QB/T 5483-2020.Chemical disinfectants and antiseptics-Fungicidal activity一Test method and requirements.
QB/T 5483规定了一种检验化学消毒剂与杀菌剂杀真菌活性的试验方法。
QB/T 5483适用于评价试样原样或用水稀释后可形成均匀的、物理上稳定的化学消毒剂与杀菌剂的杀真菌活性试验。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室 用水规格和试验方法
SNT 1538.2培养基制备指南 第2部分:培养基性能测试实用指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1杀真菌活性fungicidal activity在设定条件下使相关试验菌(酵母菌和霉菌孢子)的活菌细胞数降低的能力。
3.2杀酵母菌活性yeasticidal activity在设定条件下使相关产品中酵母菌的活菌细胞数降低的能力。
4符号
下列符号适用于本文件。
A:每毫升条件控制试验混合物所含菌落数。
B:每毫升中和或过滤控制试验混合物所含菌落数。
C:每毫升方法证实试验混合物所含菌落数。
N:每毫升试验菌悬液所含菌落数。
Na:每毫升试验混合物在作用时间结束后，以及中和或膜过滤之前每毫升所含的菌落数。
Ny:每毫升验证菌悬液所含菌落数。
No:混合物A、B与C在试验时间开始时每毫升所含菌落数。
No:每毫升试验混合物在作用时间开始时所含菌落数。
Vc值:记录的所有试验数据均作为Vc值。稀释-中和法中，Vc值为每 1.0 mL混合物样液所形成菌落数;膜过滤法中，Vc值为每0.1 mL试验混合物及控制试验中每1.0 mL样液混合物所形成菌落数。
5方法提要

ICS67.220.20
分类号：X38
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5483-2020
化学消毒剂与杀菌剂
杀真菌活性
试验方法和要求
Chemical disinfectants and antiseptics-Fungicidal activityTestmethod and requirements
2020-04-16发布
中华人民共和国工业和信息化部发布
2020-10-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国食品用洗涤消毒产品标准化技术委员会（SAC/TC39S）归口。QB/T5483-2020
本标准起草单位：中国日用化学研究院有限公司[国家洗涤用品质量监督检验中心（太原）】、表面活性剂和洗涤剂行业生产力促进中心、苏州世谱检测技术有限公司。本标准主要起草人：公培龙、姚晨之、李晓辉、李晓婷、李晓睿、孟丽君、卢剑。本标准为首次发布。
1范围
QB/T5483-2020
化学消毒剂与杀菌剂杀真菌活性试验方法和要求本标准规定了一种检验化学消毒剂与杀菌剂杀真菌活性的试验方法。本标准适用于评价试样原样或用水稀释后可形成均匀的、物理上稳定的化学消毒剂与杀菌剂的杀真菌活性试验。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
杀真菌活性fungicidalactivity在设定条件下使相关试验菌（酵母菌和霉菌孢子）的活菌细胞数降低的能力。3.2
杀酵母菌活性yeasticidalactivity在设定条件下使相关产品中酵母菌的活菌细胞数降低的能力。4符号
下列符号适用于本文件。
