SN/T 4584-2016
基本信息
标准号： SN/T 4584-2016
中文名称：出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 出口 动物 食品 泰妙 菌素 残留量 测定 色谱 质谱 质谱法
标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4584-2016.Determination of valnemulin and tiamulin residues in foodstuffs of animal origin for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4584规定了出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
SN/T 4584适用于动物肌肉组织、肝脏、鱼、蛋和奶中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的定量测定和定性确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
用乙腈提取试样中的沃尼妙林和泰妙菌素残留,经MCXSPE小柱净化,Cis色谱柱分离,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一-级水。
4.1 甲醇:色谱纯。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3甲 酸。
4.4微孔滤 膜:0.22 μm,水相。
5仪器
5.1高效液相色谱串联质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2分析天平:感量分别为0.01mg和0.01 g。
5.3 均质器:15000r/min。
5.4振荡器。
5.5离心机:10000r/ min。
5.6 旋转蒸发器。
5.7 固相萃取装置。
5.8真空泵:真空度应达到80 kPa。
1范围
SN/T 4584规定了出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
SN/T 4584适用于动物肌肉组织、肝脏、鱼、蛋和奶中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的定量测定和定性确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
用乙腈提取试样中的沃尼妙林和泰妙菌素残留,经MCXSPE小柱净化,Cis色谱柱分离,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一-级水。
4.1 甲醇:色谱纯。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3甲 酸。
4.4微孔滤 膜:0.22 μm,水相。
5仪器
5.1高效液相色谱串联质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2分析天平:感量分别为0.01mg和0.01 g。
5.3 均质器:15000r/min。
5.4振荡器。
5.5离心机:10000r/ min。
5.6 旋转蒸发器。
5.7 固相萃取装置。
5.8真空泵:真空度应达到80 kPa。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4584—2016
出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of valnemulin and tiamulin residues in foodstuffs ofanimaloriginforexport-LC-MS/MSmethod2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，SN/T4584—2016
本标准主要起草人：刘晓茂、李学民、常巧英、王飞、葛娜、杨志伟、张守军、曹彦忠、张进杰。1范围
出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定
液相色谱-质谱质谱法
SN/T4584—2016
本标准规定了出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法本标准适用于动物肌肉组织、肝脏、鱼、蛋和奶中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的定量测定和定性确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
用乙腈提取试样中的沃尼妙林和泰妙菌素残留，经MCXSPE小柱净化，C1色谱柱分离，以电喷雾离子源（ESI)正离子扫描方式，在多反应监测（MRM)模式下进行测定，外标法定量4试剂和材料
除另有说明外所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
甲酸。
正已烷。
氢水：25%。
氯化钠。
无水硫酸钠：650℃灼烧4h在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用，甲酸-水（1+19，体积比）：取5mL甲酸（4.3)用水定容至100mL。4.9
氨水-甲醇（1+19.体积比）：取5mL氨水（4.5）用甲醇（4.1）定容至100mL。4.10乙睛-水（1+3.体积比）：取25ml乙睛（4.2）用水定容至100mL4.11标准物质：沃尼妙林（CAS号：101312-92-9）：纯度大于或等于98%；泰妙菌素（CAS号：55297-955）：纯度大于或等于98%。
2沃尼妙林标准贮备溶液：1.0mg/ml。称取适量的沃尼妙林标准物质，用甲醇溶解并配制成4.12
1.0mg/mL的标准贮备液。避光保存于一18℃冰柜中。4.13泰妙菌素标准贮备溶液：1.0mg/mL。称取适量的泰妙菌素标准物质，用甲醇溶解并配制成1.0mg/mL的标准备液。避光保存于一18℃冰柜中。4.14沃尼妙林和泰妙菌素混合标准工作溶液：1.0μg/mL吸取适量沃尼妙林标准贮备溶液（4.12）和1
SN/T4584—2016
泰妙菌素标准贮备溶液（4.13），用乙睛-水（4.10）稀释成1.0ug/mL的标准工作溶液，4℃冷藏避光保存。
4.15MCx固相萃取小柱：60mg.3ml.或相当者。4.16微孔滤膜：0.22pm，水相。5仪器
高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI)。分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。均质器：15000r/min。
振荡器。
离心机：10000r/min。
旋转蒸发器。
固相萃取装置
真空泵：真空度应达到80kPa。
6试样的制备与保存
6.1动物肌肉组织、肝脏、鱼
从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器内，密封作为试样，注明标记。将试样于一18℃冷冻保存。试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物含量发生变化。
