SN/T 4604-2016
基本信息
标准号： SN/T 4604-2016
中文名称：进出口中药材中真菌毒素的测定
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.zip .pdf
下载大小：5854153
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4604-2016.Determination of mycotoxins in Chinese herbal medicine for import and export.
1范围
SN/T 4604规定了进出口中药材中黄曲霉素B1、B2、G1 、G2、M1、M2,赭曲霉素A,伏马菌素Br、B2,T-2毒素,HT-2毒素,二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4604适用于进出口当归.桔梗、五味子、枸杞、大青叶，金银花、地龙中黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2,赭曲霉素A,伏马菌素B、B2,T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品经PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后,用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后,用液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量。
4试剂材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1甲醇: 色谱纯。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3 甲酸:色谱纯。
4.4乙酸铵:色谱纯。
4.5十 二水磷酸氢二钠。
4.6氯化钾。
4.7磷酸二氢钾。
4.8氯化钠。
4.9浓 盐酸。
4.10吐 温。
1范围
SN/T 4604规定了进出口中药材中黄曲霉素B1、B2、G1 、G2、M1、M2,赭曲霉素A,伏马菌素Br、B2,T-2毒素,HT-2毒素,二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。
SN/T 4604适用于进出口当归.桔梗、五味子、枸杞、大青叶，金银花、地龙中黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2,赭曲霉素A,伏马菌素B、B2,T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品经PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后,用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后,用液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量。
4试剂材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1甲醇: 色谱纯。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3 甲酸:色谱纯。
4.4乙酸铵:色谱纯。
4.5十 二水磷酸氢二钠。
4.6氯化钾。
4.7磷酸二氢钾。
4.8氯化钠。
4.9浓 盐酸。
4.10吐 温。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4604—2016
进出口中药材中真菌毒素的测定Determination of mycotoxins in Chinese herbal medicine for import and export2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施bzxz.net
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4604—2016
本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：聂福平、唐柏彬、杨俊、存显、王国民、李贤良、王昱、吴蕊、田郡、孔德英、杨惠琴。
1范围
进出口中药材中真菌毒素的测定SN/T4604-—2016
本标准规定了进出口中药材中黄曲霉素B、BG1GM、M，者曲霉素A，伏马菌素B、BT-2毒素，HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于进出口当归桔梗、五味子枸杞、大青吐、金银花、地龙中黄曲霉素B、BzG、G2Mi、M2.赭曲霉素A，伏马菌素BI、B2.T-2毒素，HT2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品经PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量4试剂材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙睛：色谱纯。
4.3甲酸：色谱纯。
4.4乙酸铵：色谱纯。
4.5十二水磷酸氢二钠。
4.6氯化钾。
4.7磷酸二氢钾。
4.8氯化钠。
4.9浓盐酸。
吐温。
氢氧化钠。
0.1mol/L盐酸溶液：量取9mL浓盐酸（4.9），用水稀释至1000mL。4.13
1mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0g固体氢氧化钠（4.11），用水溶解并稀释至1000mL。4.14pH7.4PBS溶液：称取2.92g十二水磷酸氢二钠（4.5）、0.20g氯化钾（4.6）、0.20g磷酸二氢钾（4.7)和8.00gNaCl(4.8)用900mL水溶解，用0.1mol/L盐酸溶液（4.12）或1mol/L.氢氧化钠溶液（4.13）调节pH值到7.4，用水稀释至1000mI.1
SN/T4604—2016
