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SN/T 4537.2-2016

基本信息

标准号: SN/T 4537.2-2016

中文名称:商品化试剂盒检测方法氯霉素方法二

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 商品化 试剂盒 检测 方法 氯霉素

标准分类号

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出版信息

相关单位信息

标准简介

SN/T 4537.2-2016.Commercial kit method-Chloramphenicol-Test method II.
1范围
SN/T 4537.2规定了蜂王浆及冻干粉中叙街素残留量的酶联免疫测定方法。
SN/T 4537.2适用于蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的筛选测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
SN/T 2775商 品化食品检测试剂盒评价方法
3方法提要
本标准以三氯乙酸来沉淀蜂王浆的蛋白和提取蜂王浆中氯霉素,然后以固相萃取柱净化。微孔板中包被有绵羊抗兔IgG抗体,加人特异性抗本(兔抗氯霉素抗体)、酶标记氯霉素、氯霉素标准品或样品提取液后,特异性抗体与包被的绵羊抗兔IgG抗体结合,同时游离氯霉素和酶标记氯霉素竞争性的与特异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的氯霉素和酶标记氯霉素然后加人底物显色,用酶标仪测定吸光度,根据吸光度值得出试样中氯霉素的含量。
4试剂和材料
除注明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1氯霉素 检测试剂盒。
本试剂盒按照SN/T 2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会评价。具体评价参见附录A。试剂盒组成如下:
a) 预包被抗体的96孔板:12条X8孔。
b)氯霉 素标准溶液: 0.025ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL和100ng/mL。

