SN/T 4675.10-2016
基本信息
标准号： SN/T 4675.10-2016
中文名称：出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 葡萄酒 曲霉 毒素 测定 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4675.10-2016.Determination of ochratoxin A in wine for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4675.10规定了葡萄酒中赭曲霉毒素A的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4675.10适用于葡萄酒中赭曲霉毒索A的检测。
2规范性引用文件.
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品采用缓冲溶液稀释后,经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化,最后由液相色谱-串联质谱仪检测,外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/6682规定的一级水。
4.1甲醇: 色谱纯。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3乙酸: 色谱纯。
4.4碳酸氢钠。
4.5 氯化钠。
4.6氢氧化钠。
4.7乙 酸铵。
4.8乙 腈溶液(50%):移取乙腈(4.2)100 mL,用水稀释至200 mL。
4.9乙酸溶液(0.1%):移取乙酸(4.3)1.0 mL,用水稀释至1 L。
4.10缓冲溶液:准确称取 10 g碳酸氢钠(4.4)和75 g氯化钠(4.5),用水溶解并定容至500 mL。
4.11氢氧化钠溶液(2%):准 确称取20 g氢氧化钠(4.6),用水溶解并定容至1 L。
4.12乙酸铵溶液(0.2 mol/L):称取15.4 g乙酸铵固体(4.7),用水溶解并定容至1 L。
1范围
SN/T 4675.10规定了葡萄酒中赭曲霉毒素A的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4675.10适用于葡萄酒中赭曲霉毒索A的检测。
2规范性引用文件.
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品采用缓冲溶液稀释后,经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化,最后由液相色谱-串联质谱仪检测,外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/6682规定的一级水。
4.1甲醇: 色谱纯。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3乙酸: 色谱纯。
4.4碳酸氢钠。
4.5 氯化钠。
4.6氢氧化钠。
4.7乙 酸铵。
4.8乙 腈溶液(50%):移取乙腈(4.2)100 mL,用水稀释至200 mL。
4.9乙酸溶液(0.1%):移取乙酸(4.3)1.0 mL,用水稀释至1 L。
4.10缓冲溶液:准确称取 10 g碳酸氢钠(4.4)和75 g氯化钠(4.5),用水溶解并定容至500 mL。
4.11氢氧化钠溶液(2%):准 确称取20 g氢氧化钠(4.6),用水溶解并定容至1 L。
4.12乙酸铵溶液(0.2 mol/L):称取15.4 g乙酸铵固体(4.7),用水溶解并定容至1 L。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4675.102016
出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of ochratoxin A in wine for export-LC-MS/MS method2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SN/T4675《出口葡葡酒品质分析方法》共分为30个部分：SN/T4675.1
SN/T4675.2
SN/T4675.3
SN/T4675.4
SN/T4675.5
SN/T 4675.6
SN/T 4675.7
SN/T4675.8
SN/T4675.9
SN/T 4675.10
SN/T4675.11
SN/T 4675.12
SN/T4675.13
SN/T 4675.14
SN/T4675.15
SN/T4675.16
SN/T 4675.17
SN/T 4675.18
SN/T4675.19
SN/T4675.20
SN/T4675.21
SN/T4675.22
SN/T4675.23
SN/T4675.24
SN/T4675.25
SN/T4675.26
SN/T 4675.27
SN/T4675.28bzxz.net
SN/T4675.29
SN/T4675.30
出口葡萄酒中甘油的测定酶法；出口葡萄酒中2，3-丁二醇的测定气相色谱法；出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定：出口葡萄酒中乳酸的测定酶法：出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法；出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定；出口葡药酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法；出口葡萄酒中5-羟甲基糖醛的测定液相色谱法：出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法；SN/T4675.10—2016
出口葡萄酒中赌曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法；出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法；出口葡萄酒中2.4,6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法；
出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法；出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法；出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱质谱/质谱法；出口葡葡酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法；出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定；出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法：；出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法；出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法；出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法：出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法；出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（Lab）色空间法；出口葡萄酒浊度的测定散射光法；出口葡葡酒碱性灰分的测定；
