
规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物。9种招
过绿B中表B.1
维生素的参考保留时间参见附
相对离子丰度/%
允许相对偏差/%
7.2.4定量测定
性确证时相对离
子丰度的最大允许偏差
>10~20
在上述条件下，对样液及标准T作溶液（参考线性浓度范围为：0.05~10.0ug/mL，叶酸为0.05~100ng/mL进样，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内：内标法定量。标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录C图C.1。7.3空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8
结果计算
按式(1)计算各种维生素的含量，计算结果需扣除空白值：X
cXV1000
-TTKAONiKAca
式中：
试样中被测物含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；SN/T4258—2015
从标准曲线上得到的样液中待测物的含量，单位为微克每毫升（ug/mL)：样液最终定容体积，单位为毫升（rnL)：试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。
测定低限、精密度、回收率
测定低限
本方法中各维生素在不同基质的测定低限见表3表3不同基质中各维生素的测定低限标准物质
硫胺素
吡哆醒
吡哆醇
烟酰胺
核黄素
吡哆胺
回收率
含乳饮料
单位：mg/kg
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、饼干和奶粉基质中不同添加水平的添加向收率范围参见附录F表F.1。
第二部分
10原理
食品中水溶性维生素B12（钴胺素）的测定试样中的维生素B12（钻胺素）用盐酸溶液、三氯乙酸溶液或温水（等电点调节PH）提取，用HLB固相萃取柱进行富集并去除部分杂质后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。11
试剂和材料
除非另有规定外.所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5
iKAoMiKAca
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11.1乙：HPLC级。
11.27%乙：量取70ml.乙晴（11.1），用水稀释定容至1000mL。11.325%乙腈：量取250mL乙（11.1），用水稀释定容至1000mL11.4维生素B（VitaminBz或Cyanocobalarnin)标准物质：纯度大于等于99%，冷藏于冰箱中避光保存。参见附录A表A.1。
11.5标准储备液：精确称取适量标准品（11.4），用0.01mol/L盐酸溶液（4.11）配制成1mg/mL的标准储备液。4℃避光保存，有效期为6d。11.6标准工作液：根据需要用0.01mo1/L盐酸溶液（4.11)将标准储备液（11.5)逐级稀释，配制成一系列标准工作液，现用现配。
11.7HLB固相萃取柱：60mg，3ml或相当者。使用前分别用5ml甲醇和5mL水预淋洗并保持柱体湿润。
11.8其他同第4章。
仪器和设备
固相萃取装置。
其他同第5章。
试样制备与保存
同第6章。
14测定方法
14.1样品的提取
果汁饮料
称取试样10g（精确至0.01
大米、果冻、饼干
g）于25mL棕色容量瓶中，用水定容至25mL，待净化。称取试样2g（精确至0.0lg）于50mL离心管中，加入10mL0.01mol/L盐酸溶液（4.11），涡旋混勺1min，超声15min，以4000r/min离心10min。取上清液置于25mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，待净化。
14.1.3含乳饮料
称取试样10g（精确至0.01g）于50ml离心管中，加入5mL40g/l三氯乙酸盐酸溶液（4.14），渴旋混匀1min，超声15min，以4000r/min离心10min取上清液置于25mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，待净化。
14.1.4奶粉
称取试样2g（精确至0.01g），加入20mL45℃~50℃水，涡旋混勾1min，超声15min待溶液6
-TTKAONKAca
SN/T4258—2015
温度降至室温后，用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90士0.5，放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70士0.5，以4000r/min离心10min，收集上清液，待净化，14.2净化
将14.1获得的待净化液通过固相萃取柱（11.7），用5mL.7%乙睛溶液（11.1)将干扰物质从固相萃取柱上淋洗下来，最后用1.0mL25%乙睛液（11.2）将维生素Bz洗脱，收集全部洗脱液，过0.22um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。上述提取步骤，均须避光进行。14.3测定
14.3.1仪器参考条件
同7.2.1和7.2.2。
定性分析
