SN/T 4675.14-2016.Determination of natamycin in wine for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4675.14规定了出口葡萄酒中纳他霉素的液相色谱串联质谱测定方法。
SN/T 4675.14适用于葡萄酒中纳他霉素的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品经稀释,高速离心后,用液相色谱质谱/质谱仪测定并确证,外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1乙腈:色谱纯。
4.2甲酸。
4.3 5%乙 腈-0.1%甲酸溶液:准确量取50 mL乙腈、1 mL甲酸,用水定容至1 L,混匀后备用。
4.4 0.1%甲酸-水溶液:准确量取1 ml甲酸,用水定容至1 L,混匀后备用。
4.5纳他霉 素标准品(CAS编号7681-93-8, 分子量:665.73):纯度≥89.9%。
4.6纳他霉素标准储备溶液:准确称取适量纳他霉素标准品,用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。
4.7纳他霉素标准中间溶液:准确吸取适量的纳他霉素标准储备溶液(4.6),用5%乙睛-0.1%甲酸溶液(4.3)配制成浓度为10μg/mL的标准中间溶液。
4.8纳他霉素标准工作溶液:准确吸取适量的纳他霉索标准中间溶液(4.7),用5%乙腈-0.1%甲酸溶液(4.3)逐级稀释纳他霉素标准中间溶液,配制成0.2μg/L~100ug/L系列标准工作溶液。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4675.14—2016
出口葡萄酒中纳他霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of natamycin in wine for export-LC-MS/MS method2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SNV/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分：SN/T 4675.1
SN/T4675.2
SN/T 4675.3
SN/T4675.4
SN/T 4675.5
SN/T4675.6
SN/T4675.7
SN/T 4675.8
SN/T 4675.9
SN/T 4675.10
SN/T 4675.11
SN/T 4675.12
SN/T4675.13
SN/T4675.14
SN/T4675.15
SN/T4675.16
SN/T4675.17
SN/T4675.18
SN/T4675.19
SN/T4675.20
SN/T4675.21
SN/T4675.22
SN/T4675.23
SN/T4675.24
SN/T4675.25
SN/T4675.26
SN/T4675.27
SN/T4675.28
SN/T4675.29
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1范围
出口葡萄酒中纳他霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.14—2016
SN/T4675的本部分规定了出口葡萄酒中纳他霉素的液相色谱串联质谱测定方法。本部分适用于葡萄酒中纳他霉素的测定2规范性引用文件bZxz.net
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品经稀释，高速离心后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定并确证，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛：色谱纯。
4.2甲酸。
4.35%乙睛-0.1%甲酸溶液：准确量取50mLz腊，1mL甲酸，用水定容至1L，混匀后备用。4.40.1%甲酸-水溶液：准确量取1mL甲酸，用水定容至1L，混勾后备用4.5纳他霉素标准品（CAS编号7681-93-8，分子量：665.73）：纯度≥89.9%。4.6纳他霉素标准储备溶液：准确称取适量纳他霉素标准品，用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。
4.7纳他霉素标准中间溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准储备溶液（4.6），用5%乙睛-0.1%甲酸溶液（4.3）配制成浓度为10μg/mL的标准中间溶液。4.8纳他霉素标准工作溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准中间溶液（4.7），用5%乙睛-0.1%甲酸溶液（4.3)逐级稀释纳他霉素标准中间溶液，配制成0.2μg/L～100μg/l.系列标准工作溶液。5仪器和设备
5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：三重四极杆申联质谱，配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平感量0.01mg。
5.3涡旋混合器。
5.4离心机：配2mL角转子，转速不低于15000r/min。5.5
具塞离心管：50mL、2ml。
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6测定步骤
样品处理