为500g去壳后月
用组织捣碎机充分混勾，装入洁净容器内。密封作从原始样品取出有代表性样品约冷藏避光保存。
试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物为试样，注明标记。将试样置于4C含量发生变化。
从原始样品取出有代表性样品约500g，充分混勾，装大吉净容器内。密封作为试样，注明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物含量发生变化。7测定步骤
7.1提取
7.1.1动物肌肉组织、肝脏和鱼
称取2g（精确至0.01g）样品至离心管中，加入5g无水硫酸钠（4.7）、10mL乙睛，用均质器于10000r/min速率下均质2min.振荡10min，以4000r/min离心10min，上层清液转移至鸡心瓶中，用10mL乙睛重复上述提取、离心操作，合并两次提取的上清液，在40℃下浓缩至近干，用5mL甲酸水（4.8）溶解，混匀，待净化：KAONKAca
蛋和奶
SN/T4584—2016
称取5g（精确至0.01g）样品至离心管中，加人2g氯化钠、10mL乙睛，振荡20min，以4000r/min离心5min。取上层清液5mL，于鸡心瓶中，在40℃下浓缩至近干，用5mL甲酸-水（4.8）溶解，混匀，待净化。
7.2净化
依次用3mL氨水-甲醇（4.9）、3mL甲醇和10mL水淋洗MCX固相萃取小柱（4.15），弃去淋洗液。将上述提取液过柱，再依次用3mL甲酸-水（4.8）、3mL甲醇，3mL正已烷淋洗小柱，弃去全部流出液，减压抽干，最后用5mL氨水-甲醇（4.9）洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，1mL乙睛-水（4.10）溶液定容，过膜待测。
7.3基质标准溶液的制备
称取5份2g（精确至0.01g）阴性试样，按照7.1和7.2操作，制成基质空白溶液。在基质空白溶液中添加适量沃尼妙林和泰妙菌素标准工作溶液（4.14）.制成系列基质标准溶液。7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Ci，1.7μm，100mm×2.1mm（内径）或相当者a)
柱温：35℃：
进样量：10μL；
流动相：A：甲酸-水（1+999）溶液；B：乙。梯度洗脱条件见表1。表
时间/min
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描；
液相色谱梯度洗脱条件
流速/（uL/min）
检测方式：多反应监测（MRM）；A/%
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度d
达到检测要求，参考条件参见附录A；喷雾电压、去集簇电压，碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度，参考条件参见附录A。e
KAoNKAca
SN/T4584—2016
液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性确证
被测组分选择1个母离子，2个以上了子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在土2.5%之内：工样品谱图中被测组分的相对离子手度与浓度接近的基质标准校准溶液谱图中对应的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围则可判定样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许的最大偏差
2定量测定
20%10%K≤10%
外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对沃尼妙林和泰妙菌素的基质校准标准溶液进样测定，以基质标准校准溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范用内。沃尼妙林和泰妙菌素的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见图B.1。7.5空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.6结果计算与表述
按式(1)计算试样中沃尼妙林和泰妙菌素的含量：(A-A)XcXVX1000
A.XmX1000
式中：
试样中被测化合物的含量：单位为微克每千克（g/kg）；X
样液中被测化合物的峰面积；
空白实验中被测化合物的峰面积：标准工作溶液中被测化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；标准工作溶液中被测化合物的峰面积；最终样液所代表的试样量，单位为克（g）8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法测定低限：沃尼妙林和泰妙菌素的测定低限均为5.01g/kg，8.2回收率
鸡肉、鱼肉、猪肝、牛奶和鸡蛋中沃尼妙林和泰妙菌素添加浓度及其回收率实验数据见表3。4
.（1)
riKAoNKAca
沃尼妙林和泰妙菌素的添加浓度及平均回收率（n=10）表3
添加浓度/（ug/kg）
沃尼妙林
平均回收率范用/%
72.40-~98.60
78.50~95.40
82.38~95.40
82.56~96.71
73.20~-99.60
76.70--95.60
77.48~95.64
82.76~96.87
75.2099.20
74.7096.30
79.14~95.26
82.33~95.75
84.20-101.6
75.60~96.40
80.60~97.80
77.1294.52
82.3398.58
74.20~98.60
76.50~94.30
73.12-93.52
77.8895.47
SN/T4584—2016
泰妙菌素
74.60~101.20
76.90~96.80
76.90-~95.26
76.69~93.44
73.80~98.20
75.80~96.90
75.64~94.64
77.41~98.97
73.40102.20
74.10~99.30
75.1493.78
78.60~96.25
85.30~100.4
73.40~99.80
75.80-94.50
72.98~97.20
76.30~95.33
73.40~97.20
76.40~106.20
73.58~93.06
74.5692.63
-KAoNrKAca
SN/T4584—2016
参考质谱条件：
离子源：电喷雾离子源：
扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：5400V
气帘气压力流速：3.5L/min
雾化气压力流速：6L/min
辅助气压力流速：8L/min
辅助气温度：550℃：
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件！
监测离子对、采集时间、保留时间、去簇电压和碰撞能量见表A,1。沃尼妙林和泰妙菌素的质谱参数表A.1
化合物
泰妙菌素
沃尼妙林
定性离子对bZxz.net
494.30/192.10
494.30/119.00
565.30/263.10
565.30/285.20
定量离子对
494.30/192.10
