SN/T 4629-2016.Preparation、preservation and management specification for nucleic acid of
quarantine pest voucher specimens.
1范围
SN/T 4629规定了检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理的要求。
SN/T 4629适用于检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T1193基因检验实验室技术要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1凭证标本voucher specimens
具有完备的采集、鉴定信息(采集人、日期、地点、生境、鉴定人、种名等),用于物种复核、引证、溯源并永久保存的标本。
3.2核酸nucleic acid
核酸分子分为两类:脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),是细胞内携带遗传信息的物质。
4核酸的处理
4.1常用设备
针对不同来源的材料和样品采用不同的处理方法,常用设备参见附录A。
4.2核酸来源
对于昆虫、真菌、线虫、细菌、病毒、杂草,核酸来自于有害生物个体或纯培养,病毒及植原体及难养细菌来自于染病植物材料。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4629—2016
检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范
Preparation,preservation and management specification for nucleic acid ofquarantinepestvoucherspecimens2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：宋云、陈岩、吕继洲、赵文军、吴绍强、朱水芳。SN/T4629—2016
1范围
检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范
本标准规定了检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理的要求。本标准适用于检疫性有害生物凭证标本核酸保存与管理2规范性引用文件
SN/T4629—2016
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1193基因检验实验室技术要求3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
凭证标本voucherspecimens
具有完备的采集、鉴定信息（采集人、日期、地点、生境、鉴定人种名等），用于物种复核、引证、溯源并永久保存的标本。
nucleicacid
核酸分子分为两类：脱氧核糖核酸（DNA)）和核糖核酸（RNA），是细胞内携带遗传信息的物质。4核酸的处理
常用设备
针对不同来源的材料和样品采用不同的处理方法，常用设备参见附录A。4.2
核酸来源
对于昆虫、真菌、线虫、细菌、病毒、杂草，核酸米自于有害生物个体或纯培养，病毒及植原体及难养细菌来自于染病植物材料。
4.3核酸提取
4.3.1核酸的释放
机械法
包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解、液氮研磨和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎。
SN/T4629—2016
4.3.1.2化学法
在一定的pH环境下，加入表面活性剂或强离子剂CTAB、SDS等）使细胞裂解，蛋白质和多糖沉淀，核酸从细胞内释放出来。向缓冲液中加人一些金属离子整合剂抑制核酸酶的活性，保护核酸不降解。
4.3.1.3酶法
通过加人溶菌酶或蛋白酶（如蛋白酶K)使细胞破裂，核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离。
4.3.2核酸的分离纯化
4.3.2.1酚/氯仿抽提法
细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加人等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1)混合液，混匀后离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相，核酸则被留于上层水相。在含核酸的水相中加人醋酸钾或醋酸钠，形成核酸盐，核酸盐可被一些有机溶剂沉淀，离心得到的核酸可以用70%乙醇洗涤以除去多余的盐分，即可获得一定纯度的核酸。4.3.2.2固相抽提法
因分离和纯化同步进行，并且有商品试剂盒供应而被广泛应用于核酸的纯化。固相抽提方法的固相支持物有硅胶、玻璃颗粒、硅藻土、磁性颗粒、阴离子交换载体等，在一定的离子环境下，核酸可被选择性地吸附到固相支持物而与其他生物分子分离。4.4核酸的质量检测
完整性检测：通过凝胶电泳检测DNA为明亮单一的条带：RNA为28s（23s）、18s（16s）、5.8s(5s)三条清晰的rRNA条带，且28s与18s条带亮度比值约2：1。纯度检测：DNA：OD260/OD280在1.7~1.9之间；RNA：OD260/OD230在1.9~2.1之间。浓度检测：核酸浓度不少于100ng/μL，体积不少于100μL。符合上述要求的核酸可用于进一步保存，否则需重新提取核酸提取过程中采取防止交叉污染措施，并符合SN/T1193的要求，4.5保存
4.5.1保存管
使用在一80℃条件下专用的冻存管保存。RNA要求离心管DEPC处理过，4.5.2标签
利用透明的可在一80℃不脱落的标签，标签内容：样品编号（SampleID），采集编号（CollectionNunber），科中文名（ChineseNameoffamily），科拉丁名（LatinNameofFamily），属中文名（ChineseNameofGenus），种中文名（ChineseNameofSpecies），保存时间，含量，鉴定人，单位，联系方式。4.5.3保存盒
统一使用100管/盒的纸盒保存，保存盒分为昆虫、真菌、细菌、病毒、线虫及杂草几类，在盒子侧面贴标签、标签包含种类名称。
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4.5.4保存条件
SN/T4629—2016
每个样品4种保存方式：一20℃保存；一80℃保存；液氮保存；冻干粉状态保存；每种保存方式的样品不少于10管。冰箱带锁并具有断电或温度异常报警功能。5核酸的管理
5.1设备管理
冰箱应有专人管理，建立使用台账，使用记录。用于保存核酸样品的冰箱等设备需要定期进行计量校验；每天检查冰箱温度并做登记记录。5.2
2核酸质量核查
标本核酸需要定期检测与更新，每隔一年一次，随机抽取检测保存的各类有害生物的核酸样品，按1%比例抽取，按照不同类型有害生物的标准化流程监控，电泳检测，检测结果符合上述保存要求，放回原处，并记录；检测结果不符合要求的，按以上的规范，重新提取、测定与保存样品。5.3结果记录与资料保存
完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。检测需有最终的实验数据、电泳结果照片等。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。
6复核
由国家质量监督检验检疫总局指定的单位或人员负责。主要检查实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验。3
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SN/T4629—2016
附录A
（资料性附录）
核酸保存常用仪器设备
研钵、超声破碎仪、匀浆机、离心管、指型管、水浴锅、可调移液器、可调移液器头、涡旋振荡器、超净工作台、电子天平、分光光度计、PCR仪、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪、凝胶成像系统、灭菌锅、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、低温冰箱、纯水机等。4
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参考文献
SN/T4629—2016
[IJKIEFERE,HELLERW,ERNSTD.Asimpleandefficientprotocol for isolation offunctional RNA from plant tissues rich in secondary metabolites JJ.Plant Molecular Biology Reporter,2000,18：33-39.
[2]SALZMANRA,FUJITA T,ZHU-SALZMANK.An improvedRNA isolation methodforplant tissues containing high levels of phenolic compounds or carbohydrates LJJ.Plant Molecular Biology Reporter,1999,1711-17.
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SN/T4629-2016
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检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范
SN/T46292016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
网址spe.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
印张0.75字数12千字
2018年1月第一版 2018年1月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32341
定价16.00元
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