检测前，将葡萄酒样品充分摇匀后，起泡酒需事先脱气。将100ml.试样倒人带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气·直至儿气泡逸出。准确量取5mL试样于50mL棕色容量瓶中，用5%乙晴-0.1%甲酸溶液（4.3）定容至刻度，混匀后，将溶液移人2mL离心管中，15000r/min离心5min后，取上清液，待液相色谱-质谱/质谱测定。6.2测定
6.2.1液相色谱参考条件
色谱柱：C柱，100mm×2.1mm（内径），粒径1.8um，或相当者；流动相：A（乙腈）,B(0.1%甲酸水溶液）。梯度洗脱条件见表1；b)
表1液相色谱洗脱条件
时间/min
进样量：10μL；
柱温：30℃，
流速：0.3mL/min。
液相色谱-质谱/质谱参考条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）；b)
扫描方式：正离子扫描：
监测方式：多反应监测（MRM)；c
其它质谱参考条件参见附录A中表A.1和表A.2。d
液相色谱-质谱/质谱测定
按照确定的液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液（4.8），响应值均应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积按外标法定量。在上述仪器条件下，纳他霉素的参考保留时间为3.0min。液相色谱-串联质谱多反应监测色谱图参见附录B图B.1。6.2.4定性确证
按照上述条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，允许偏差小于土2.5%，定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超2
-TTrKAONTKAca
过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.2.5定量测定
>20~-50
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>10～20
本部分中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为保证所测样品中纳他霉素的响应值均在仪器的线性范围内，当样品液中纳他霉素含量超出线性范围时，应将样品液稀释一定倍数，使样品液中纳他霉素响应值在仪器的线性范围内。6.2.6空白实验
除不加试样外，均接上述测定步骤进行。7结果计算和表述
试样中那他霉素含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得，计算结果应扣除空白值，并保留三位有效数字：
式中：
X=cXVX1000
V2X1000
试样中纳他霉素含量，单位为毫克每升（mg/L）：从标准工作曲线得到的试样溶液中纳他霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）：样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V.
样品溶液所代表试样的体积，单位为毫升（mL）。3方法的定量限和回收率
定量限（LOQ）
本方法定量限为0.005mg/L
8.2回收率
在三个添加浓度水平下，不同基质中纳他霉素添加回收率为82.4%～115.8%.添加水平及回收率数据参见附录C。
KAONTKAca
SN/T4675.14—2016
离子源参数见表A.1。
仪器参数
毛细管电压Capillary
雾化气压力Neublizer
干燥气温度GasTemp
干燥气流速GasFlow
鞘气温度Sheathgas Temp
鞘气流速SheathgasFlow
多反应监测条件见表A,2
化合物
纳他霉素
母离子（m/z）
注：*离子用于定量。
附录A1
（资料性附录）
质谱参考条件
表A.1离子源参数
表A.2多反应监测条件
子离子（m/）
裂解电/V
参数值
psi（氨气）
350℃
6.0L/min（氮气）
350℃
10.0L/min（氮气）
碰撞能量/eV
1）非商业性声明：附录表A所列参数是在Aglient6460质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。rKoNiKca
附录B
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法纳他需素标准品色谱图液相色谱-质谱/质谱法纳他霉素标准品色谱图见表B.1。X102
SN/T4675.14—2016
纳他素MRMESI+
666.3/503.3
666.3/485.2
纳他霉素标准物质（0.01mg/L）的多反应监测（MRM)色谱图6.5#/min
rikAoNiKAca
SN/T4675.14—2016
附录C
（资料性附录）
不同基质中纳他霉素不同添加水平回收率数据不同基质中纳他霉素不同添加水平回收率数据见表C.1。表C.1
样品基质
红葡萄酒
白葡葡酒
起泡葡萄酒
不同基质中纳他霉素不同添加水平回收率数据添加水平/（mg/1.）
回收率范围/%
82.4--101.4
86.4-~98.4
87.4-~104.5
91.4~-110.0
82.4~-101.0
82.1~-96.8
86.7--101.6
90.5-99.6
精密度/%
KAONIKAca
SN/T4675.14-2016
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
出口葡萄酒中纳他霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.14-2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880X1230
2017年11月第一版
印张0.75
字数16千字
2017年11月第一次印刷
印数1—500
书号：155066-2-32427
定价16.00元
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