出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数；出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法：出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。本部分为SN/T4675的第10部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：江侃晨、陈章庭、刘晓茂、杨振宁、倪昕路、李响、宋青、秦宇雯、陈婷、王诚、郭德华、刘青、李志勇。
1范围
出口葡萄酒中赭曲需毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.10—2016
SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中赭曲霉毒素A的液相色谱质谱/质谱检测方法。本部分适用于葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品采用缓冲溶液稀释后，经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化，最后由液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水
甲醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
乙酸：色谱纯。
碳酸氢钠。
氯化钠。
氢氧化钠。
乙酸铵。
乙睛溶液（50%）：移取乙睛（4.2)100ml，用水稀释至200mL。乙酸溶液（0.1%）：移取乙酸（4.3）1.0mL，用水稀释至1L。缓冲溶液：准确称取10g碳酸氢钠（4.4）和75g氯化钠（4.5），用水溶解并定容至500ml.。4.11
氢氧化钠溶液（2%）：准确称取20g氢氧化钠（4.6），用水溶解并定容至1L。乙酸铵溶液（0.2mol/L）：称取15.4g乙酸铵固体（4.7）.用水溶解并定容至1L乙酸甲醇溶液（2%）：移取乙酸（4.3)2.0mL，用甲醇（4.1）稀释至100mL。4.14标准物质：赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTACAS编号：303-47-9）：10.01mg/L，存储条件及有效期参照标准物质证书。
4.15标准中间液（200μg/L）：移取适量体积的赭曲霉毒素A（4.14）于10mL容量瓶中，用乙睛（4.8）定容至刻度线。该溶液在4℃下避光保存，有效期一个月。4.16标准工作溶液：分别准确移取适量标准中间液（4.15）于10ml容量瓶中，并用乙睛溶液（4.9）稀1
SN/T4675.10—2016
释并定容至刻度。标准工作系列浓度分别为1ug/L、5ug/L、10g/L、15μg/L和20μg/L。标准工作溶液现配现用：
4.17免疫亲和柱：填料体积（0.3mL.）。4.18滤膜：0.22μm，有机系。
5仪器和设备
超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。天平：感量0.1g.0.1mg。
pH计。
漩涡振荡器。
离心机：8000/min。
固相萃取装置。
固相萃取柱空柱管连接头。
固相萃取柱空柱管（15ml）。
氮吹仪。
超声波清洗器。
水平振荡器
6分析步骤
6.1试样制备
起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒入带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气，直至无气体逸出。6.2提取
准确吸取10mL试样于洁净的50mlL带刻度塑料离心管巾，加人2.5mL缓冲溶液（4.10）于漩涡混合器（5.1）上混勾，通过氢氧化钠溶液（4.11）调节试样pH至6.9~7.1，待用。如有沉淀则用离心机以8000r/min离心5min。
6.3净化
试样（6.1)和免疫亲和柱（4.17）置丁20℃以上房间，放置室温。将免疫亲和层析柱（4.17)通过连接头（5.7)连接于空柱管（5.8）之下，再将免疫亲和层析柱（4.17)置于固相芯取装置（5.6）上，转移提取后的试样（6.2）到空柱管（5.8）中，使试样（6.2）以不超过2mL./min的流速缓慢通过免疫亲和层析柱，待试样完全流尽后，用20mL乙酸铵溶液（4.12）分两次淋洗免疫亲和柱，待淋洗液流尽后，将柱内残留液体吹于，弃去全部流出液。用乙酸甲醇溶液（4.13）1mI洗脱，收集洗脱液于玻璃刻度试管中，重复洗脱操作一次，如洗脱液体积超过2mL，可氮吹后用乙酸甲醇溶液（4.13）定容至2.0mL，过0.22um滤膜，供高效液相色谱测定。6.4测定条件
6.4.1液相色谱条件
色谱柱：Cis色谱柱：2.1mmX50mm，粒径1.9um，或相当者：a）
流动相：A，甲醇：B.0.1%乙酸水溶液（4.8）：洗脱程序见表1：h）
KAoMrKAca
时间/min
流速：200μL/min；
柱温：30℃；
进样量：5μL。
质谱条件
液相色谱的梯度洗脱程序
A.甲醇/%
离子化模式：电喷雾电离（ESI-)负离子模式：质谱扫描方式：多反应监测（MRM)：其他参考质谱条件参见附录A。
5液相色谱-质谱/质谱测定
定性测试
SN/T4675.10—2016
B.0.1%乙酸水溶液/%
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。
2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差表2
相对离子丰度
允许的相对偏差
2定量测试
>20%~50%
>10%~20%
依次测定标准系列工作液，绘制峰面积对标准溶液浓度的标准工作曲线，用标准曲线对样品进行定量，样品溶液中赭曲霉毒素A的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围的稀释后再进样。在上述色谱条件和质谱条件下，赭曲需毒素A的参考保留时间及标准品多反应监测（MRM)色谱图参见图B,1。
空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7结果的计算和表述
7.1采用外标法定量，按式（1)计算被测物的含量：ikAoNiKAca
SN/T4675.10—2016
式中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每升（μg/L)：.......