A：每毫升条件控制试验混合物所含菌落数。B：每蓄升中和或过滤控制试验混合物所含菌落数C：每毫升方法证实试验混合物所含菌落数。N：每毫升试验菌忌液所含菌落数。Na：每毫升试验混合物在作用时间结束后，以及中和或膜过滤之前每毫升所含的菌落数。N：每毫升验证菌悬液所含菌落数。No：混合物A、B与C在试验时间开始时每毫升所含菌落数。No:每毫升试验混合物在作用时间开始时所含菌落数。Vc值：记录的所有试验数据均作为Vc信。稀释-中和法中，Vc值为1.0mL混食物样液所形成菌落数；膜过滤法中，Vc值为每0.1mL试验混合物及控制试验中每1.0mL样液混合物所形成菌落数。
5方法提要
将试样原样或用水稀释后加入试验菌悬液，保持混合物丁确定温度下作用一定时间，使试样的杀真菌作用被立即中和，然后确定样品中存活的真菌数，并计算活菌数减少的量，确定试样的杀真菌能力。1
QB/T5483—2020
6材料与试剂
6.1试验菌
用以下菌种作为试验菌，评价杀真菌活性：白色念珠茵ATCC10231；
一黑曲霉菌ATCC16404。
评价杀酵母菌能力时仅使用白色念珠菌即可。这些试验菌要求的培养温度是（30土1）℃。若使用增加的菌种，应在该菌种最佳生长条件下（温度、时间、空气、培养基）对其进行培养，并在试验报告中注明。6.2培养基与试剂
6.2.1常规试剂
本标准中所有化学物质均指其无水盐，水合物形式作备用，当使用水合物形式时应调整所要求的质量。
试剂应是分析级别或适用于微生物，而且不含对试验菌有毒的或抑制作用的物质。为了提高真菌繁殖能力，应使用商业上可用的脱水材料来制备培养基，严格遵守关丁这些产品制备的生产说明书。
所用水应是GB/T6682三级或以上的水，并于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。注1：若水被用于制备赔养基并随后进行灭菌，则不必进行高压蒸汽灭菌。注2：亦可使用注射制剂用水，
6.2.3麦芽浸粉琼脂MEA）
麦芽浸粉琼脂，由以下成分组成：麦芽浸粉，30.0g：
——大豆蛋白陈，3.0g
琼脂：15.0g：
水，定容至1000mL
高压蒸汽灭菌锅内灭菌后，培养基的pH于（20士1）℃下测量应为5.6土0.2培养基制备应符合SN/T1538.2
注：为避免中和时遇到间题，必要时可将中和剂加入M正A，6.2.4稀释液
胰蛋白陈氯化钠溶液做稀释液：胰蛋白陈，（胰腺对酪蛋白的分解物），1.0g；一氯化钠（NaCI），8.5g：
水，定容至1000mL。
高压蒸汽灭菌锅内灭菌后，培养基的pII手（20士1）℃C下测量应为7.0士0.2。6.2.5中和剂
按照附录A检验针对试验样品所用的中和剂。注：附录B中可以找到对一些产品适合的中和剂6.2.6洗液（用于膜过滤法）
对基于试验样品的洗液进行验证，该洗液的结果应是无菌的，且在试验所描述的条件下，与所用滤膜相符并具有透过滤膜的过滤能力。7设备和玻璃仪器
7.1通则
QB/T5483-2020
使用下列方法的
对所有的玻璃仪器和能接触到培养基和试剂或样品的部分设备（除无菌的）一种
进行灭菌：
湿热灭菌法，用高玉蒸汽灭菌锅：千热灭菌法，用干热灭菌器
7.2常用微生物试验设备及特殊设备7.2.1灭菌设备
对于湿热灭菌法，高压天菌锅在（121土3）°C下最短保留时间为15min对于干热灭菌法，千热灭菌器在（180士5）C下最短保留时间为30min，或在（170±5）℃下最
短保留时间为1h，或在（160土5）5PC下最短保留时间为2h
7.2.2水浴锯
应控制在（20土1）℃（45）℃（用以保持溶化的MEA可倾注于平血）以及增加的试验温度±1℃。
7.2.3培养箱
应控制在（30±1）℃
7.2.4pH计
（20±1）℃下，精度为0.1pH。注：使用穿孔电极或膜电极测量玩脂培养基的P。7.2.5秒表
7.2.6涡流搅拌器
电动搅拌器或机械振动器。
7.2.7过滤器
由与待过滤的物质相得的材料组成，应配备容积不小于50mL的接液器。直径为47mm~50mm，孔径为0.45μm。
应提供稳定的过滤流量，在20s～40s得到100mL过滤液，使微生物均匀分布在膜上。7.2.8冰箱