4.150.1%吐温PBS溶液：称取0.5g叶温，用pH7.4PBS溶液（4.14）溶解并稀释至500mL。4.162mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.151g乙酸铵（4.4），用水溶解并转移至1000ml容量瓶中，加入1mL甲酸（4.3），用水定容至刻度。4.17甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）：量取40ml.甲醇和60mL2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）(4.16），混勾。4.18黄曲霉素B、B2、GI、G2、MI、M2，赭曲霉素A,伏马菌素B1、B，T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类标准品：标准物质纯度为≥98%，标准品信息见附录A表A.1。4.19标准储备液：分别准确称取适量标准物质，用乙睛配制成浓度为100ng/mL的标准储备溶液4℃下避光保存。
4.20混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，混合后50℃氮吹至十后用甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）（4.17)重新溶解制成适当浓度的混合标准工作液，4℃下避光保存
4.21免疫亲和柱：Myco6in1TMLC/MS/MS亲和柱，或相当者。4.22滤膜：0.22μm，有机系，
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g。5.3高速均质器
5.4离心机：转速不低于4000t/min，5.5
恒温氮吹装置。
5.6涡旋混合器。
玻璃微纤维滤纸：
5.8粉碎机
试样制备与保存
从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装人洁净的塑料袋中，密封，并标明标记。7分析步骤
7.1提取
称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加入1g氯化钠，再加入PBS溶液（4.14)25mL，均质提取2min，5000r/min离心10min，将全部上清液用玻璃纤维滤纸过滤后得提取液A：向残渣中加入25mL.甲醇，均质提取2min，5000.r/min离心10min，取上清液10mL，用PBS（4.14）稀释至100mL,用玻璃纤维滤纸过滤后得到提取液B，7.2免疫亲和柱净化
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，将50mL提取液B全部通过免疫亲和柱（流速控制在1滴/s~2滴/s），然后用10mL含0.1%叶温的PBS（4.15）淋洗亲和柱，再将5mL提取液A通过免疫亲和柱（流速控制在1滴/s~2滴/s），待提取液全部通过亲和柱，用5mL含0.1%吐温的PBS(4.15）和20mL水淋洗亲和柱，直至空气进入亲和柱，弃去全部流出液，用2mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在2
KAoNrKAca
SN/T4604—2016
1滴/s），当甲醇大部分过柱时，停止加压，静置孵育5min，再用2mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在1滴/s），收集全部淋洗液：将淋洗液置于40℃下水浴氨气吹干，用1mL甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）（4.17）溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜，用液相色谱质谱/质谱测定。
液相色谱-质谱/质谱条件
色谱柱：Cls，5μm，2.1mm×150mm；流动相：乙睛（4.2)（A）和2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（4.16)（B）梯度洗脱；流速：0.3mL/min；
进样量：20L；
柱温：40℃：
黄曲霉素BI、B2、GI、Gz、M,、M2.赭曲霉素A,伏马菌素BI、B,,T-2毒素和HT-2毒素梯度洗脱程序见表1；二羟基苯甲酸内脂类梯度洗脱程序见表2。表1梯度洗脱程序1
梯度时间/min
梯度时间/inin
质谱条件
离了源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：正离子或负离子；
监测方式：多反应监测（MRM)；参考条件参见附录B。
流动相A/%
梯度洗脱程序2
流动相A/%
流动相B/%
流动相B/%
-TrKAONiKAca
SN/T4604—2016
7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定
按照7.3.2液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的真菌毒素残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。标准溶液多反应监测色谱图参见附录C中图C.1～图C.17。7.3.4阳性样品的确证
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
7.3.5空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行结果计算和表述
20%~50%
￥10%~20%
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中待测物的含量，计算结果应扣除空白值：X1000
mx1000
式中：
试样中待测物质的含量，单位为微克每千克（ug/kg）：C
从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每升（g/L)；样液最终定容体积，单位为毫升（IL）：最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。9检测低限和回收率
9.1检测低限
本方法的检测低限：黄曲霉毒素B、Bz、G,G2、M1、M2、赭曲霉毒素A和二羟基苯甲酸内脂类为1μg/kg，伏马毒素B、B,为5pμg/kg，T-2毒素、HT-2毒素为10μg/kg9.2回收率
