SN/T 1865-2016
基本信息
标准号:
SN/T 1865-2016
中文名称:出口动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
标准类别:商检行业标准(SN)
标准状态:现行
出版语种:简体中文
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相关标签:
出口
动物
食品
中甲
霉素
残留量
测定
色谱
质谱
质谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 1865-2016.Determination of thiamphenicol , florfenicol and florfenicol amine residues
in animal-derived food for export-LC-MS/MS method.
1范围
SN/T 1865规定了动物源性食品中甲砜霉素.氟甲砜霉素和氟苯尼考胺药物残留测定的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。
SN/T 1865适用于猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪肝、猪肾、肠衣、蜂蜜和牛奶中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺残留量的检测
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法原理
样品经氨化乙酸乙酯提取,牛奶加三氯乙酸沉淀蛋白.调节溶液pH至中性后,再用氨化乙酸乙酯提取,C18固相萃取柱净化,液相色谱-质谱;质谱法测定.外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为分析级.水为符台GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙酸乙酯。
除另有说明外,所用试剂均为分析级.水为符台GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙酸乙酯。
4.2甲醇。
4.3甲酸。
4.4三氯乙酸。
4.5无水硫酸钠 :650℃灼烧4 h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。
4.6氨水:含量为 25%~28%。
4.7氢 氧化钠。
4.8氯化钠。
4.9氨化乙酸乙酯(3+97):量取 3 mL氨水和97 mL乙酸乙酯,混匀。
标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1865—2016
代替SN/T1865—2007
出口动物源食品中甲砜霉素、氟甲霉素和氟苯尼考胺残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of thiamphenicol,florfenicol and florfenicol amine residuesinanimal-derivedfoodforexport-LC-MS/MSmethod2016-06-28发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-02-01实施
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
出口动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T1865—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室:(010)68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
2017年7月第一版
印张1.75
字数51千字
2017年7月第一次印刷
印数1—1100
书号:155066·2-31343
定价27.00元
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。SN/T1865—2016
本标准代替SN/T1865一2007《进出口动物源性食品中甲砜霉素、氟甲霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法》。
本标准与SN/T1865—2007相比主要技术变化如下:修改了标准名称;
将“本标准适用于虾、鱼、禽肉、肠衣和蜂蜜中甲砜霉素、氟甲矾霉素”修改为“本标准适用于猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪肝、猪肾、肠衣、蜂蜜和牛奶中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺”(见第1章,2007年版第1章);
增加“规范性引用文件”(见第2章)。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:浙江省检验检疫科学技术研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:谢文,侯建波,于卓然,史颖珠、黄超群、钱艳、何建敏。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:SN/T1865—2007。
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1范围
出口动物源食品中甲霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法bZxz.net
SN/T1865—2016
本标准规定了动物源性食品中甲矾霉素、氟甲矾霉素和氟苯尼考胺药物残留测定的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪肝、猪肾、肠衣,蜂蜜和牛奶中甲矾霉素、氟甲矾霉素和氟苯尼考胺残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理
样品经氨化乙酸乙酯提取,牛奶加三氧氯乙酸沉淀蛋白.调节溶液pH至中性后,再用氨化乙酸乙酯提取,C1固相萃取柱净化,液相色谱-质谱/质谱法测定,外标法定量,4试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为分析级。水为符台GB/T6682规定的一级水。4.1
乙酸乙酯。
4.2甲醇。
4.3甲酸。
三氯乙酸。
无水硫酸钠:650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。4.6
氨水:含量为25%28%。
氢氧化钠。
氯化钠。
氨化乙酸乙酯(3十97):量取3mL氢水和97mL乙酸乙酯,混勾。4.10
氯化钠溶液(1.5g/L):称取15g氯化钠,溶于水,稀释至100mL。4.115mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠.并用水稀释至100mL。2三氯乙酸溶液(1000g/L):称取100g三氯乙酸,溶于水,稀释至100mL。4.12
3标准品:甲砜霉素(thiamphenicol,C2HisClzNO,S,CAS号15318-45-3),氟甲霉素标准品(florfenicol,C2HNO,Cl,SF.CAS号76639-94-6),氟苯尼考胺(florfenicolamine.CH1FNO,S,1
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SN/T1865—2016
CAS号76639-93-5),纯度均大于或等于99%。4.14标准储备溶液的配制:分别称取适量标准品(4.13)(精确至0.1mg),用甲醇溶解定容,各化合物溶液浓度均为1mg/mL,1℃~4℃冰箱避光保存。有效期6个月。4.15混合标准工作溶液的配制:临用前用甲醇-水(3十7)将标准储备溶液(4.14)稀释至适当浓度作为混合标准工作液,1℃~4℃冷藏保存。4.16无水硫酸钠柱:80mm×40mm(内径)筒形漏斗,底部垫5mm脱脂棉,再装40mm无水硫酸钠。Cls固相萃取柱:500mg,3mL或相当者,使用前依次用5mL甲醇和5mL水预洗。4.17
微孔滤膜:0.22μm,有机相。
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。2天平:感量为0.0001g和0.01g。5.2
固相萃取装置。
5.4离心机:大于或等于3000r/min和6000r/min各一台。5.5旋涡混合器。
减压浓缩仪。
具塞离心管:聚丙烯,50mL。
试样制备与保存
6.1要求
在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生药物残留含量的变化。6.2猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪肝和猪肾取500g代表性样品,在室温下解冻,待样品全部融化后破碎,将试样均分成两份,分别装人样品瓶中,密封,并标明标记。一份作为试验样,另一份在一18℃以下保存。6.3肠衣
取300g有代表性样品,在室温下解冻,待样品全部融化后用剪刀剪碎,将试样均分成两份,分别装人样品瓶中,密封,并标明标记。一份作为试验样,另一份在一18℃以下保存。6.4蜂蜜