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4537.2—2016
代替SN/T2058—2008
商品化试剂盒检测方法
氯霉素
方法二
Commercial kit method-
ChloramphenicolTestmethodI
2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
到金家童真们
2017-07-01实施
SN/T4537《商品化试剂盒检测方法氯霉素》共分为3部分:SN/T4537.1:方法—
SN/T4537.2:方法二;
SN/T4537.3:方法三。
本部分为SN/T4537的第2部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T4537.2—2016
本部分代替了SN/T2058—2008《进出口蜂王浆中氯素残留量的测定方法SN/T2058—2008相比,主要技术变化如下:酶联免疫法》,与
部分名称由《进出口蜂王浆中氯霉素残留量的测定方法法酶联免疫法》改为《商品化试剂盒检测方法氯霉素方法二》。
附录中增加了试剂盒的评价结果请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、荷兰EURO-PROXIMA公司。本部分主要起草人:张晓峰、吴娜、邵宏宏、帅江冰、李可。本部分所代替标准的历次版本发布情况为:SN/T2058—2008。
1范围
商品化试剂盒检测方法
氯霉素
方法二
SN/T4537.2—2016
SN/T4537的本部分规定了蜂于浆及冻干粉中氧需素残留量的酶联免疫测定方法。本部分适用于蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的筛选测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。2分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
商品化食品检测试剂盒评价方法SN/T2775
3方法提要
本标准以三氯乙酸来沉淀蜂王浆的蛋中包被有绵羊抗免IgG抗体,加人特异性抗bZxz.net
和提取款
王浆中氯霉素,然后以固相萃取柱净化。微孔板本(免抗氩霉素抗体)、酶标记氯霉素、氯霉素标准品或样品G抗体结合,同时游离氯霉素和酶标记氯霉素竞争性的与提取液后,特异性抗体与包被的绵羊抗兔IgG特异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的氯霉素和酶标记氯霉素,然后加人底物显色,用酶标仪测定吸光度,根据吸光度值得出试样中氟需素的含量
4试剂和材料
除注明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/工6682规定的4.1氯霉素检测试剂盒。
本试剂盒按照SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会评价。具体评价参见附录A。试剂盒组成如下:
a)预包被抗体的96孔板:12条×8孔。b)
氯霉素标准溶液:0.025ng/mL.0.05ng/ml.0.1ng/mL.0.2ng/ml.0.5ng/ml.2ng/mL和100ng/mL.
重组/零标准缓冲液。
氯霉素酶标记物冻干粉:根据氯霉素试剂盒中说明,可用重组/零标准缓冲液配制成氯霉素酶d)
标记物溶液。
抗氯霉素抗体冻干粉:根据氯霉素试剂盒中说明,可用重组/零标准缓冲液配制成抗氯霉素抗e)
体溶液。
底物TMB溶液。
SN/T4537.2-—2016
g)稀释缓冲液:可用水4倍稀释后使用。h)洗涤浓缩液:可用水10倍稀释后使用。反应终止液:试剂盒应在4℃~8℃避光条件下保存,溶解后的酶标记物和抗体溶液需一15℃i)
条件冻存。
2三氯乙酸。
3甲醇。
4.4异辛烷。
三氯甲烷。
5%三氛乙酸:5.0g三氯乙酸(4.2)以水溶解并定容至100mL。30%甲醇:30.0mL甲醇(4.3)以水定容至100ml。4.7
3异辛烷-三氯甲烷混合液:异辛烷、三氯甲烷以2:3(体积比)的比例混合。4.8
4.9HLB固相萃取柱:Oasis(或相当产品),3mL(60mg)。4.10氯霉素标准品:纯度≥98%。氯霉素标准品溶液的配制:称取0.01g氯霉素标准品,以甲醇定容至100mL,配制成100μg/mL4.11
的工作液,于4℃~8℃条件下保存。4.12
:空白样品:选取已确切知道不含有氯霉素滴蜂王浆样品,作为空白样。用于随样测试的加标监控实验。
5仪器
1酶标仪。
28道移液器:10μL~100μL。
3单道移液器:10μL~100μL.20μL200μL,100μl~1000μL和2mL~10ml5.3
混合振荡器。
高速低温离心机(6000r/min以上)。固相萃取装置。
氮吹仪。
具塞试管:50ml.。
电子天平:0.01g~100g。
试样的制备和保存
试样的制备
原始样品总量不得少于200g,蜂王浆充分搅拌均匀后,将样品分成两等份;冻干粉采用四分法,将样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器,加封并做标识。6.2
试样的保存
试样放置一20℃~一18℃条件下保存。2
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7分析步骤1
7.1提取
SN/T4537.2—2016
称取2.0g蜂王浆样品,置于50ml具塞试管中,加入8mL5%三氯乙酸(4.6),充分混匀,6000r/min离心10min,取上层备用,HLB固相萃取柱(4.9)先依次用1mL甲醇(4.3)和1mL水活化,取2.5ml上层液上柱,依次以3mL水,1mL30%甲醇(4.7)洗柱,去除残留的液体,再用2ml,甲醇(4.3)洗脱,将洗脱液收集于一干净试管,氮气吹干,以0.5mI.样品稀释缓冲液(试剂盒提供)溶解残留物,最后加入0.5mL异辛烷-三氯甲烷混合液(4.8)萃取,3000r/min离心10min,取上层水相进行分析供ELISA检测用,最后稀释倍数为1。王浆冻干粉则用水以1:2比例稀释,充分浸泡(2h以上)后,称取2.0g按照上述王浆前处理方法进行提取,最后稀释倍数为3。7.2测定条件
7.2.1酶标仪测定条件
酶标仪测定波长为450nm。
7.2.2洗板条件
人工洗涤次数5次以上,每次加人洗涤液量为250μl。自动洗板可以预定5次周期。7.2.3操作条件
所有操作应在室温下(20℃~24℃)进行,氯霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃~24℃)后方可使用。
7.3测定步骤
7.3.1将测定需用的微孔板备齐并插人微孔架上,记录标准品及样品等在微孔架上的位置7.3.2吸取100L零标准缓冲液于孔A1、A2:并吸取50uL零标准缓冲液于孔B1、B2;分别吸取50μL氯霉素标准溶液(浓度分别为:0.025ng/mL.0.05ng/ml0.1ng/mL、0.2ng/ml0.5ng/mL、2.0ng/mL)于孔C1、C2~H1、H2;吸取50μL样品溶液于其余微孔中。测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。
7.3.3分别吸取25μL氯霉素酶标记物溶液于除A1、A2外的每一个微孔。7.3.4分别吸取25μL氯霉素抗体溶液于除A1、A2外的每一个微孔。7.3.5用封口膜封孔条,并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀。7.3.6将酶标板置于4℃避光孵育1h。7.3.7倒出孔中的液体,将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打,以除去孔中过多的残液,但不能使微孔干燥,然后立即用洗涤缓冲液按7.2.2条件进行洗板。要注意不能使微孔干燥。7.3.8迅速加人100μL底物溶液于每一个微孔底部,然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混勾后,于20℃24℃避光孵育30min。
7.3.9迅速加入100μL反应终止液于每一个微孔,然后持微孔板在台面上以圆周运动方式混勾后,将微孔架置于酶标仪中,在450tm处测量吸光度(应在加入反应终止液30min内读取吸光度)。1)给出该信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对某产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有不同,需经实验评估后采用。
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SN/T4537.2—2016
7.4平行试验
按以上步骤,对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行两孔平行试验测定。5空白试验
除不称取试样外,均按上述步骤进行。7.6
监控实验
每次测定均应做一个用空白样品添加氯需素标准(4.11)的监控样品测定,以确定实验过程的准确性。
8结果计算
从含有标准品和样品的板孔的吸光度(OD)值中减去空白孔A1、A2的平均OD值。标准品和样品的OD平均值除以零标准(B1、B2)的平均OD)值,再乘以100,计算出各标准液和样品的百分比吸光度值。零标准为100%(最大百分比吸光度值).其他OD值为最大吸光度值的百分数。以吸光度百分比值(B/B。)为纵坐标(%),氯霉素标准溶液浓度(ng/mL)对数值为横坐标,绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的氯霉素浓度后,结果按式(1)进行计算:X=eXVx1000
mX1000
式中:
样品中氯霉素的残留量,单位为微克每千克(rg/ke)从标准工作曲线上得到的样品中氯霉素浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);V
样品溶液的最终定容体积,单位为毫升(mL):样品溶液所代表的最终试样质量,单位为克(g)也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算,所得结果表示至位小数。
9确证试验
如被测样品为阳性结果时,应用其他方法进行确证。10方法性能指标
10.1检出限和定量限
检出限0.1μg/kg,定量限0.3ug/kg。10.2交叉反应率
.(1)
氯霉素100%;氯霉素-葡糖苷酸65%;氯霉素-碱<0.1%;甲砜氯霉素0.1%氟苯尼考<0.1%。iikAoNrKAca
附录A
(资料性附录)
氯霉素试剂盒评价结果2
线性:氯霉素的线性范围均为0.25ng/mL~2ng/mL,相关系数R≥0.98。A.1
交叉反应率:氯霉素100%:甲砜氯霉素~0.1%:氟苯尼考~0.1%。A.2
检出限和定量限:检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3ug/kg。2本评价结果仅适用于荷兰EURO-PROXIMA公司的气每素试剂盒S
SN/T4537.2—2016
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SN/T4537.2-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂盒检测方法
氯霉素
方法二
SN/T4537.22016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室:(010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
印张0.75字数12千字
2018年3月第一版2018年3月第一次印刷印数1—500
书号:155066:2-32428
定价16.00元
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