当归、桔梗、五味子、枸杞、大青叶、金银花和地龙中添加17种真菌毒素的添加浓度及回收率数据参见附录D中表D.1。
kAoNiKAca
真菌毒素标准品信息见表A.1。
黄曲霉毒素B
黄曲霉毒素B2
黄曲霉毒素G
黄曲霉毒素G2
黄曲葡毒素M，
黄曲霉莓素M
赭曲霉毒素A
伏马毒素 B
伏马毒索 Bz
T-2毒素
HT-2毒素
3-玉米赤霉醇
β-玉米赤霉烯醇
α-玉米赤霉醇
α-玉米赤霉烯醇
玉米赤霉酮
玉米赤霉烯酮
英文名称
AflatoxinB
AflatoxinB2
AflatoxinG
AflatoxinG2
AflatoxinM,
AflatoxinM
附录A
（规范性附录）
真菌毒素标准品信息
真菌毒素标准品信息
CAS号
1162-65-8
7220-81-7
1165-39
7241-98-7
6885-57-0
OchratoxinA
FumonisinB
Fumonisin Bz
T-2toxin
HT-2toxin
β-Zearalanol
β-Zearalenol
α-Zearalanol
α-Zearalenol
Zearalanone
Zearalenone
303-47-9
116355-83-0
16355-84
21259-20-1
34-87-2
22-68-4
71030-11
26538-44-3
36455-72-8
5975-78-0
17924-92-1
分子式
Ch,HizO,
CHCING
CheHaao
SN/T 4604—2016
相对分子质量
-riKAoNiKAca
SN/T4604—2016
B.1正离子模式检测条件：
电喷雾电压（IS）：5500V；
附录BB
（资料性附录）
质谱仪器参考条件
雾化气压力（GS1）：70Psi(0.5MPa）气帘气压力（CUR）：30Psi(o.2MPa)；辅助气压力（GS2）：60Psi(0.4MPa）；离子源温度（TEM）：600℃；
去簇电压（DP）碰撞电压（CE）、碰撞室入口电压（EP)和碰撞室出口电压（CXP)见表B.1。B.2
负离子模式检测条件：
电喷雾电压（IS)：—4500V；
雾化气压力（GSD)：35Psi(0.2MPa)：气帘气压力（CUR）：4oPsi(o.3MPa)；辅助气压力（GS2)：60Psi(0.4MPa)；离子源温度（TEM）：550℃：
去簇电压（DP）、碰撞电压（CE)、碰撞室人口电压（EP)和碰撞室出口电压（CXP)见表B.1。表B.1
待测物定性离子对、定量离子对、锥孔电压、去簇电压碰撞室入口电压及碰撞室出口电压化合物
黄曲霉毒素B
黄曲霉毒素Bz
黄曲霉毒东G
黄曲霉春素G
黄曲霉毒素M
黄曲霉毒素M
精曲毒毒素A
离子对
313.2/241.1
313.2/285.3
315.2/259.1*
315.2/287.1
329.2/200
329.2/243.1
331.1/189.1*
331.1/245.3
329.1/273.1
329.1/259.2
331.1/273.1*
331.1/285.1
404.0/358.2*
404.0/239.1
Dwell/
保留时间/min
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在ABAPI4000液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅1
为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
-iiKAoNiKAca
化合物
伏马毒素B
伏马毒素Bz
T-2毒素
HT-2毒素
3-玉米赤霉醇
3-玉米赤霉烯醇
α-玉米赤莓醇
-玉米赤霉烯醇
玉米赤霉酮
玉米赤霉烯酮
离子对
722.4/334.4
722.4/352.4
706.4/336.4*
706.4/318.4
489.2/245.2
489.2/327.2
447.1/345.2
447.1/285.2
321.2/277.2*
321.2/303.2
319.2/275.0
319.2/301.0
321.2/277.2
321.2/303.2
319.2/275.0
319.2/301.0
319.1/275.0
319.1/301.0
317.2/175.0
317.2/273.0
表B.1（续）
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳Dwell/
SN/T4604—2016
保留时间/min
SN/T4604—2016
附录C
（资料性附录）
真菌毒素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图真菌毒素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图见图C.1图C.17。wd1al(kwm313.200/24100
E 10mn2014100
ceumtsHeight:9.70e+003cps RT:7.28mins339+004
脚sid-1-afata
酸1000
0.96 1.52
时间/min
95cf 120 from 20141009, wir
Ar00H030
盟5000
时间/min
黄曲霉毒素B，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图wn)315.200/259.1001)
ght:2.01e+003cpsKT:7.0gm
5.51 6.3947.2
时间/min
95 of 110 Erot 2014100g, wifF003cpsRT:7.10m
对间/min
黄曲霉毒素B2标准溶液多反应监测（MRM）色谱图图C.2
rea:1.85e+004coulsHeighl:5.16e+003cpsRT:7.0g4.000-
时间/min
20141009
58e+004.coung
1328:200/24
时间/min
图C.3黄曲需毒素G，标准溶液多反应监测（MRM)色谱图stt-1-afatos
a1.63e+00
)331.100/189.100
时间/min
21(Unknown)331.100/245300Da
mple 95 of 110 from 20141009, will6.88
时间/min
黄曲霉毒素G2标准溶液多反应监测（MRM)色谱图8
a:1.26e+004.cou
100/273.100D
3.cps.RT:6.