蜂蜜样品:取500g代表性蜂蜜样品,未结晶的样品将其用力搅拌均勾,有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后,置于不超过60℃的水浴中温热,等样品全部融化后搅勾,迅速冷却至室温。在融化时必须注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份,分别装人样品瓶中,密封,并标明标记,于常温下存放。7分析步骤
7.1提取
7.1.1猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪肝、猪肾、肠衣称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中,加25mL氨化乙酸乙酯(4.9),涡旋1min,以2
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3000r/min离心5min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱(4.16),收集于浓缩瓶中,样品残渣再加人25mL氨化乙酸乙酯(4.9),重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在40℃以下水浴减压浓缩至近干,加10mL水溶解残渣待净化。7.1.2蜂蜜
称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中,加15mL15%氯化钠溶液(4.10),混匀,加25mL氨化乙酸乙酯(4.9),涡旋1min,以3000r/min离心5min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱(4.16),收集于浓缩瓶中,样品残渣再加人25mL氨化乙酸乙酯(4.9),重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在40℃以下水浴减压浓缩至近干,加10mL水溶解残渣待净化。7.1.3牛奶
称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中,加10mL水和1mL50%三氯乙酸溶液(4.12)加水至20mL,混匀,以6000r/min离心5min,精密移取10mL上清液,用氢氧化钠溶液(4.11)调节溶液pH至7,加25mL氨化乙酸乙酯,涡旋1min,以3000r/min离心5min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱(4.16),收集于浓缩瓶中,样品残渣再加人25mL氨化乙酸乙酯(4.9),重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在40℃以下水浴减压浓缩至近干,加5mL水溶解残渣待净化7.2净化
准确移取0.5mL上述溶液(7.1),定量转移至C18固相萃取柱中(4.17),控制流速1mL/min~2mL/min,用10mL水淋洗,抽干,再用5mL甲醇洗脱,收集洗脱液,在40℃以下水浴中用氮气吹至近干,用5.0mL甲醇-水(3+7)定容,混匀,溶液过0.224m滤膜(4.18),供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.3测定
液相色谱条件
条件如下:
液相色谱柱:C,150mm×4.6mm(内径),粒度5um,或相当者。a)
流动相梯度洗脱程序见表1。
流速:0.4mL/min。
d)进样量:20μL。
表1流动相洗脱梯度表
时间/min
质谱条件
条件如下:
甲醇/%
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离子源:电喷雾离子源。
扫描方式:正离子扫描(0min~6.5min)和负离子扫描(6.5min~10min)。b)
检测方式:多反应监测。
d)雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气:使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求,参考条件及监测离子对(m/)参见附录A。7.4定量测定
根据试样中被测物的含量情况,选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析,标准曲线工作液应有5个浓度水平,应包括零点。混合标准工作液和待测液中化合物的响应值应在仪器检测的线性响应范围内。如果样品中待测物含量超过线性范围.应用定容溶剂稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下氟苯尼考胺、甲霉素和氟甲砜霉素的参考保留时间分别约为3.0min,8.2min,8.5min,标准溶液的选择性离子流图参见附录B。
7.5定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和标准工作溶液,如果试样中待测物质的保留时间与标准工作液一致,保留时间偏差在土2.5之内:定性离子对的相对丰度,是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示,应当与浓度相当标准工作液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表2的规定,则可判断样品中存在对应的待测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
空白试验
除不加试样外,均按上述操作步骤进行。8结果计算和表述
>20%~50%
>10%~20%
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中分析物的含量.计算结果需扣除空白值:X,=;×1 000
式中:
X;—试样中分析物的残留量,单位为微克每千克(ug/kg);C
从标准曲线上得到的药物残留量的溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);样液最终定容体积,单位为毫升(mL);最终样液代表的试样质量,单位为克(g)。9测定低限、回收率
9.1测定低限
本标准方法测定低限均为10μg/kg。4
≤10%
*(1)
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9.2回收率
猪肉中甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为98.8%~106%;添加浓度在20pg/kg时,回收率范围为98.0%~104%:添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为93.4%~102%。猪肉中氟甲霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为101%~107%;添加浓度在200g/kg时,回收率范围为72.5%~89.0%;添加浓度在300μg/kg时,回收率范围为70.7%~83.7%。猪肉中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时.回收率范围为76.0%~89.6%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为70.0%~79.0%:添加浓度在300严g/kg时,回收率范围为70.3%79.0为。鸡肉中甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为94.5%109%;添加浓度在20μg/kg时.回收率范围为88.0%~109%;添加浓度在50μg/kg时.回收率范围为94.0%~110%。鸡肉中氟甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时.回收率范围为76.6%~109%:添加浓度在100μg/kg时,回收率范围为72.5%~89.9为:添加浓度在300μg/kg时,回收率范围为72.3%~95.7%。鸡肉中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为79.0%89.5%:添加浓度在100μg/kg时,回收率范围为70.1%~87.2%;添加浓度在300μg/kg时,回收率范围为73.0%~86.3%。鱼肉中甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时.回收率范围为93.2%~103%:添加浓度在20μg/kg时.回收率范围为92.5%~104%:添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为91.0%~103%,鱼肉中氟甲砜毒素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为87.9%~108%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为71.0%~85.5%;添加浓度在1000μg/kg时,回收率范围为73.6%~78.7%。鱼肉中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在101g/kg时,回收率范围为71.7%~88.6%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为71.0%~79.0%;添加浓度在1000g/kg时,回收率范围为70.1%~81.9%。虾肉中甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为92.4%~103%;添加浓度在20g/kg时,回收率范围为91.3%107%:添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为89.8%107%。虾肉中氟甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:SN/T1865—2016