565.30/263.16
采集时问，
智时间/
去簇电压
(DP)/V
撞能量
(CE)/V
非商业性声明：附录A所列参数是在AP15500质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。-TKAONIKAca
附录B
（资料性附录）
沃尼妙林和泰妙菌素的多反应监测（MRM）色谱图2.07
沃尼妙林
沃尼妙林
泰妙菌意
泰妙菌素
565/263
565/285
494/192
494/119
沃尼妙林和泰妙菌素的多反应监测（MRM）色谱图SN/T4584—2016
SN/T4584—2016
Foreword
This standard isdrafted accordancewith therulesgivenbytheGB/T1.1-2009This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation AdministrationofthePeople'sRepublic ofChina.The standard was drafted by Qinhuangdao Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of thePeople'sRepublicofChina.
Themain drafters of this standard are Liu Xiaomao,Li Xuemin,Chang Qiaoying,Wang Fei,Ge Na,Yang Zhiwei,Zhang Shoujun,Cao Yanzhong,Zhang JinjieScope
SN/T4584—2016
Determination of valnemulin and tiamulinresidues in foodstuffs of animal origin forexport-Lc-MS/MSmethod
This standard specifies the method of determination of valnemulin and tiamulin residues infoodstuffsof animaloriginforexport.This standard isapplicabletothedeterminationof valnemulin andtiamulinresidues inanimal muscle,animal liver,fisheggandmilk.2 Normative reference
The following normative documents contain provisions which,through reference in this text,constituteprovisions of this standard.For dated references,subsequent amendments to,or revisions of.,any of these pub-lications do not apply.Howeverprotocol toagreements based on this standardareencouraged to investigatethepossibility of applying themostrecent editions of thenormativedocuments indicated below.For undatedreferences.the latest ecdition ofthenormativedocumentreferred to applies.GB/T6682Waterforanalyticallaboratoryuse-Specificationandtestmethods3Principle
Valnemulin and tiamulin residues in the samples are extracted with acetonitrile,and cleaned by MCXsolid phase extraction,determined by LC-MS/MS(ESI+),quantified by external standard method.Regents andmaterials
Unless otherwise specified,all regents used are A.R.and“water\is deionized water.4.1 Methanol:HPLC grade.
Acetonitrile:HPLCgrade
Formicacid
SN/T4584—2016
4.4n-Hexane.
4.5Ammonia:25%.
Sodiumchloride.
4.7anhydroussodiumsulfate:lgnitefor4hat65o℃cool toroomtemperatureindesiccatorandkeep in a tightly closed container.4.8Formicacid-water（1+19,V
with95mLwater
4.9Ammonia-Methanol（1+19,VV):5mLAmmonia(4.5)mixwith95mLMethanol(4.1).0Acetonitrile-water（1+3,V:V)：25mLAcetonitrile(4.2)mixwith75mLwater.4.10
4.11Standards:valnemulin(CASNO.:101312-92-9)purity≥98%.
urity98%tiamulin（CASNO.：55297-95-5)，2Valnemulin stock standard solutions(1.0 mg/mL).Separatelyaccurately weigh an adequate4.12
amount of valnemulin standards,dissolvein meioland preparea solutionof1.0mg/mLasthestock standard solutions.Solutions arestable at-184.13
Tiamulin stock standard solutions1.omg/mL.Separatelyaccuratelyweighanadequateamount of tiamulin standards,dissolve in methanol and prepare a solution of 1.0 mg/mL as the stockstandard solutions.Solutions are stable at4.14
Working standard solutions1
ug/mL)：According
requirement，pipetteadequateto the
amountof valnemulin stock standard solutions(4.12)and tiamulin stock standard solutions(4.13),anddissolve inAcetonitrile-water(4.io)and preparea solution of1.oμgmL.Storedbelow4℃avoiding
sunlight.