Heiwht:4
96of110from20141009.wifr
时间/mm6
a.84e+003
wiglt:1.40e+0
iaensa-sample
SN/T4604—2016
5of110from20141009.wi
时间/min
黄曲霉毒素M，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图200pRT695
std-1-af
fmknos
0)331,100/273.100
reas1.05e+004countsHeight;3.25c3000
时间/min6
9.13.9.62
fm201400
584.69g.20、
时间/min
M标准溶液多反应监测（MRM）色谱图黄曲霉毒素N
std-1-HT2 (Unkown)447.00/345.200 Dnsmple 95 of1101.17e+003countsHeight:2.70e+002cptRT
度200-
时间/min
间/min
HT-2毒素标准溶液多反应监测（MRMD）色谱图图C.7
std-1-T2(Unkt
n)489.200/245.2
200Da-sample95ofd
:433e+ 004
时间/min
nown)489.
Be+004
时间/min
T-2毒素标准溶液多反应监测（MRM）色谱图图C.8
sd-1-fumomisinB (Unknown)722.400/334.400Dale96of110from20141009.wiff
:2.76e+008countsHeight:9.34e+002cpsRT:6.44
时间/min
std-1-fumonisin Bu(Unknomm)722.400/352.400le95of 110 frum 20141009.wiffea:2.37e+003coumsicighe：8.52e+002cpsRT:6.476.42
时间/min
伏马毒素B，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图9.69
SN/T4604—2016
-1mnslB2(Uk64008.400
Ten:4.S4e+0
5261009
镀1000
时间/min
5nf110frmm20141009.wif
a: 2.3le+003omuntsHeight:8.02e+002cpsRT:6.89mof110 fron20141009,wifn
时间/min
伏马毒素B,标准溶液多反应监测（MRM）色谱图-1-
s1:2.58e+004coumtsHeigh:7.40c+003cpsRT:8.246000
时间/min
盟Ed-1
ea5.29e+00MnsHaioh
n20141009.
55e+00
时间/min
赭曲霉毒素A标准溶液多反应监测（MRM）色谱图4.
3.04.05.0
时间/min
1720073:00T
f 110 from20141009. wifr
6fmm20141009.wifr
102.03.040
5.06.07.0
时间/min
玉米赤霉烯酮标准溶液多反应监测（MRM）色谱图-
3o6from20141009.wi
olUnkn
321.200/277.200D
ca:1.75e+004counsBeight:5.91e+003cpsKT:5.07min度1000+
强2000-
1.02.03.0
4.05.06.0
时间/min
图C13
sid-1-t-7mralanol（Unknowm)321.200/303.200Heigh:1.10c+003cps RT:5.07
a3sTu+00
：.5.1.2
3of64from20141009.wif
5176.10.377.097.87
时间/mim
β-玉米赤霉醇标准溶液多反应监测（MRM)色谱图w
3.04.05.0
时间/mina
oetiLnkn
819.200/301,000 Du
rea2.C5e+004o
Baffrom.20141009wil
时间/min
玉米赤霉酮标准溶液多反应监测（MRM)色谱图6.07.0
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。
进出口中药材中真菌毒素的测定Determination of mycotoxins in Chinese herbal medicine for import and export2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施bzxz.net
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4604—2016
本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：聂福平、唐柏彬、杨俊、存显、王国民、李贤良、王昱、吴蕊、田郡、孔德英、杨惠琴。
1范围
进出口中药材中真菌毒素的测定SN/T4604-—2016
本标准规定了进出口中药材中黄曲霉素B、BG1GM、M，者曲霉素A，伏马菌素B、BT-2毒素，HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于进出口当归桔梗、五味子枸杞、大青吐、金银花、地龙中黄曲霉素B、BzG、G2Mi、M2.赭曲霉素A，伏马菌素BI、B2.T-2毒素，HT2毒素，二羟基苯甲酸内脂类真菌毒素的液相色谱-质谱/质谱测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品经PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量4试剂材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2乙睛：色谱纯。
4.3甲酸：色谱纯。
4.4乙酸铵：色谱纯。
4.5十二水磷酸氢二钠。
4.6氯化钾。
4.7磷酸二氢钾。
4.8氯化钠。
4.9浓盐酸。
吐温。
氢氧化钠。
0.1mol/L盐酸溶液：量取9mL浓盐酸（4.9），用水稀释至1000mL。4.13
1mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0g固体氢氧化钠（4.11），用水溶解并稀释至1000mL。4.14pH7.4PBS溶液：称取2.92g十二水磷酸氢二钠（4.5）、0.20g氯化钾（4.6）、0.20g磷酸二氢钾（4.7)和8.00gNaCl(4.8)用900mL水溶解，用0.1mol/L盐酸溶液（4.12）或1mol/L.氢氧化钠溶液（4.13）调节pH值到7.4，用水稀释至1000mI.1
