ICS07.100.30 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5361—2021 出口食品中阪崎克罗诺杆菌检测方法 fusA基因测序法 Detection of Cronobacter sakazakii in export food fusA gene sequencing method 2021-11-22 发布 2022-06-01 实施 中华人民共和国海关总署 发布 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，由中华人民共和国海关总署提出并归口，起草单位为中国海关科学技术研究中心。主要起草人：汪琦、曾静、徐蕾蕊、付溥博、赵晓娟、李丹、马丹、魏海燕、王紫薇、张西萌。 1 范围 本文件规定了出口食品中阪崎克罗诺杆菌的检测方法，适用于出口食品中 Cronobacter sakazakii 的检测，也适用于克罗诺杆菌属其他六个种的检测，包括丙二酸盐阳性克罗诺杆菌（Cronobacter malonaticus）、苏黎世克罗诺杆菌（Cronobacter turicensis）、穆汀斯克罗诺杆菌（Cronobacter muytjensii）、都柏林克罗诺杆菌（Cronobacter dublinensis）、尤尼沃斯克罗诺杆菌（Cronobacter universalis）和康帝蒙提克罗诺杆菌（Cronobacter condimenti）。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的：GB 4789.40《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》、GB/T 6682《分析实验室用水规格和试验方法》、GB 19489《实验室生物安全通用要求》、GB/T 27403《实验室质量控制规范》及相关食品分子生物学检测文件。注日期的引用文件，仅该版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。 3 术语和定义 3.1 管家基因（house-keeping gene）：所有细胞中均要表达的基因，其产物对维持细胞基本生命活动必需，序列高度保守，持续表达。 3.2 Taq DNA 酶（Thermus aquaticus DNA polymerase）：从 Thermus aquaticus 提取的耐热 DNA 聚合酶。 3.3 多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）：基于核酸序列的细菌分型方法，通过 PCR 扩增多个管家基因片段并测序分析菌株差异。 4 缩略语 BHI：脑心浸出液肉汤（brain heart infusion broth） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate） EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid） fusA：延长因子 G 基因（elongation factor G） GTP：三磷酸鸟苷（guanosine triphosphate） MLST：多位点序列分型（multilocus sequence typing） PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） 5 原理 fusA 基因编码细菌延长因子 G，在克罗诺杆菌属细菌中催化 GTP 依赖的核糖体转运。fusA 基因是克罗诺杆菌属 MLST 分型使用的七个管家基因之一，其序列对克罗诺杆菌属分类效果良好，相同 fusA 序列基本不会同时存在于两种克罗诺杆菌中。因此，可利用该基因片段序列信息区分克罗诺杆菌属不同种。 6 试剂和材料 除特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水符合 GB/T 6682 规定。