4.15Mcxsolidphaseextractioncartridges:60mg,3mLorequivalentsMembranefilter:0.20um.
Apparatus and equipment
5.1 LC-MS/MS:equipped with ESI source.Balance:0.1mgand0.01gsensitivity.5.2
5.3Homogenizer:15 000 r/min.10
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出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of valnemulin and tiamulin residues in foodstuffs ofanimaloriginforexport-LC-MS/MSmethod2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，SN/T4584—2016
本标准主要起草人：刘晓茂、李学民、常巧英、王飞、葛娜、杨志伟、张守军、曹彦忠、张进杰。1范围
出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定
液相色谱-质谱质谱法
SN/T4584—2016
本标准规定了出口动物源性食品中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法本标准适用于动物肌肉组织、肝脏、鱼、蛋和奶中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的定量测定和定性确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
用乙腈提取试样中的沃尼妙林和泰妙菌素残留，经MCXSPE小柱净化，C1色谱柱分离，以电喷雾离子源（ESI)正离子扫描方式，在多反应监测（MRM)模式下进行测定，外标法定量4试剂和材料
除另有说明外所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
甲酸。
正已烷。
氢水：25%。
氯化钠。
无水硫酸钠：650℃灼烧4h在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用，甲酸-水（1+19，体积比）：取5mL甲酸（4.3)用水定容至100mL。4.9
氨水-甲醇（1+19.体积比）：取5mL氨水（4.5）用甲醇（4.1）定容至100mL。4.10乙睛-水（1+3.体积比）：取25ml乙睛（4.2）用水定容至100mL4.11标准物质：沃尼妙林（CAS号：101312-92-9）：纯度大于或等于98%；泰妙菌素（CAS号：55297-955）：纯度大于或等于98%。
2沃尼妙林标准贮备溶液：1.0mg/ml。称取适量的沃尼妙林标准物质，用甲醇溶解并配制成4.12
1.0mg/mL的标准贮备液。避光保存于一18℃冰柜中。4.13泰妙菌素标准贮备溶液：1.0mg/mL。称取适量的泰妙菌素标准物质，用甲醇溶解并配制成1.0mg/mL的标准备液。避光保存于一18℃冰柜中。4.14沃尼妙林和泰妙菌素混合标准工作溶液：1.0μg/mL吸取适量沃尼妙林标准贮备溶液（4.12）和1
SN/T4584—2016
泰妙菌素标准贮备溶液（4.13），用乙睛-水（4.10）稀释成1.0ug/mL的标准工作溶液，4℃冷藏避光保存。
4.15MCx固相萃取小柱：60mg.3ml.或相当者。4.16微孔滤膜：0.22pm，水相。5仪器
高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI)。分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。均质器：15000r/min。
振荡器。
离心机：10000r/min。
旋转蒸发器。
固相萃取装置
真空泵：真空度应达到80kPa。
6试样的制备与保存
6.1动物肌肉组织、肝脏、鱼
从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器内，密封作为试样，注明标记。将试样于一18℃冷冻保存。试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物含量发生变化。
为500g去壳后月
用组织捣碎机充分混勾，装入洁净容器内。密封作从原始样品取出有代表性样品约冷藏避光保存。
试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物为试样，注明标记。将试样置于4C含量发生变化。
从原始样品取出有代表性样品约500g，充分混勾，装大吉净容器内。密封作为试样，注明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。试样在制备和保存过程中避免受到污染或待测物含量发生变化。7测定步骤
7.1提取
7.1.1动物肌肉组织、肝脏和鱼
称取2g（精确至0.01g）样品至离心管中，加入5g无水硫酸钠（4.7）、10mL乙睛，用均质器于10000r/min速率下均质2min.振荡10min，以4000r/min离心10min，上层清液转移至鸡心瓶中，用10mL乙睛重复上述提取、离心操作，合并两次提取的上清液，在40℃下浓缩至近干，用5mL甲酸水（4.8）溶解，混匀，待净化：KAONKAca
蛋和奶
SN/T4584—2016
称取5g（精确至0.01g）样品至离心管中，加人2g氯化钠、10mL乙睛，振荡20min，以4000r/min离心5min。取上层清液5mL，于鸡心瓶中，在40℃下浓缩至近干，用5mL甲酸-水（4.8）溶解，混匀，待净化。
7.2净化
依次用3mL氨水-甲醇（4.9）、3mL甲醇和10mL水淋洗MCX固相萃取小柱（4.15），弃去淋洗液。将上述提取液过柱，再依次用3mL甲酸-水（4.8）、3mL甲醇，3mL正已烷淋洗小柱，弃去全部流出液，减压抽干，最后用5mL氨水-甲醇（4.9）洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，1mL乙睛-水（4.10）溶液定容，过膜待测。
7.3基质标准溶液的制备
称取5份2g（精确至0.01g）阴性试样，按照7.1和7.2操作，制成基质空白溶液。在基质空白溶液中添加适量沃尼妙林和泰妙菌素标准工作溶液（4.14）.制成系列基质标准溶液。7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Ci，1.7μm，100mm×2.1mm（内径）或相当者a)