SN/T4604—2016
4.150.1%吐温PBS溶液：称取0.5g叶温，用pH7.4PBS溶液（4.14）溶解并稀释至500mL。4.162mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.151g乙酸铵（4.4），用水溶解并转移至1000ml容量瓶中，加入1mL甲酸（4.3），用水定容至刻度。4.17甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）：量取40ml.甲醇和60mL2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）(4.16），混勾。4.18黄曲霉素B、B2、GI、G2、MI、M2，赭曲霉素A,伏马菌素B1、B，T-2毒素,HT-2毒素，二羟基苯甲酸内脂类标准品：标准物质纯度为≥98%，标准品信息见附录A表A.1。4.19标准储备液：分别准确称取适量标准物质，用乙睛配制成浓度为100ng/mL的标准储备溶液4℃下避光保存。
4.20混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，混合后50℃氮吹至十后用甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）（4.17)重新溶解制成适当浓度的混合标准工作液，4℃下避光保存
4.21免疫亲和柱：Myco6in1TMLC/MS/MS亲和柱，或相当者。4.22滤膜：0.22μm，有机系，
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g。5.3高速均质器
5.4离心机：转速不低于4000t/min，5.5
恒温氮吹装置。
5.6涡旋混合器。
玻璃微纤维滤纸：
5.8粉碎机
试样制备与保存
从所取样品中取出具有代表性样品适量，磨碎混匀后，装人洁净的塑料袋中，密封，并标明标记。7分析步骤
7.1提取
称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加入1g氯化钠，再加入PBS溶液（4.14)25mL，均质提取2min，5000r/min离心10min，将全部上清液用玻璃纤维滤纸过滤后得提取液A：向残渣中加入25mL.甲醇，均质提取2min，5000.r/min离心10min，取上清液10mL，用PBS（4.14）稀释至100mL,用玻璃纤维滤纸过滤后得到提取液B，7.2免疫亲和柱净化
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，将50mL提取液B全部通过免疫亲和柱（流速控制在1滴/s~2滴/s），然后用10mL含0.1%叶温的PBS（4.15）淋洗亲和柱，再将5mL提取液A通过免疫亲和柱（流速控制在1滴/s~2滴/s），待提取液全部通过亲和柱，用5mL含0.1%吐温的PBS(4.15）和20mL水淋洗亲和柱，直至空气进入亲和柱，弃去全部流出液，用2mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在2
KAoNrKAca
SN/T4604—2016
1滴/s），当甲醇大部分过柱时，停止加压，静置孵育5min，再用2mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在1滴/s），收集全部淋洗液：将淋洗液置于40℃下水浴氨气吹干，用1mL甲醇-2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（40：60，体积比）（4.17）溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜，用液相色谱质谱/质谱测定。
液相色谱-质谱/质谱条件
色谱柱：Cls，5μm，2.1mm×150mm；流动相：乙睛（4.2)（A）和2mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（4.16)（B）梯度洗脱；流速：0.3mL/min；
进样量：20L；
柱温：40℃：
黄曲霉素BI、B2、GI、Gz、M,、M2.赭曲霉素A,伏马菌素BI、B,,T-2毒素和HT-2毒素梯度洗脱程序见表1；二羟基苯甲酸内脂类梯度洗脱程序见表2。表1梯度洗脱程序1
梯度时间/min
梯度时间/inin
质谱条件
离了源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：正离子或负离子；
监测方式：多反应监测（MRM)；参考条件参见附录B。
流动相A/%
梯度洗脱程序2
流动相A/%
流动相B/%
流动相B/%
-TrKAONiKAca
SN/T4604—2016
7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定
按照7.3.2液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的真菌毒素残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。标准溶液多反应监测色谱图参见附录C中图C.1～图C.17。7.3.4阳性样品的确证
被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
7.3.5空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行结果计算和表述
20%~50%
￥10%~20%
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中待测物的含量，计算结果应扣除空白值：X1000
mx1000
式中：
试样中待测物质的含量，单位为微克每千克（ug/kg）：C
从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每升（g/L)；样液最终定容体积，单位为毫升（IL）：最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。9检测低限和回收率
9.1检测低限
本方法的检测低限：黄曲霉毒素B、Bz、G,G2、M1、M2、赭曲霉毒素A和二羟基苯甲酸内脂类为1μg/kg，伏马毒素B、B,为5pμg/kg，T-2毒素、HT-2毒素为10μg/kg9.2回收率