应控制在2°8℃
7.2.9吸管
0.1mL、1mL和10mL，或带有刻度的自动吸管或数字可调移液器及配套用一次性塑料吸头。7.2.10培养血www.bzxz.net
直径为90mm
7.2.11玻璃珠
粒径3mm~4mm
7.2.12容器
试管或适当容量的烧瓶、容量瓶、锥形瓶。8试验菌悬液与试样溶液制备
8.1试验菌悬液
对于每种试验菌，应制备两种不同的悬液：用于试验的“试验菌悬液”，用于控制和方法验证的“验证菌悬液”。
OB/T5483-2020
8.1.2试验菌的保藏与母代培养物制备试验菌及其母代培养物
8.1.3试验菌的工作培养物
应符合微生物保藏传代要
8.1.3.1白色念珠菌（酵母菌）
为制备白色念珠菌试验菌的工作培养物，将源于母代的培养物接种于MEA斜面或平皿，并培养得到第1代培养物。42h~48h后，用同样的方法山第1代培养物制备第2代培物，并培养42h~48h。。第2代和第3代培养物为工作培养物。以同样的方法，由第2代培养物制备第3代培养物。若在特定时间未得到第2代培养物，在随后的传代中可采用72五的培养物，即将第1代培养物保留在培养箱内72h
8.1.3.2黑曲霉茵（菌
仅使用将源于母代培养物接种于MEA料面或平皿上增养9d～11d的第1代培养物。8.1.3.3其他增加的菌种
其他增加的酵母菌和需菌按各自要求进行培养使用。8.1.4试验菌悬液（N）
8.1.4.1白色念珠菌
取10mL稀释剂，置于含适量玻璃珠的100mL锥形瓶内，用接种环取数环工作培养菌至稀释剂中。接种环在锥形瓶壁与液面接触处涂扶以便移出菌，便真菌分散在稀群剂中用机械振动器振摇锥形瓶3min。吸取锥形瓶中的悬液，并移至另一试管。用稀释液调整感液中菌数为1.5×107CFU/mL~5.0×107CFU/mL，用任一适用的方法估测其菌落数。保持悬液恒温于试验温度（6王1）℃的水浴锅中，并于2h内使用。用分光光度计调整细茵数（波长约620mm，口径长为10mm的比色管）。实验室应对每一种试验荫进行数据校准，从而得到适合的光宽度值，一般在0.150与0460之间找到合适的数据。也可选用细菌油度仪调整菌液浓度。
为便于计数，用稀释剂制备10和10-试验菌忍液稀释液，混匀。分取每种稀释液1.0m的样品，式两份，采用倾注平板法或者涂布平板法进行培养使用倾注平板法时，将每份1.0mL样品移入不同的培养血，并加入15mL~20mL冷却至（45土1）℃的MEA。
使用涂布平板法时，将每份1.0mL样品涂布于MEA平板（至少两个）表面培养与计数。8.1.4.2黑曲霉菌
用玻璃棒或刮刀取增养的黑曲蒋菌到含适量玻璃珠的100mL链形瓶内合0.05%聚山梨醇酯80的水溶液10mL）内，用手轻播1min，然后用振荡器震荡。用400倍显微镜观察菌液中是香有菌丝片段和发芽的孢子，若出现发芽泡子，则此菌悬液不可用若仪出现菌丝，转移悬液到离心管中，在离心机中以2000r/mim离心20min，用稀释剂至少洗涤离心则重复洗涤至无菌丝
两次，若仍有菌丝，
用稀释液调整悬液中菌数为1.5×107CFU/mL~5.0x107CFUmL，用任一适用的方法估测其菌落数。保持悬液恒温于试验温度的水浴锅中，并于4h内使用。该菌悬液可以在冰箱中冷藏保存2d，再次使用前应检查有无孢子。
8.1.5验证菌悬液（N）
用稀释剂稀释试验菌悬液，以制备验证菌悬液，得到菌数为3.0x10°CFU/mL～1.6×103CFU/mL为便于计数，用稀释剂制备101稀释液，混匀。分取1.0mL样品，采用倾注平板法或涂布平板法进行培养与计数。
8.1.6试验菌悬液和验证菌悬液的培养与计数QB/T5483-2020