柱温：35℃：
进样量：10μL；
流动相：A：甲酸-水（1+999）溶液；B：乙。梯度洗脱条件见表1。表
时间/min
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描；
液相色谱梯度洗脱条件
流速/（uL/min）
检测方式：多反应监测（MRM）；A/%
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度d
达到检测要求，参考条件参见附录A；喷雾电压、去集簇电压，碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度，参考条件参见附录A。e
KAoNKAca
SN/T4584—2016
液相色谱-串联质谱测定
7.4.3.1定性确证
被测组分选择1个母离子，2个以上了子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在土2.5%之内：工样品谱图中被测组分的相对离子手度与浓度接近的基质标准校准溶液谱图中对应的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围则可判定样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许的最大偏差
2定量测定
20%
外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对沃尼妙林和泰妙菌素的基质校准标准溶液进样测定，以基质标准校准溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范用内。沃尼妙林和泰妙菌素的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见图B.1。7.5空白实验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.6结果计算与表述
按式(1)计算试样中沃尼妙林和泰妙菌素的含量：(A-A)XcXVX1000
A.XmX1000
式中：
试样中被测化合物的含量：单位为微克每千克（g/kg）；X
样液中被测化合物的峰面积；
空白实验中被测化合物的峰面积：标准工作溶液中被测化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；标准工作溶液中被测化合物的峰面积；最终样液所代表的试样量，单位为克（g）8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法测定低限：沃尼妙林和泰妙菌素的测定低限均为5.01g/kg，8.2回收率
鸡肉、鱼肉、猪肝、牛奶和鸡蛋中沃尼妙林和泰妙菌素添加浓度及其回收率实验数据见表3。4
.（1)
riKAoNKAca
沃尼妙林和泰妙菌素的添加浓度及平均回收率（n=10）表3
添加浓度/（ug/kg）
沃尼妙林
平均回收率范用/%
72.40-~98.60
78.50~95.40
82.38~95.40
82.56~96.71
73.20~-99.60
76.70--95.60
77.48~95.64
82.76~96.87
75.2099.20
74.7096.30
79.14~95.26
82.33~95.75
84.20-101.6
75.60~96.40
80.60~97.80
77.1294.52
82.3398.58
74.20~98.60
76.50~94.30
73.12-93.52
77.8895.47
SN/T4584—2016
泰妙菌素
74.60~101.20
76.90~96.80
76.90-~95.26
76.69~93.44
73.80~98.20
75.80~96.90
75.64~94.64
77.41~98.97
73.40102.20
74.10~99.30
75.1493.78
78.60~96.25
85.30~100.4
73.40~99.80
75.80-94.50
72.98~97.20
76.30~95.33
73.40~97.20
76.40~106.20
73.58~93.06
74.5692.63
-KAoNrKAca
SN/T4584—2016
参考质谱条件：
离子源：电喷雾离子源：
扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：5400V
气帘气压力流速：3.5L/min
雾化气压力流速：6L/min
辅助气压力流速：8L/min
辅助气温度：550℃：
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件！
监测离子对、采集时间、保留时间、去簇电压和碰撞能量见表A,1。沃尼妙林和泰妙菌素的质谱参数表A.1
化合物
泰妙菌素
沃尼妙林
定性离子对bZxz.net
494.30/192.10
494.30/119.00
565.30/263.10
565.30/285.20
定量离子对
494.30/192.10
565.30/263.16
采集时问，
智时间/
去簇电压
(DP)/V
撞能量
(CE)/V
非商业性声明：附录A所列参数是在AP15500质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。-TKAONIKAca
附录B
（资料性附录）
沃尼妙林和泰妙菌素的多反应监测（MRM）色谱图2.07
沃尼妙林
沃尼妙林
泰妙菌意
泰妙菌素
565/263
565/285
494/192
494/119
沃尼妙林和泰妙菌素的多反应监测（MRM）色谱图SN/T4584—2016
SN/T4584—2016
Foreword
This standard isdrafted accordancewith therulesgivenbytheGB/T1.1-2009This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation AdministrationofthePeople'sRepublic ofChina.The standard was drafted by Qinhuangdao Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of thePeople'sRepublicofChina.