当归、桔梗、五味子、枸杞、大青叶、金银花和地龙中添加17种真菌毒素的添加浓度及回收率数据参见附录D中表D.1。
kAoNiKAca
真菌毒素标准品信息见表A.1。
黄曲霉毒素B
黄曲霉毒素B2
黄曲霉毒素G
黄曲霉毒素G2
黄曲葡毒素M，
黄曲霉莓素M
赭曲霉毒素A
伏马毒素 B
伏马毒索 Bz
T-2毒素
HT-2毒素
3-玉米赤霉醇
β-玉米赤霉烯醇
α-玉米赤霉醇
α-玉米赤霉烯醇
玉米赤霉酮
玉米赤霉烯酮
英文名称
AflatoxinB
AflatoxinB2
AflatoxinG
AflatoxinG2
AflatoxinM,
AflatoxinM
附录A
（规范性附录）
真菌毒素标准品信息
真菌毒素标准品信息
CAS号
1162-65-8
7220-81-7
1165-39
7241-98-7
6885-57-0
OchratoxinA
FumonisinB
Fumonisin Bz
T-2toxin
HT-2toxin
β-Zearalanol
β-Zearalenol
α-Zearalanol
α-Zearalenol
Zearalanone
Zearalenone
303-47-9
116355-83-0
16355-84
21259-20-1
34-87-2
22-68-4
71030-11
26538-44-3
36455-72-8
5975-78-0
17924-92-1
分子式
Ch,HizO,
CHCING
CheHaao
SN/T 4604—2016
相对分子质量
-riKAoNiKAca
SN/T4604—2016
B.1正离子模式检测条件：
电喷雾电压（IS）：5500V；
附录BB
（资料性附录）
质谱仪器参考条件
雾化气压力（GS1）：70Psi(0.5MPa）气帘气压力（CUR）：30Psi(o.2MPa)；辅助气压力（GS2）：60Psi(0.4MPa）；离子源温度（TEM）：600℃；
去簇电压（DP）碰撞电压（CE）、碰撞室入口电压（EP)和碰撞室出口电压（CXP)见表B.1。B.2
负离子模式检测条件：
电喷雾电压（IS)：—4500V；
雾化气压力（GSD)：35Psi(0.2MPa)：气帘气压力（CUR）：4oPsi(o.3MPa)；辅助气压力（GS2)：60Psi(0.4MPa)；离子源温度（TEM）：550℃：
去簇电压（DP）、碰撞电压（CE)、碰撞室人口电压（EP)和碰撞室出口电压（CXP)见表B.1。表B.1
待测物定性离子对、定量离子对、锥孔电压、去簇电压碰撞室入口电压及碰撞室出口电压化合物
黄曲霉毒素B
黄曲霉毒素Bz
黄曲霉毒东G
黄曲霉春素G
黄曲霉毒素M
黄曲霉毒素M
精曲毒毒素A
离子对
313.2/241.1
313.2/285.3
315.2/259.1*
315.2/287.1
329.2/200
329.2/243.1
331.1/189.1*
331.1/245.3
329.1/273.1
329.1/259.2
331.1/273.1*
331.1/285.1
404.0/358.2*
404.0/239.1
Dwell/
保留时间/min
非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在ABAPI4000液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅1
为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
-iiKAoNiKAca
化合物
伏马毒素B
伏马毒素Bz
T-2毒素
HT-2毒素
3-玉米赤霉醇
3-玉米赤霉烯醇
α-玉米赤莓醇
-玉米赤霉烯醇
玉米赤霉酮
玉米赤霉烯酮
离子对
722.4/334.4
722.4/352.4
706.4/336.4*
706.4/318.4
489.2/245.2
489.2/327.2
447.1/345.2
447.1/285.2
321.2/277.2*
321.2/303.2
319.2/275.0
319.2/301.0
321.2/277.2
321.2/303.2
319.2/275.0
319.2/301.0
319.1/275.0
319.1/301.0
317.2/175.0
317.2/273.0
表B.1（续）
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳Dwell/
SN/T4604—2016
保留时间/min
SN/T4604—2016
附录C
（资料性附录）
真菌毒素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图真菌毒素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图见图C.1图C.17。wd1al(kwm313.200/24100
E 10mn2014100
ceumtsHeight:9.70e+003cps RT:7.28mins339+004
脚sid-1-afata
酸1000
0.96 1.52
时间/min
95cf 120 from 20141009, wir
Ar00H030
盟5000
时间/min
黄曲霉毒素B，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图wn)315.200/259.1001)
ght:2.01e+003cpsKT:7.0gm
5.51 6.3947.2
时间/min
95 of 110 Erot 2014100g, wifF003cpsRT:7.10m
对间/min
黄曲霉毒素B2标准溶液多反应监测（MRM）色谱图图C.2
rea:1.85e+004coulsHeighl:5.16e+003cpsRT:7.0g4.000-
时间/min
20141009
58e+004.coung
1328:200/24
时间/min
图C.3黄曲需毒素G，标准溶液多反应监测（MRM)色谱图stt-1-afatos
a1.63e+00
)331.100/189.100
时间/min
21(Unknown)331.100/245300Da
mple 95 of 110 from 20141009, will6.88
时间/min
黄曲霉毒素G2标准溶液多反应监测（MRM)色谱图8
a:1.26e+004.cou
100/273.100D
3.cps.RT:6.