在上述条件下测定样品和标准溶液，样品中待测物色谱峰保留时间与标准溶液对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品中组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，最大允许偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。在上述仪器条件下，维生素B2的参考保留时间约为7.56min。14.3.3定量测定
在上述条件下，对样液及标准工作溶液（参考线性浓度范用为：0.05~100ng/mL）进样，样液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，外标法定量。标准物质的多反应监测（MRM）色谱图参见附录D图D.1。
14.4空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。15结果计算
试样中维生素B12的含量利用数据处理系统计算或按式(2)计算：X,-CXVx1000
式中：
试样中被测物含量，单位为微克每千克（ug/kg）；从标准曲线上得到的样液中待测物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）：样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。
·（2)
SN/T4258—2015
16测定低限、精密度、回收率
16.1测定低限
本方法中维生素B在果汁和含乳饮料的测定低限为0.5ug/kg，饼干和果冻的测定低限为1ug/kg大米的测定低限为2μg/kg，奶粉的测定低限为5ug/kg16.2
2回收率
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、饼干和奶粉基质中不同添加水平的添加回收率范围参见附录F表F.2。
第三部分食品中水溶性维生素Vc（L-抗坏血酸）的测定17原理
试样中的维生素Vc(I-抗坏血酸）用偏磷酸溶液或温水（等电点调节pH)提取后用液相色谱紫外检测器检测·外标法定量
18试剂和材料
18.1偏磷酸。
18.2磷酸二氢钾。
18.3磷酸。
18.43%偏磷酸溶液：称取30g偏磷酸（18.1），用水溶解并稀释至1000mL。18.50.05mol/L磷酸二氢钾（pH=3）：称取磷酸二氢钾（18.2）固体6.80g，用水溶解并稀释至1000ml，用磷酸（18.3）调节pH为3用0.22um微孔滤膜过滤。18.6维生素Vc(Ascorbicacid）标准物质纯度大于等于99%，冷藏于冰箱中避光保存。详见附录A表A.1.
18.7标准储备液：精确称取适量标准品（18.6），用3%偏磷酸溶液（18.1）配制成1mg/mlL的标准储备液。4℃避光保存，现用现配
18.8标准工作液：根据需要用3%偏磷酸溶液（18.4）将标准储备液（18.7)逐级稀释，配制成一系列标准工作液，现用现配，
18.9其他同第4章。
仪器和设备
19.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。19.2其他同第5章。
20试样制备与保存
同第6章。
测定方法
样品提取
21.1.1果汁饮料
SN/T4258-—2015
称取试样2g（精确至0.01g）于50mL棕色容量瓶中，用3%偏磷酸溶液（18.4）定容至刻度.混匀用0.22um微孔滤膜过滤，所得滤液待进样测定。超出线性范围时用3%偏磷酸溶液（18.4）稀释到一定倍数后，用0.22um微孔滤膜过滤，供液相色谱仪测定。21.1.2大米、果冻、果泥、含乳饮料称取试样5g（精确至0.01g），用3%偏磷酸溶液（18.4）定容至100mL，超声15min且超声过程中需要加人冰块控制温度在10℃~20℃之间，4000r/min离心10min。取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。
21.1.3奶粉
称取试样2g（精确至0.0lg），加入20ml45℃50℃水，涡旋混匀1min，超声15min且超声过程中需要加人冰块控制温度在10℃~20℃之间。后用5mol/L盐酸溶液（4.12）调节pH至1.90土0.5，放置2min，再用5mol/L氢氧化钠溶液（4.13）调节pH至4.70±0.5.以4000r/min离心10min，取上清液用0.22m微孔滤膜过滤后，供液相色谱仪测定。上述提取步骤，均应避光进行。21.2测定
21.2.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：TechMateCi-ST柱，250mmX4.6m（内径），5μm，或相当者；波长：266nm
进样量：10ml
柱温：25℃
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾（pH=3）。21.2.2
色谱测定
按照上述检测条件测定样液和标准工作溶液，以被测物峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。若其响应值超过线性范围，可调整定容体积使之满足定量测定线性范围的要求。在上述色谱条件下，待测物的参考保留时问约为3.42min。标准溶液的液相色谱图参见附录E图E.1。9
SN/T4258—2015
空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。结果计算
同第8章。
23方法的测定低限和回收率
23.1测定低限
果汁、奶粉、含乳饮料、大米和果冻中维生素C的测定低限均为100mg/kg：果泥中维生素C的测定低限为20mg/kg。
2回收率
本方法分别在大米、果汁、含乳饮料、果冻、果泥和奶粉基质中不同添加水平的添加回收率范用参见附录F表F.3。
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