Themain drafters of this standard are Liu Xiaomao,Li Xuemin,Chang Qiaoying,Wang Fei,Ge Na,Yang Zhiwei,Zhang Shoujun,Cao Yanzhong,Zhang JinjieScope
SN/T4584—2016
Determination of valnemulin and tiamulinresidues in foodstuffs of animal origin forexport-Lc-MS/MSmethod
This standard specifies the method of determination of valnemulin and tiamulin residues infoodstuffsof animaloriginforexport.This standard isapplicabletothedeterminationof valnemulin andtiamulinresidues inanimal muscle,animal liver,fisheggandmilk.2 Normative reference
The following normative documents contain provisions which,through reference in this text,constituteprovisions of this standard.For dated references,subsequent amendments to,or revisions of.,any of these pub-lications do not apply.Howeverprotocol toagreements based on this standardareencouraged to investigatethepossibility of applying themostrecent editions of thenormativedocuments indicated below.For undatedreferences.the latest ecdition ofthenormativedocumentreferred to applies.GB/T6682Waterforanalyticallaboratoryuse-Specificationandtestmethods3Principle
Valnemulin and tiamulin residues in the samples are extracted with acetonitrile,and cleaned by MCXsolid phase extraction,determined by LC-MS/MS(ESI+),quantified by external standard method.Regents andmaterials
Unless otherwise specified,all regents used are A.R.and“water\is deionized water.4.1 Methanol:HPLC grade.
Acetonitrile:HPLCgrade
Formicacid
SN/T4584—2016
4.4n-Hexane.
4.5Ammonia:25%.
Sodiumchloride.
4.7anhydroussodiumsulfate:lgnitefor4hat65o℃cool toroomtemperatureindesiccatorandkeep in a tightly closed container.4.8Formicacid-water（1+19,V
with95mLwater
4.9Ammonia-Methanol（1+19,VV):5mLAmmonia(4.5)mixwith95mLMethanol(4.1).0Acetonitrile-water（1+3,V:V)：25mLAcetonitrile(4.2)mixwith75mLwater.4.10
4.11Standards:valnemulin(CASNO.:101312-92-9)purity≥98%.
urity98%tiamulin（CASNO.：55297-95-5)，2Valnemulin stock standard solutions(1.0 mg/mL).Separatelyaccurately weigh an adequate4.12
amount of valnemulin standards,dissolvein meioland preparea solutionof1.0mg/mLasthestock standard solutions.Solutions arestable at-184.13
Tiamulin stock standard solutions1.omg/mL.Separatelyaccuratelyweighanadequateamount of tiamulin standards,dissolve in methanol and prepare a solution of 1.0 mg/mL as the stockstandard solutions.Solutions are stable at4.14
Working standard solutions1
ug/mL)：According
requirement，pipetteadequateto the
amountof valnemulin stock standard solutions(4.12)and tiamulin stock standard solutions(4.13),anddissolve inAcetonitrile-water(4.io)and preparea solution of1.oμgmL.Storedbelow4℃avoiding
sunlight.
4.15Mcxsolidphaseextractioncartridges:60mg,3mLorequivalentsMembranefilter:0.20um.
Apparatus and equipment
5.1 LC-MS/MS:equipped with ESI source.Balance:0.1mgand0.01gsensitivity.5.2
5.3Homogenizer:15 000 r/min.10
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