平血培养42h~48h。剔险不可计数的平血，做平血计数，确定菌落形成单位数。对黑曲霉菌需要继续培养20h～24h，如菌落数还有增加，再进行20h～24h培养。对不能形成明显分离菌落的平血不进行计数，对剩下的平血计数。若菌数增加，仅采用较高的数做进一步评价。记录每一平Ⅲ的确切菌落数，当霉菌大于165时，记录>165，酵母菌大于330时，则记录>330，确定Vc值。
应用所给方法，计算试验菌悬液（N）及验证菌悬液（Nv）的菌落数。8.2试样溶液
试样溶液的浓度应是所需试验浓度的1.25倍，因为在试验及证实法期问，试样溶液会被稀释至80%现配试样溶液，并于2h内用于试验。应得到物理上均相的制剂，其在整个程序中应是稳定的。若在操作程序期间，因生成沉淀或絮状物的形成而出现可视的非均相现象，则应在试验报告中注明。对丁固体产品，应溶解得到所需产品，至少称取1.0g土10mg产品于容量瓶中，用水稀释。在容量瓶中，以体积比的形式用水制备随后的稀释液（较低的浓度）。对于液体产品，在容量瓶中，以体积比的形式用水制备产品稀释液。注：对沉淀物或累状物中的敬生物进行计数困难且结果不可靠，在试验报告中，产品浓度应是试验所需浓度。以质量体积比或体积比形式报告试验浓度。9评价产品杀菌活性的程序
9.1常规要求
9.1.1试验条件
除了作用温度、作用时间和试验菌之外，可能需选择增加的试验条件如下：a）作用温度（以℃表示）：
一必需测试温度为20℃
增加的温度可从4℃、10℃或40℃中选择：一每一所选温度允许偏离的范围为土1℃。b）作用时间（以min表示）：
一必需测试时间为15min：
一一增加的作用时间可从1min、5min、30min或60min中选择，也可根据产品的实际使用情况选择测试时间：
每一所选作用时间允许偏离的范围为土10s（1min允许偏差为土5s）。c）试验菌种：
一对于杀真菌活性试验其试验菌为：白色念珠菌和黑曲掌菌：一对于杀酵母菌活性试验其试验菌为：白色念珠菌一可测试增加的菌种。
9.1.2试验方法的选择（稀释-中和法或膜过滤法）所选方法为稀释-中和法时应确定合适的中和剂，使用一种中和剂进行稀释-中和法的证实试验：其中可根据试验经验和已公布的数据选择中和剂。若该中和剂未被证实，则在稀释液或0.0025mo1/L磷酸盐缓冲液中用选择范畴中的中和剂重复证实试验，其中可用中和剂包括以下组合：即30g/L的吐温80g/L皂角30g/L，L-组氨酸1g/L、卵磷脂3g/L、硫代硫酸钠5g/L。
若两种中和剂均未被证实，可采用膜过滤法代替稀释-中和法。注：特殊情况下，有必要将中和剂加入MEA。5
QB/T5483—2020
9.1.3证实与控制程序的通用说明对每种试验菌及每一试验条件（温度，作用时间），执行证实与控制试验。若由于中和作用的问题而需将用于证实与控制程序的中和剂加入MEA，那么用于试验的MEA也应包含等量的该中和剂。9.1.4平衡温度
试验前，使用水浴将所有试剂（试样溶液，试验菌悬液，验证菌悬液，稀释剂，水）平衡到试验温度。检验所有试剂的温度，使其稳定在作用温度。中和剂、洗液和水应恒温于（20土1）℃。9.1.5操作试验菌时的注意事项
加入试验菌悬液或验证菌悬液时，不应接触至试管的上部。9.2稀释-中和法
9.2.1常规条件
可同时进行试验、条件控制以及验证程序。9.2.2试验步骤
杀真菌或酵母菌浓度的确定：
移取1.0mL水至试管中，加入1.0mL试验菌悬液，立即开始计时。混匀，并将试管放入水浴中，控在所选温度，时间2min土10s。该时间结束后，加入8.0㎡L试样悬液，立即开始计时。混匀，并将试管放入水浴中，控制在所选温度，至所选作用时间。恰在作用时间结束前，再次混匀。该时间结束后，移取1.0mL试验混合物样液（Na），并移至含8.0mL中和剂和1.0mL水的试管内。混勺，并置于水浴中，恒温在（20士1）℃。中和10min土10s后，立即混匀，分取两份1.0mL已中和的试验混合物样液（N）（包括中和剂、试样溶液、试验菌悬液），采用倾注平板法或涂布平板法进行培养。