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SN/T1865—2016
添加浓度在10pg/kg时,回收率范围为93.4%~114%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为70.5%~86.5%;添加浓度在1000μg/kg时,回收率范围为70.4%~84.9%。虾肉中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10pg/kg时,回收率范围为74.2%~89.2%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为67.9%~82.2%;添加浓度在1000μg/kg时,回收率范围为69.5%~82.9%。猪肝中甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10pg/kg时,回收率范围为96.1%~108%;添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为101%~106%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为97.0%~107%。猪肝中氟甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为100%~108%:添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为76.5%~100%;添加浓度在2500μg/kg时,回收率范围为85.2%~94.4%。猪肝中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为74.5%~85.0%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为70.0%~82.5%;添加浓度在2500μg/kg时,回收率范围为70.0%~80.0%。猪肾中甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为96.0%~106%:添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为100%103%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为88.0%~107%。猪肾中氟甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为94.6%~105%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为75.5%~95.0%;添加浓度在500μg/kg时,回收率范围为81.8%88.6%。猪肾中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为83.4%~87.0%;添加浓度在200μg/kg时,回收率范围为78.5%~87.0%;添加浓度在500μg/kg时,回收率范围为78.0%~91.0%。肠衣中甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10ug/kg时,回收率范围为92.8%~98.4%;添加浓度在20ug/kg时,回收率范围为98.5%~105%添加浓度在50ug/kg时,回收率范围为92.6%102%。肠衣中氟甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10产g/kg时,回收率范围为97.6%~106%添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为102%~106%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为99.0%~105%。肠衣中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为70.8%~78.1%;添加浓度在20=g/kg时,回收率范围为75.5%82.0%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为71.4%~79.2%。o
蜂蜜中甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为97.8%104%;添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为104%~107%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为91.6%~106%。蜂蜜中氟甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为101%~107%;添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为106%~108%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为93.2%~107%。蜂蜜中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为70.5%~86.8%;添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为78.5%~86.0%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为77.2%84.8%。牛奶中甲砜霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为99.1%~105%添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为97.5%~108%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为92.8%~108%。牛奶中氟甲矾霉素在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10μg/kg时,回收率范围为98.8%~108%添加浓度在20μg/kg时,回收率范围为102%~108%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为99.0%~106%。牛奶中氟苯尼考胺在不同添加浓度水平下的回收率范围:添加浓度在10g/kg时,回收率范围为71.7%~78.3%;添加浓度在20g/kg时,回收率范围为70.5%~79.0%;添加浓度在50μg/kg时,回收率范围为72.4%~79.0%。SN/T1865—2016
SN/T1865—2016
附录A
(资料性附录)
API4000QLC-MS/MS系统电喷需离子源参考条件1A.1
电喷雾电压(IS):4500V,-4500VA.2
雾化气压力(GS1):413.7kPa(60psi)。A.3
气帘气压力(CUR):186.16kPa(27psi)。A.4
辅助气流速(GS2):413.7kPa(60psi)。A.5
离子源温度(TEM):525℃。
碰撞气(CAD):5
定量离子对、定性离子对、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE).碰撞室出口电压(CXP)及相对保留A.7
时间见表A.1。
定量离子对、定性离子对、去簇电压、碰撞气能量、碰撞室出口电压编号
化合物
氟苯尼考胺
甲砜需素
氟甲矾霉素
离子对(m=)
247.7/230.0*
247.7/130.0
353.9/185.1*
353.9/290.0
356.0/335.7
356.0,185.1
注:带“。“为定量离子对。
去谦电压
碰撞气能量
(CE)/V
碰撞室出口
电压(CXP)\V
电离模式
1)非商业性声明:附录表A.1所列参数是在API4000Q质谱仪完成的,此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考·并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。8
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