从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（ug/L）；V
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；V
最终样液所代表的试样体积，单位为毫升（mL）。7.2结果需扣除空白值。
定量限和回收率
定量限
本方法中赭曲霉毒素A的定量限为0.20ug/L。回收率与精密度
不同基质中赭曲霉毒素A在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据见表3。表3不同基质在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据表样品名称
干红葡萄酒
半甜桃红葡萄酒
甜白葡萄酒
添加水平（ug/L）
回收率范周/%
89.7100.7
87.9--93.1
86.7-94.4
87.8~-103.4
86.3-95.3
103.8-117.4
88.7~-102.1
90.7~111.7
93.7~95.8
....(1)
精密度/%
KAONiKAca
质谱参考参数：
（资料性附录）
质谱参考参数1
ESI负离子模式，多反应监测（MRM)；电喷雾电压：-3500V；
离子源温度：450℃；
雾化气压力：40Arb：
辅助气压力：15Arb：
碰撞气压力：1.5Arb；
监测离子对、套管透镜、碰撞电压见表A，表A.1
精曲霉毒素A
SN/T4675.10—2016
赭曲霉毒素A保留时间、定性定量离子对及套管透镜、碰撞能量保留时间
定性离子对
402>211
定量离子对
402>358
套管透镜
碰撞能量
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在ThermoScicntific的TSQQuantumnUltra型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业日的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。5
TTKAONhIKAca
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附录B
（资料性附录）
曲需毒素A标准物质的多反应监测（MRM）色谱图赭曲霉毒素A标准物质的多反应监测（MRM)色谱图见图B.1~图B.3RT:4.15
AA:35779
SN:1148
010.290731602218103538698976662367801
m/z402>m/z211色谱图（1μg/L）RT:414
AA:104032
SN:925
AA:1501
010.56113
ET:5:65
476SN14
m/z402>m/z358色谱图（1μg/L）图B.2
TYKAONrKAca
定性离子相对丰度图
SN/T4675.10—2016
SN/T4675.10-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.10—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张0.75字数18千字2017年12月第一版2017年12月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32360
定价16.00元
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出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of ochratoxin A in wine for export-LC-MS/MS method2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SN/T4675《出口葡葡酒品质分析方法》共分为30个部分：SN/T4675.1
SN/T4675.2
SN/T4675.3
SN/T4675.4
SN/T4675.5
SN/T 4675.6
SN/T 4675.7
SN/T4675.8
SN/T4675.9
SN/T 4675.10
SN/T4675.11
SN/T 4675.12
SN/T4675.13
SN/T 4675.14
SN/T4675.15
SN/T4675.16
SN/T 4675.17
SN/T 4675.18
SN/T4675.19
SN/T4675.20
SN/T4675.21
SN/T4675.22
SN/T4675.23
SN/T4675.24
SN/T4675.25
SN/T4675.26
SN/T 4675.27
SN/T4675.28bzxz.net
SN/T4675.29
SN/T4675.30
出口葡萄酒中甘油的测定酶法；出口葡萄酒中2，3-丁二醇的测定气相色谱法；出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定：出口葡萄酒中乳酸的测定酶法：出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法；出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定；出口葡药酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法；出口葡萄酒中5-羟甲基糖醛的测定液相色谱法：出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法；SN/T4675.10—2016
