SN/T 4537.1-2016.Commercial kit method-Chloramphenicol-Test method I.
1范围
SN/T 4537.1规定了食品中氯霉素酶联免疫检测方法。
SN/T 4537.1适用于采用酶联免疫竞争法定性定量检测鸡肉与虾肉中的氯霉素。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法
3原理
在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样品中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氣霉素酶结合物,用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关.与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中氯霉素的含量。
4试剂与材料
4.1氯霉素酶联免疫检测试剂盒
在2℃~8℃条件下运输与保存,产品有效期12个月。
本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价,评价结果参见附录A.试剂盒组成如下:
5仪器与设备
5.1 微孔板酶标仪450nm/630nm。
5.2 旋转蒸发仪/氮气吹干装置。
5.3 均质器。
5.4振荡器。
5.5涡旋仪。
5.6离心机。
5.7 天平:感量0.01 g。
5.8刻度移液管:10 mL。
5.9洗耳球。
5.10 玻璃试管:10 mL。

旧青真
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4537.1—2016
商品化试剂盒检测方法
氯霉素
方法一
Commercialkitmethod-
Chloramphenicol-TestmethodI
2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
商品化试剂盒检测方法
氯霉素方法一
SN/T4537.1—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880X12301/16
2017年12月第～版
印张0.5
字数10千字
2017年12月第一次印刷
印数1500
书号：155066：2-32436
定价14.00元
本部分是SN/T4537系列标准的第1部分本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京勤邦生物技术有限公司。本部分主要起草人：邹明强、薛强、王燕飞、万宇平、罗晓琴。SN/T4537.1—2016
1范围
商品化试剂盒检测方法
氯霉素
方法一
SV/T4537的本部分规定了食品中氯霉素酶联免疫检测方法。本部分适用于采用酶联免疫竞争法定性定量检测鸡肉与虾肉中的氯霉素。2规范性引用文件
SN/T4537.1—2016
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法3原理
在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样品中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氯霉素酶结合物，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中氯霉素的含量。4试剂与材料
氯霉素酶联免疫检测试剂盒
在2℃～8℃条件下运输与保存，产品有效期12个月本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价结果参见附录A。试剂盒组成如下：a）96孔酶标板×1块，包被有偶联抗原；标准液×6瓶，1mL/瓶，浓度分别为0×100.025×109，0.075×10-，0.3×10-%，1.2×b)
10-9,4.8X10-\;
高浓度标准品：1mL/瓶，浓度为100×10-9：酶结合物工作液，7mL；
底物液A液，7mL;
底物液B液，7mL；
终止液，7mL；
20×浓缩洗涤液，40mL；
2×浓缩复溶液，50mL。
乙酸乙酯（分析纯）
正已烷（分析纯）
去离子水
rKAoMiKAca
SN/T4537.1—2016
5仪器与设备
微孔板酶标仪450nm/630nm。
5.2旋转蒸发仪/氮气吹干装置。5.3均质器。
5.4振荡器。
5.5涡旋仪。
5.6离心机。
天平：感量0.01g。
刻度移液管：10mL
洗耳球。
5.10玻璃试管：10mL
聚苯乙烯离心管：10ml、15mL、50mL。微量移液器：20uL～200uL100ML～1000uL6样品制备
用均质器均质组织样本。
6.2称取3.0s士0.05g均质物至50mL聚苯乙烯离心管中，加人6mL乙酸乙酯，用振荡器振荡5min3000g以上，室温（20℃~25℃）离心5min。6.3移取4mL上层有机相（约相当于2g的样本）至10mL干净玻璃试管中，于50℃~60℃水浴氮气流下吹于
6.4加人1mL正已烷，用涡旋仪涡动1min，再加11mL复溶工作液（见配液1），用涡旋仪涡动15s，3000g以上室温（20℃～25℃）离心5min6.5除去上层有机相，取下层50L用于分析。7分析步骤
7.1将所需试剂从置于室温（20℃～25℃）平衡30min以上，液体试剂使用前摇匀。7.2取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放人自封袋，保存于2℃～8℃。7.3洗涤工作液在使用前也需回温。7.4编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置，
7.5加标准品/样本：加标准品/样本50叫L到对应的微孔中。7.6加人酶结合物：加入酶结合物工作液50uL/孔，轻轻振荡混勾，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
7.7洗板：揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250L/孔，充分洗涤4次～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头截破。7.8显色：加人底物液A液50uL/孔，再加底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混勾，用盖板膜盖板后置25℃避光环境反应20min。
7.9测定：加人终止液50L/孔，轻轻振荡混勾，设定酶标仪于450nm处，最好用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据，测定每孔OD值。2
-KAoNIKAca
结果判定
SN/T4537.1-—2016
8.1百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，见式（1）百分吸光度值
式中：
B——标准溶液或样本溶液的平均吸光度值；B。——0ppb标准溶液的平均吸光度值。8.2标准曲线的绘制与计算
...(1)
以标准品百分吸光率为纵坐标，以氯霉素标准品浓度（×10-9）的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代人标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数0.5即为样本中氯霉素实际残留量。方法性能指标
检出限与定量限
鸡肉检出限为0.07μg/kg，定量限为0.21ug/kg；虾肉检出限为0.10μg/kg，定量限0.30μg/kg。2特异性
交叉反应率：1)氯需素：100%；2）甲矾氯霉素：<0.1%；3）氟甲矾霉素：≤2.83%；4）棕榈氯霉素：<0.1%。
-KAoNiKAca
SN/T4537.1—2016
附录A
（资料性附录）
氯霉素酶联免疫检测试剂盒评价结果线性：氯霉素的线性范围为0.025μg/L~4.8μg/L，相美系数R≥0.99。A.1
交叉反应率：氯霉素100%，甲氯霉素<0.1%；氟甲矾霉素2.83%；棕榈氯霉素<0.1%。A.2
检出限和定量限：鸡肉检出限为0.07μg/kg，定量限为0.21ug/kg；虾肉检出限为0.10g/kg，定量限0.30μg/kg。
1）本评价结果仅适用于北京勤邦生物技术有限公司生产的氯霉素酶联免疫检测试剂盒。书号：1550662-32436Www.bzxZ.net
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