使用倾注平板法时，将每份1.0mL样品移入不同的培养皿，并加入15mL~20mL冷却至（451)℃的MEA。
使用涂布平板法时，将每份1.0mL样品涂布于MEA平板（至少两个）表面培养与计数。9.2.3试验条件控制（A）
证实所选试验条件或检验试验条件下无任何致死效应。可在黑曲霉菌和白色念珠菌中任选其一进行试验即可。取1.0mL水至试管中，加入1.0mL验证菌悬液（可在大肠杆菌，铜绿假单胞菌或金黄色前葡球菌中任选其一进行试验即可），立即开始计时。混匀，置于控制在所选温度的水浴内2min士10s。此时间结束后，加入8.0m水。开始加水时再次计时，混匀。计时结束后，取1.0mL混合物样液，一式两份，采用倾注平板法或涂布平板法培养计数。9.2.4中和剂控制（B）
证实中和剂无毒性。
吸取8.0mL中和剂和1.0mL水至无菌试管内，加入1.0mL验证菌悬液，立即开始计时。混勾控制在（20士1）C水浴内5min士10s，恰在作用时间结束前，立即混匀。作用时间结束时，分取混合物样液1.0mL采用倾注平板法或涂布平板法培养计数。9.2.5方法证实（C）
证实稀释-中和法。
吸取1.0mL水至无菌试管中，加入1.0mL稀释剂，开始计时。加入8.0mL试验中浓度最高的试样溶液，混匀，移至控制在作用温度的水浴内，作用时间结束前，再次混匀。作用时间结束后，移取1.0mL的混合物至含8.0mL中和剂的试管内，立即再次计时。混匀，将试管移至（20土1）C水浴内5min士10s。加入1.0mL验证菌悬液，计时，混匀。将试管移至（20土1）℃6
QB/T5483-2020
水浴内（30士1）min。恰在作用时间结束前，再次混勾。作用时间结束时，分取混合物样液1.0mL，采用倾注平板法或涂布平板法培养计数。9.2.6试验混合物以及控制试验和验证试验混合物的培养计数培养平Ⅲ42h～48h，弃除任何不可计数的平血。做平血计数，确定菌落形成单位数。对黑曲菌需再培养平Ⅲ再培养20h～24h，不再对不能形成明显分离菌落的平血计数，对剩下的平血计数。若菌数增加，只采用较高的数做进步评价。记录每一平Ⅲ的确切菌落数，但若霉菌数多于165，记录>165，酵母菌计数多于330，则记录>330并确定Vc值。
计算试验合物（Na）及证实试验混合物（A、R和C）的菌落数。9.3膜过滤法
9.3.1常规条件
平行进行试验、控制和证实程序，并分别对每一试验条件进行该程序。膜过滤器中配有孔径为0.45μm的薄膜，直径为47mm~50mm的漏斗，并装有50mL洗液。试验报告中应记录所需过滤的时间（若特殊情况下多于1min）。当将薄膜移至琼脂平血表面时，注意放置于平板上时应保证试验菌在薄膜的最上边，并且避免将空气引入薄膜与琼脂表面之间。9.3.2杀真菌或酵母菌浓度试验（Na）移取1.0mL水至试管中，加入1.0mL试验菌悬液，立即开始计时。混勾，并将试管放入水浴中，控制在所选温度，时间2min土10。该时间结束后，加入8.0mL试样悬液，立即开始计时。混匀，并将试管放入水浴中，控制在所选温度，至所选作用时间。恰在作用时间结束前，再次混习。该时间结束后，移取1.0mL试验混合物样液（Na），并移至含8.0mL中和剂和1.0mL水的试管内。混匀，并置于水浴中，恒温在（20土1）C。中和10min土10s后，立即混匀。作用时间结束后，移取0.1mL试验混合物样液（Na），一式两份，并将每份0.1mL样液移至不同的膜过滤器立即过滤。至少用150mL洗液进行过滤，但不应超过500mL。若洗液不是水，过滤50mL水完成本步骤。然后将每一薄膜移至不同MEA平板表面培养计数。9.3.3试验条件控制（A）