出口葡萄酒中赌曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法；出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法；出口葡萄酒中2.4,6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法；
出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法；出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法；出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱质谱/质谱法；出口葡葡酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法；出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定；出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法：；出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法；出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法；出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法：出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法；出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（Lab）色空间法；出口葡萄酒浊度的测定散射光法；出口葡葡酒碱性灰分的测定；
出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数；出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法：出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。本部分为SN/T4675的第10部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：江侃晨、陈章庭、刘晓茂、杨振宁、倪昕路、李响、宋青、秦宇雯、陈婷、王诚、郭德华、刘青、李志勇。
1范围
出口葡萄酒中赭曲需毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.10—2016
SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中赭曲霉毒素A的液相色谱质谱/质谱检测方法。本部分适用于葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品采用缓冲溶液稀释后，经氢氧化钠溶液调节试样至中性，再经免疫亲和柱净化，最后由液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水
甲醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
乙酸：色谱纯。
碳酸氢钠。
氯化钠。
氢氧化钠。
乙酸铵。
乙睛溶液（50%）：移取乙睛（4.2)100ml，用水稀释至200mL。乙酸溶液（0.1%）：移取乙酸（4.3）1.0mL，用水稀释至1L。缓冲溶液：准确称取10g碳酸氢钠（4.4）和75g氯化钠（4.5），用水溶解并定容至500ml.。4.11
氢氧化钠溶液（2%）：准确称取20g氢氧化钠（4.6），用水溶解并定容至1L。乙酸铵溶液（0.2mol/L）：称取15.4g乙酸铵固体（4.7）.用水溶解并定容至1L乙酸甲醇溶液（2%）：移取乙酸（4.3)2.0mL，用甲醇（4.1）稀释至100mL。4.14标准物质：赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTACAS编号：303-47-9）：10.01mg/L，存储条件及有效期参照标准物质证书。
4.15标准中间液（200μg/L）：移取适量体积的赭曲霉毒素A（4.14）于10mL容量瓶中，用乙睛（4.8）定容至刻度线。该溶液在4℃下避光保存，有效期一个月。4.16标准工作溶液：分别准确移取适量标准中间液（4.15）于10ml容量瓶中，并用乙睛溶液（4.9）稀1
SN/T4675.10—2016
释并定容至刻度。标准工作系列浓度分别为1ug/L、5ug/L、10g/L、15μg/L和20μg/L。标准工作溶液现配现用：
4.17免疫亲和柱：填料体积（0.3mL.）。4.18滤膜：0.22μm，有机系。
5仪器和设备
超高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。天平：感量0.1g.0.1mg。
pH计。
漩涡振荡器。
离心机：8000/min。
固相萃取装置。
固相萃取柱空柱管连接头。
固相萃取柱空柱管（15ml）。
氮吹仪。
超声波清洗器。
水平振荡器
6分析步骤
6.1试样制备
起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒入带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气，直至无气体逸出。6.2提取
准确吸取10mL试样于洁净的50mlL带刻度塑料离心管巾，加人2.5mL缓冲溶液（4.10）于漩涡混合器（5.1）上混勾，通过氢氧化钠溶液（4.11）调节试样pH至6.9~7.1，待用。如有沉淀则用离心机以8000r/min离心5min。
6.3净化