Heiwht:4
96of110from20141009.wifr
时间/mm6
a.84e+003
wiglt:1.40e+0
iaensa-sample
SN/T4604—2016
5of110from20141009.wi
时间/min
黄曲霉毒素M，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图200pRT695
std-1-af
fmknos
0)331,100/273.100
reas1.05e+004countsHeight;3.25c3000
时间/min6
9.13.9.62
fm201400
584.69g.20、
时间/min
M标准溶液多反应监测（MRM）色谱图黄曲霉毒素N
std-1-HT2 (Unkown)447.00/345.200 Dnsmple 95 of1101.17e+003countsHeight:2.70e+002cptRT
度200-
时间/min
间/min
HT-2毒素标准溶液多反应监测（MRMD）色谱图图C.7
std-1-T2(Unkt
n)489.200/245.2
200Da-sample95ofd
:433e+ 004
时间/min
nown)489.
Be+004
时间/min
T-2毒素标准溶液多反应监测（MRM）色谱图图C.8
sd-1-fumomisinB (Unknown)722.400/334.400Dale96of110from20141009.wiff
:2.76e+008countsHeight:9.34e+002cpsRT:6.44
时间/min
std-1-fumonisin Bu(Unknomm)722.400/352.400le95of 110 frum 20141009.wiffea:2.37e+003coumsicighe：8.52e+002cpsRT:6.476.42
时间/min
伏马毒素B，标准溶液多反应监测（MRM）色谱图9.69
SN/T4604—2016
-1mnslB2(Uk64008.400
Ten:4.S4e+0
5261009
镀1000
时间/min
5nf110frmm20141009.wif
a: 2.3le+003omuntsHeight:8.02e+002cpsRT:6.89mof110 fron20141009,wifn
时间/min
伏马毒素B,标准溶液多反应监测（MRM）色谱图-1-
s1:2.58e+004coumtsHeigh:7.40c+003cpsRT:8.246000
时间/min
盟Ed-1
ea5.29e+00MnsHaioh
n20141009.
55e+00
时间/min
赭曲霉毒素A标准溶液多反应监测（MRM）色谱图4.
3.04.05.0
时间/min
1720073:00T
f 110 from20141009. wifr
6fmm20141009.wifr
102.03.040
5.06.07.0
时间/min
玉米赤霉烯酮标准溶液多反应监测（MRM）色谱图-
3o6from20141009.wi
olUnkn
321.200/277.200D
ca:1.75e+004counsBeight:5.91e+003cpsKT:5.07min度1000+
强2000-
1.02.03.0
4.05.06.0
时间/min
图C13
sid-1-t-7mralanol（Unknowm)321.200/303.200Heigh:1.10c+003cps RT:5.07
a3sTu+00
：.5.1.2
3of64from20141009.wif
5176.10.377.097.87
时间/mim
β-玉米赤霉醇标准溶液多反应监测（MRM)色谱图w
3.04.05.0
时间/mina
oetiLnkn
819.200/301,000 Du
rea2.C5e+004o
Baffrom.20141009wil
时间/min
玉米赤霉酮标准溶液多反应监测（MRM)色谱图6.07.0
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。