证实所选试验条件或检验该试验条件下无任何致死效应。可在黑曲菌和白色念珠菌中任选其一进行试验即可。移取1.0mL水至试管中，加入1.0mL试验菌悬液，立即开始计时。混匀，并将试管放入水浴中，控制在所选温度，时间2min土10s。该时间结束后，加入8.0m试样悬液，立即开始计时。混匀，并将试管放入水浴中，控制在所选温度，至所选作用时间。怡在作用时间结束前，再次混匀。该作用时间结束后，分别移取1.0m该混合物“A”样液，并将每份1.0m样移至不同的膜过滤器。立即过滤，并加入50mL水。然后将每一薄膜移至不同MEA平板表面培养计数。9.3.4过滤控制（B）
证实过滤程序。
移取0.1mL验证菌悬液，一式两份，将每份0.1mL样液移入不同膜过滤器内立即过滤。通过洗液过滤，至少用150mL洗液进行过滤，但不应超过500mL。若洗液不是水，过滤50mL水完成本步骤然后将每一薄膜移至不同MEA平板表面培养计数。对黑山霉菌试样，尽可能等分为4部分，每份都转移到一个独立的膜过滤装置中过滤，即分成8个薄膜来培养。9.3.5方法证实（C）
检验膜过滤法，对预先与产品作用的薄膜上的真菌计数。7
QB/T5483-2020
吸取1.0mL水至无菌试管中，加入1.0mL稀释剂，开始计时。加入8.0mL试验中浓度最高的试样溶液，混匀，移至控制在作用温度的水浴内，作用时间结束前，再次混匀。作用时间结束后，移取1.0mL的混合物至含8.0mL中和剂的试管内，立即再次计时。混匀，将试管移至（20士1）℃水浴内5min士105。加入1.0mL验证菌悬液，计时，混匀。将试管移至（20士1）℃水浴内30土1）min。恰在作用时间结束前，再次混匀。作用时间结束后，移取0.1mL混合物一式两份，并将每份0.1mL样液移入不同膜过滤器内立即过滤。通过洗液过滤，至少用150mL洗液进行过滤，但不应超过500mL。然后用50mL洗液爱盖薄膜，加入0.1mL证实试验悬液，再次加入50mL水立即过滤。然后将每一薄膜移至不同MEA平板表面培养计数。对黑曲霉菌试样，尽可能等分为4部分，每份都转移到一个独立的膜过滤装置中过滤，即分成8个薄膜来培养。
9.3.6试验混合物以及控制与验证混合物的培养计数白色念珠菌培养42h～48h。弃除不可计数的平Ⅲ。做平血计数，确定菌落形成单位数。对黑曲霉菌应再培养平Ⅲ20h~24h，若菌落数还有增加，再进行20h～24h培养，对不能形成明显分离菌落的平血不进行计数。对剩下的平血计数。若菌数增加，只采用较高的数做进一步评价。记录每一平Ⅲ的确切菌落数，但若霉菌数高于55，记录>55，酵母菌计数高于165，则记录>165计算试验混合物（Na）及证实试验混合物（A、B和C）的菌落数。10计算
10.1各参数的计算
10.1.1Vc值的确定
对琼脂平板上真菌计数的一般限制霉菌在15150之间，酵母菌在15~300之间。本标准中，允许有10%的偏差，因此限制范围鑫菌在14～165之间，酵母菌在14～330之间。至于膜上，最高限制是不同的：霉菌在50，酵母菌在150，即，允许有10%的偏差：霉菌在55，酵母菌在165。根据含1mL样品的平血数确定并记录Vc值，以便计算试验菌悬液N，验证菌悬液Nv，和稀释-中和法中的所有计数。
若已用多于一个含1mL样品的平血确定Vc值，则标注每一平m的计数。若一个平血的计数高于330CFU，记录为>330CFU。若采用多于一个含1mL样品的平皿，且其中至少有一个数高于330CFU，则记录Vc值为“大于计数总和”（例如>330CFU、310CFU、302CFU记录>942CFU)。
若Vc值小于14CFU，记录该数（按照<14CFU计算Na）。对于膜-过滤法，膜上的数为Vc值。记录低于最低限制（14CFU）或高于最高限制（165CFU或55CFU）的Vc值。除Na之外，仅考虑各个计数限制的Vc值，以进步计算。10.1.2N与N的计算
试验菌悬液的两个稀释度，用公式（1）计算出菌落数的加权平均值N=
式中：
(nm+0.1n,)10-5
每毫升试验菌悬液所含菌落数，单位为CFU/mL：Y.值总和，单位为CFU；
较低稀释度（10-）的V.值的个数：较高稀释度（10-6）的V。值的个数；.（1)