试样（6.1)和免疫亲和柱（4.17）置丁20℃以上房间，放置室温。将免疫亲和层析柱（4.17)通过连接头（5.7)连接于空柱管（5.8）之下，再将免疫亲和层析柱（4.17)置于固相芯取装置（5.6）上，转移提取后的试样（6.2）到空柱管（5.8）中，使试样（6.2）以不超过2mL./min的流速缓慢通过免疫亲和层析柱，待试样完全流尽后，用20mL乙酸铵溶液（4.12）分两次淋洗免疫亲和柱，待淋洗液流尽后，将柱内残留液体吹于，弃去全部流出液。用乙酸甲醇溶液（4.13）1mI洗脱，收集洗脱液于玻璃刻度试管中，重复洗脱操作一次，如洗脱液体积超过2mL，可氮吹后用乙酸甲醇溶液（4.13）定容至2.0mL，过0.22um滤膜，供高效液相色谱测定。6.4测定条件
6.4.1液相色谱条件
色谱柱：Cis色谱柱：2.1mmX50mm，粒径1.9um，或相当者：a）
流动相：A，甲醇：B.0.1%乙酸水溶液（4.8）：洗脱程序见表1：h）
KAoMrKAca
时间/min
流速：200μL/min；
柱温：30℃；
进样量：5μL。
质谱条件
液相色谱的梯度洗脱程序
A.甲醇/%
离子化模式：电喷雾电离（ESI-)负离子模式：质谱扫描方式：多反应监测（MRM)：其他参考质谱条件参见附录A。
5液相色谱-质谱/质谱测定
定性测试
SN/T4675.10—2016
B.0.1%乙酸水溶液/%
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。
2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差表2
相对离子丰度
允许的相对偏差
2定量测试
>20%~50%
>10%~20%
依次测定标准系列工作液，绘制峰面积对标准溶液浓度的标准工作曲线，用标准曲线对样品进行定量，样品溶液中赭曲霉毒素A的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围的稀释后再进样。在上述色谱条件和质谱条件下，赭曲需毒素A的参考保留时间及标准品多反应监测（MRM)色谱图参见图B,1。
空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7结果的计算和表述
7.1采用外标法定量，按式（1)计算被测物的含量：ikAoNiKAca
SN/T4675.10—2016
式中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每升（μg/L)：.......
从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（ug/L）；V
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；V
最终样液所代表的试样体积，单位为毫升（mL）。7.2结果需扣除空白值。
定量限和回收率
定量限
本方法中赭曲霉毒素A的定量限为0.20ug/L。回收率与精密度
不同基质中赭曲霉毒素A在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据见表3。表3不同基质在不同添加水平下的回收率与精密度试验数据表样品名称
干红葡萄酒
半甜桃红葡萄酒
甜白葡萄酒
添加水平（ug/L）
回收率范周/%
89.7100.7
87.9--93.1
86.7-94.4
87.8~-103.4
86.3-95.3
103.8-117.4
88.7~-102.1
90.7~111.7
93.7~95.8
....(1)
精密度/%
KAONiKAca
质谱参考参数：
（资料性附录）
质谱参考参数1
ESI负离子模式，多反应监测（MRM)；电喷雾电压：-3500V；
离子源温度：450℃；
雾化气压力：40Arb：
辅助气压力：15Arb：
碰撞气压力：1.5Arb；
监测离子对、套管透镜、碰撞电压见表A，表A.1
精曲霉毒素A
SN/T4675.10—2016
赭曲霉毒素A保留时间、定性定量离子对及套管透镜、碰撞能量保留时间
定性离子对
402>211
定量离子对
402>358
套管透镜
碰撞能量
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在ThermoScicntific的TSQQuantumnUltra型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业日的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。5
TTKAONhIKAca
SN/T4675.10—2016
附录B
（资料性附录）
曲需毒素A标准物质的多反应监测（MRM）色谱图赭曲霉毒素A标准物质的多反应监测（MRM)色谱图见图B.1~图B.3RT:4.15
AA:35779
SN:1148
010.290731602218103538698976662367801
m/z402>m/z211色谱图（1μg/L）RT:414
AA:104032
SN:925
AA:1501
010.56113
ET:5:65
476SN14
m/z402>m/z358色谱图（1μg/L）图B.2
TYKAONrKAca
定性离子相对丰度图
SN/T4675.10—2016
SN/T4675.10-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T4675.10—2016
中国标准出版社出版
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张0.75字数18千字2017年12月第一版2017年12月第一次印刷印数1—500
书号：155066：2-32360
定价16.00元
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