QB/T5483-2020
与较低稀释度相应的稀释因子
将计算的结果采用四舍六入五留双，修约至两位有效数字，用科学计数法表达结果。示例：
N=139+154+14+17
(2+0.1×2)10-5
10.1.3N的计算
用公式（2）计算Na：
式中：
=1.4727×101.5×107（CFU/mL）2.2×10-
每享升试验混合物在作用时间结束后，以及中和或膜过滤之前每毫升所含的菌落数，单位为CFU/mL；
V.值总和，单位为CFU
V.值个数。
若相同条件下的V。值中有一个或两个低于最低限制或高丁最高限制，以“少于”或“多于”表达其结果。
示例：
a）平行Y值：<14，16
N,-(≤14+16)x10-=te,<150
b）平行V值（倾注平板黑曲霖菌）：>165，>165N,16+165×10=te.>1650
c）平行V值（膜过滤黑曲霉菌）：40，>55N=(40+>55)×10
d）平行V值（每含10mL样液的两个涂布平板白色念珠菌）：>660，600660+600)10
te>6300
10.1.4N与N的计算
用公式（3）（4）计算N与No
式中：
验证菌悬液每毫升所含菌落数，单位为CFU/mL；混合物A、B与C在作用时间开始时每毫升所含菌落数，单位为CFU/mL；V值总和，单位为CFU：
V.值个数。
10.1.5A、B与C的计算
（4）
A、B与C是试验的条件控制（A)，中和剂控制或过滤控制（B)，以及方法证实（C)，在作用时间9
QB/T5483—2020
（A）结束时的每毫升所含菌落数用公式（5）计算A、B与C:
式中：
A、B、C=
每毫升条件控制试验混合物所含菌落数，单位为CFU/mL；一每毫升中和或过滤控制试验混合物所含菌落数，单位为CFU/mL：B
每毫升方法证实试验混合物所含菌落数，单位为CFU/mL；C——V值总和，单位为CFU：
V.值个数。
10.2方法学的证实
10.2.1加权平均数的控制
通过两个连续稀释度的加权平均数计算结果，两个结果的平均值之商不应高于15，且不应低于5。将低于最低限制的结果作为最低限制数（14CFU），将高于各个最高限制的结果作为最高限制数示例：
N：10-5稀释度：168+215CFU/mL，10-7稀释度：20+<14CFU/mL：（168-215）/（20+14）=383/34-11，其商在5与15之间。
10.2.2基本范围
对于每种试验菌，进行检验：
V在1.5×107CFU~5×107CFU之间，7.17≤lgN≤7.70；-No在1.5×10°CFU~5x10°CFU之间，6.17≤IgNa≤6.70N在30CFU与160CFU之间，3.0x10CFU与1.6×10CFU2—A、B、C不小于0.5×Nvs
一加权平均数的控制：商不低于5，且不大于15。10.3结果
10.3.1减少量
减少量（R=N/N）用对数表达。
对于每种试验菌，记录试验菌悬液的菌落数N，以及试验后的Na菌落数。在每一产品浓度及每一试验条件下，用公式（6）分别计算并记录对数值减少量（Ig）：IgR=lgN.-lgN
稀释-中和法与膜过滤法中的控制与证实试验，记录Nio，A、B与C的结果及其与Nro的比较10.3.2活性与非活性试样溶液的控制每次试验，至少有一个浓度可减少4个对数值或更多，以及至少有个浓度减少量应少于4个对数值。
10.3.3试验菌及杀真菌/酵母菌浓度限制10.3.3.1杀真菌浓度
对于每种试验菌，记录通过试验（1gR≥4）的产品的最低浓度。（该浓度对于样品来说，在所选试验条件下是最容易反映产品特性的)。10.3.3.2杀酵母菌浓度
记录对白色念珠菌试验（1gR≥4）的产品的最低浓度，作为杀酵母菌的最佳浓度。10
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。